中华实用诊断与杂志2021年4月第35卷第4期J Chin Pract Diagn T her，Apr. 2021，Vol. 35，No. 4• 329•
•论著•IncRNA PCGEM1对口腔鳞癌细胞生物学行为的调控作用 陈苑\景向东、刘彩奇、李佳殷2
1. 广州中医药大学第一附属医院口腔科，广东广州510405;
2. 广州中医药大学第一附属医院肿瘤中心，广东广州510405
摘要：目的探讨长链非编码RNA( long non-coding RNA，IncRNA)前列腺癌基因表达标记1 ( prostate cancer gene expression marker 1，PCGEM1)对调控miR-506-3p/R AB22A轴介导口腔鱗癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用。方法正 常人口腔角质形成细胞（normal human oral keratinocyte，N H OK)及口腔鳞癌细胞HSC-3、SCC-25、CAL27，采用实时焚光定量PCR 检测细胞IncRNA PCG EM l、miR-506-3p 和RAB22A mRNA 相对表达量，采用Western blot 检测RAB22A 蛋白相对表达量，筛选与N H O K细胞差异最明显的细胞进行后续实验。H SC-3细胞分为5组，分别转染si-PCGEMl (si-PCGEMl 组）、miR-506-3p mimics ( miR-506-3p 组）、si-RAB22A ( si-RAB22A 组）、si-PCGEMl +anti-miR-506-3p (si-PCGEMl + anti-
miR-506-3p 组）、si-PCGEMl + pcDNA-RAB22 A(si-PCGEMl + pcDNA-RAB22A 组），转染48 h 后，采用M T T比法检测5组细胞存活率，采用Tnm sw ell小室实验检测迁移细胞数和侵袭细胞数，采用Western b lo t检测 5组细胞周期蛋白Dl(cyclin D1)、基质金属蛋白酶(matrix metalloprotease，M M P)-2和M M P-9蛋白相对表达量。采用 双荧光素酶活性检测IncRNA PCG EM l、miR-506-3p、RAB22A之间的靶向关系。结果口腔鱗癌细胞HSC-3、SCC-25、CA L27中IncRNA PCGEM1、RAB22A m R N A和蛋白相对表达量高于N H O K细胞（P<0. 05),m iR-506-3p相对表达量低于1\^()1<；细胞（/5<0.05);50>25、0八1^27细胞111丨1^506-39相对表达量低于只503细胞（户<0.05)，日503细胞与NHOK 细胞差异最大。si-PCGEMl + anti-miR-506-3p 组、si-PCGEMl + pcDNA-RAB22A 组细胞存活率[(92. 14 士
9. 21) %、（87. 26士8. 73)%]、迁移细胞数[(201. 56士 20. 16)、（196. 08士 19. 61)个]、侵袭细胞数[( 134. 36 ±13. 43)、
(130. 57± 13. 06)个]高于si-PCGEMl 组[(53. 07 ±5. 31)%、（105. 67 ±10. 57)个、（71. 24士 7. 12)个]、miR-506-3p 组 [(63.04±6. 31)%、（102.02±10. 20)个、（61. 02±6. 10)个]、si-RAB22A 组[(47. 25士4. 73)%、（ 135. 29±13. 53)个、
(51.01±5.11)个](尸<0.05),1^322八、(^(：1丨11〇1、]^1^?-2和1^]\/1?-9蛋白相对表达量高于5卜？00£]^1组、111丨1^-506-3?
组、si-RAB22A 组（P<0. 05)；以上指标si-PCGEMl 组、miR-506-3p 组、si-RAB22A 组组间两两比较及si-PCGEMl + anti-miR-506-3p 组与si-PCGEMl + pcDNA-RAB22A 组比较差异均无统计学意义（P>0.05)。IncRNA PCGEM1 靶向 miR-506-3p，miR-506-3p 靶向RAB22A。结论下调IncRNA PCGEM1 表达可通过调控miR-506-3p/RAB22A 轴抑制口腔鱗癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。
关键词：口腔鱗癌；IncRNA PCGEMl;miR-506-3p;RAB22A；增殖；迁移；侵袭
Role of long non-coding RNA PCGEM1 in regulating the biological behaviors
of oral squamous cell carcinoma
CHEN Yuan1, JING Xiang-dong1, LIU Cai-qi1, LI Jia-yin-
1. Department o f Stomatology，the First A ffilia te d Hospital o f Guangzhou University o f Chinese Medicine
Guangzhou，Guangdong 510405，Ghina •，2. Cancer Center，the First A f f iliated Hospital o f
Guangzhou University o f Chinese Medicine ^Guangzhou <,Guangdoti^ 510405 China Corresponding author：LI Jia-yin, E-mail：**************玻璃夹胶机
Abstract ：Objective To investigate the role of long non-coding RNA (IncRNA) prostate cancer gene expression marker 1(PCGEM1) in regulating the proliferation，migration and invasion of oral squamous cell carcinoma cells mediated by miR-506-3p/RAB22A axis. Methods Real-time fluorescence quantitative PCR was used to detect the relative expressions of IncRNA PCGEM1, miR-506-3p and RAB22A mRNA in normal human oral keratinocyte (NHOK) and oral squamous cell carcinoma HSC-3, SCC-25 and CAL-27 cells. The relative expression of RAB22A protein was detected by Western blot technique. The HSC-3 cells with the most obvious difference from NHOK cells were chosen and divided into si-PCGEMl group which was transfected with si-PCGEMl. miR-506-3p group transfected with miR-506-3p mimics.
电伴热带温控si-RAB22A group co-transfected with si-RAB22A, si-PCG EM l+ anti-miR-506-3p group co-transfected with si-PCGEMl and anti-miR-506-3p, and si-PCGEMl + pcDNA-RAB22A group co-transfected with si-PCGEMl and pcDNA-RAB22A.
After 48 h of transfection, MTT colorimetry was U v S e d to detect the cell survival rates. Transwell chamber experiment was used to detect the numbers of migrated and invaded HSC-3 cells, and Western blot was used to detect the relative expressions of cyclin D1. matrix metalloproteinase (M M P)-2 and MMP-9 proteins in five groups. The dual luciferase
doi： 10. 13507/j. issn. 1674-3474. 2021. 04. 002
基金项目=2020年度广东省中医药局科研项目（20201102)
通信作者：李佳殷，E-mail:**************
• 330•中华实用诊断与杂志2021年4月第35卷第4期J Chin Pract Diagn Ther,A pr. 2021，Vol. 35，No. 4
activity was used to detect the targeting relationships among IncRNA PCGEM1, miR-506-3p and RAB22A. Results The relative expressions of IncRNA PCGEM1 and RAB22A mRNAs and proteins were higher in HSC-3, SCC-25 and CAL-27 cells than those in NHOK cells. The relative expression of miR-506-3p mRNA was lower in HCC-3 cells, SCC-25 cells and CAL-27 cells than that in NHOK cells (P<C0. 05), was lower in SCC-25 cells and CAL-27 cells than that in HSC-3 cells (P<C0. 05)» and showed greatest difference between HSC-3 cells and NHOK cells. The cell survival rate was high, the numbers of migrated cells and invaded cells were larger in si-PCGEMl + anti-miR-506-3p group ((92. 14 + 9. 21)%, 201.56±20. 16，134. 36 ±13. 43) and si-PCGEMl + pcDNA-RAB22A group ((87. 26 ±8. 73)%，196. 08 +19.61，130. 57±13. 06) than those in si-PCGEMl group ((53. 07士5. 31) %，105. 67士 10. 57，71. 24士7. 12)，miR-506_3p group ((63. 04±6. 31)%, 102. 02土 10. 20, 6
1. 02±6. 10) and si-RAB22A group ((47. 25±4. 73)%，135. 29±13. 53, 51. 01 土
5. 11) (P<C0. 05), the relative expressions of RAB22A, cyclin D1, MMP-2 and MMP-9 proteins were higher in
si-PCGEMl +anti-miR-506-3p group and si-PCGEMl +pcDNA-RAB22A group than those in si-PCGEMl group, miR-506-3p group and si-RAB22A group (P<C〇. 05), and all the above indexes showed no significant differences among si-PCGEMl group, miR-506-3p group and si-RAB22A group as well as between si-PCGEMlH-anti-miR-506-3p group and si-PC G EM l+ pcDNA-RAB22A group (P〉0. 05). IncRNA PCGEM1 targeted miR-506-3p，and miR-506-3p targeted RAB22A. Conclusion Down-regulating IncRNA PCGEM1 inhibits the proliferation, migration and invasion of oral squamous cell carcinoma cells by regulating the miR-506-3p/RAB22A axis.
Keywords：oral squamous cell carcinoma；IncRNA prostate cancer gene expression marker 1；miR-506-3p；RAB22A；
proliferation；migration；invasion
口腔鱗癌约占口腔癌的90%[1]，患者5年生存 率<50%[-;]。长链非编码R N A(long non-coding RNA，I
ncRNA)是各种基因表达和生物学过程中的重要调节剂。前列腺癌基因表达标记1 (prostate cancer gene expression marker 1，PCGEM1)是一'种致癌基因，在胃癌[3]、前列腺癌[4]中表达上调，可诱导 癌细胞的增殖、迁移、侵袭或抑制凋亡。PCGEM1通 过靶向m R-182/F B X W ll轴促进宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭。前列腺癌细胞系中miR-506-3p表达 下调可发挥抑癌作用，多肽-N-乙酰氨基半乳糖转移酶 4是mlR-506-3P的直接靶标，可逆转肿瘤的抑制功能[6]。RAB22A是一种癌蛋白，在肝癌中高表达，发 挥促癌基因功能[7]。本研究探讨口腔鳞癌细胞IncRNA PCGEM1表达情况及其是否通过miR-506-3p/RAB22 A轴调控口腔鱗癌细胞的增殖、迁移和侵袭过程，为口腔鳞癌发病分子机制研究奠定基础，报道如下。
1材料与方法
1.1 一般材料正常人口腔角质形成细胞（normal human oral keratinocyte,N H O K)、口腔鱗癌细胞HSC-3、SCC-25、CAL-27(美国典型培养物保藏中心），均在含体积分数10%胎牛血清、100 u/m L青霉素/链 霉素的DM EM培养基，37 °C，体积分数5%C()2饱和 湿度培养箱中培养，培养至对数生长期进行实验。
1.2方法
1.2.1 主要试剂 si-PCGEM l、miR-506-3p mimics、anti-miR-506-3p、pcDNA-RAB22A、si-RAB22 A
(上海 GenePharma公司），兔抗RAB22A、细胞周期蛋白D1 (cyclin D1)、基质金属蛋白酶（matrix metalloprotease,MMP)-2、MMP-9 抗体、山羊抗兔二 抗（英国Abeam公司）。
1.2.2 实时荧光定量P C R检测IncRNA PCGEM1、miR-506-3p、RAB22A m R N A相对表达量 4种细胞使用TR Izol试剂抽提总RN A，cD N A合成采用反转录试剂盒，应用ABI 7500 P C R系统，采用实时荧光定 量P C R进行检测。引物序列见表1。反应体系：12.5 pL SYBR-Green，5 cDNA，1pL 正向引物，1pL反向引物，RNase-free Water 补足 25 fiL。反应 条件：95 °C30 s;95 °C 5 s，60 °C34 s，40 个循环；
95 °C15 s,60 °C60 s,95 °C15 s。将 IncRNA PCGEM1、RAB22A mRNA相对表达归一化 为p-actin，将miR-506-3p的相对表达归一化为U6，计 算方法为2^'、筛选与N H O K细胞差异最明显的口腔鳞癌细胞进行后续实验。
表1引物序列表
项目引物序列
IncRNA PCGEM1正向引物
IncRNA PCGEM1反向引物
miR-506-3p正向引物
miR-506-3p反向引物
RAB22A正向引物
RAB22A反向引物
5 ’-TCCACCC A A TACAC A GGAT-3 ’
5，-AATTGGGAGCTGATGAGGAC-3，
5 ’-T A A GGC A CCCTTCTG A GT A G A-3 ’
光模块安装5 ’-GCGAGC A C A G A A TTAATACGAC-3，
5，-TTGT A GTTGCC A TTGCAGGA-3 ’
5，-AGGCTGTCTTCGGAGTTTGA-3 ’
p-actin正向引物
p-actin反向引物
U6正向引物
U6反向引物
5 A A A CTGGAACGGTG A AGGTG-31
5，-AGAGAGTGGGGTGGCTTTT-3’
5，-TGACACGCAAATTCGTGA A GCGTTC-3，
太阳能光伏控制器5，-CC A GTCTC A GGGTCCG A GGT A TTC-3 ’
1.2.3 Western b lo t法检测RAB22A蛋白相对表达 量4种细胞在R IP A裂解缓冲液中裂解，采用BCA 蛋白测定试剂盒测定蛋白质浓度。使用SDS-PAGE 分离40吨蛋白质，转移至P V D F膜。将P V D F膜在 体积分数5%脱脂牛奶中封闭，并与一抗孵育。其中 一抗RAB22A稀释度为1:1 000，对照p-actin稀释 度为1 : 2 000。随后，将P V D F膜与山羊抗兔二抗孵 育，并使用E C L试剂检测蛋白质表达，以(3-actin灰度 值为对照，计算RAB22A蛋白相对表达量。筛选与
中华实用诊断与杂志2021年4月第35卷第4期J Chin Pract Diagn T her，Apr. 2021. Vol. 35, No. 4• 331•
NH()K细胞差异最明显的口腔鳞癌细胞进行后续
实验。
1.2.4细胞分组及转染将HSC-3细胞接种于6孔 板，细胞融合至70%时，分为si-P C G E M l组、miR-506-3p组、si-RAB22A组、si-PCGEMl+ anti-miR-506-3p组和 si-PCGEMl+pcDNA-RAB22A 组•采用Lipofectamine2000试剂分别转染
si-PCGEM l,miR-506-3p mimics、si-RAB22A、si-PCGEMl+anti-miR-506-3p、si-PCGEM1+ PcDNA-RAB22A。转染48 h后进行后续实验。
1.2.5 M T T比法检测细胞存活率各组HSC-3 细胞（2X103个/孔）置于96孔培养板中，48 h后评估 细胞存活情况。M T T(5 g/L)添加到每孔中，4 h后继 续添加150 y L二甲基亚砜。在酶标仪上于490 n m测 量吸光度（optical density,OD)值。细胞存活
率（％) =(l—O D值实验a/O D值对照组）X100%。
1.2.6 Tnm sw ell小室实验检测迁移细胞数和侵袭细胞数使用预涂有M atrigel基质凝胶的Transwell 小室检测侵袭细胞数，500 含体积分数10%胎牛血
清的D M E M培养基被添加到下腔室，转染后的HSC-3细胞在无血清D M E M培养液中饥饿过夜。随 后，在200 y L无血清培养基中重悬（1X10个），并将 其加入上腔室。24 h后，对人侵膜下表面的细胞进行 固定、结晶紫染、计数。检测迁移细胞数时，Transwell上室不铺M atrigel基质凝胶，其余操作同 侵袭细胞数检测。
1. 2. 7 Western blot 法检测RAB22A、cyclin D1、MMP-2和MMP-9蛋白相对表达量收集HSC-3细 胞，检测 RAB22A、cyclin D l、MMP-2 和 MMP-9 蛋白 相对表达量，方法同1.2. 3。
1.2.8 双奕光素酶报告实验采用Starbase预测 IncRNA PCGEM1和 miR-506-3p、miR-506-3p和RAB22A的核苷酸序列是否存在互补配对现象。HSC-3细胞分为miR-506-3p组和miR-NC.组，分另I J 转染miR-506-3p mimics和 miR-NC。构建含有miR-506-3p结合位点的IncRNA PCGEM1-野生型(W T)及突变型（M U T)报告基因载体，miR-506-3p组 和miR-N C组分别共转染IncRNA PCGEM1-W T和 IncRNA PCGEM1-M U T；构建含有 miR-506-3p 结合 位点的RAB22A-3’U T R野生型（W T)及突变型(M UT)报告基因载体，miR-506-3p组和miR-N C组 细胞分别共转染RAB22A-3'UTR-W T和RAB22A-3’UTR-M U T。转染48 h后检测2组细胞分别共转染 IncRNA PCGEM1 和 RAB22A-3’UTR 时的双荧光素 酶活性。
1.2.9 不同转染条件下HSC-3细胞miR-506-3p相 对表达量比较将HSC-3细胞分为pcDNA-N C组、pcDNA-PCGEMl 组、si-NC 组、si-PCGEMl 组，分别 转染pcDNA-NC、pcDNA-PCGEM l、si-NC, si-PCGEM l，检测miR-506-3p相对表达量，方法同1.2.2。
1. 2. 10增强或沉默miR-506-3p表达的HSC-3细胞 RAB22A蛋白相对表达量比较HSC-3细胞分为miR-NC组、miR-506_3p组、anti-miR-NC组、anti-miR-506-3p组，分别转染miR-NC、miR-506_3p mimics、anti-miR-NC、anti-miR-506-3p，检测RAB22A蛋白相对表达量，方法同1.2.3。
1.3统计学处理应用SPSS 2
2. 0软件进行统计分 析，计量资料以均数士标准差(x±s)表示，2组比较采 用^检验，多组比较采用单因素方差分析，组间两两比 较采用SNK-g检验；检验水准《=0.05。
2结果
2.1 4 种细胞IncRNA PCGEM1、miR-506-3p、RAB22A m R N A和蛋白相对表达量比较HSC-3、SCC-25、CAL-27 细胞 IncRNA PCGEM1、RAB22A m R N A和蛋白相对表达量高于N H()K细胞(P<0. 05)，miR-506-3p相对表达量低于N H O K细 胞（P<0. 05)。SCC-25、CAL-27 细胞 miR-506-3p 相 对表达量低于HSC-3细胞（P<0. 05) .SCC-25细胞与 CAL-27细胞比较差异无统计学意义（P>0.05)。选 择与N H O K细胞差异最大的HSC-3细胞进行后续实 验。见表2及图1。
表2 4 种细胞IncRNA PCGEM1、miR-506-3p、
RAB22A m R N A和蛋白相对表达量比较（.r±s)
项目IncRNA PCGEM1m iR-506-3p RAB22A mRNA RAB22A蛋白
NH0K 1.00+0.11 1.03+0.10 1.05舰 120.31±0.03
HSC-3 2.96±0.30a0.33±0.03a 1.99±0.20a 1.12±0.11a SCC-25 2.38+0.2430.46 士0.05a b 1.68 士0.17a0.96±0.10a CAL-27 2.13+0.20a0.42 士0.04a b 1.79 士0.18a0.86±0.09a
F值121.843242.72051.244143.180
P值<0.001<0.001<0.001<0.001注：a与N H O K细胞比较，P<0. 〇S; b与H S C-3细胞比较，P<0. 05。
12 3 4弯曲玻璃
注为N H O K细胞；2为HSC-3细胞；3为SCC-25细胞；4为 CAL-27 细胞。
图14种细胞RAB22A蛋白表达W e s te rn b lo t图
2.2 5组细胞存活率比较培养48 h，5组细胞存活率比较差异有统计学意义（•？<〇•05)。si-PCGEMl + anti-miR-506-3p 组、si-PCGEMl +pcDNA-RAB22A 组细胞存活率高于s i-P C G E M l组、m iR-506-3p组、s.i-RAB22A组（f><0. 05)，si-PCGEMl 组、miR-506-3p 组、si-R A B22A组组间两两比较及si-PCGEMl + anti-miR-506-3p 组与 si-PCGEMl 十pcDNA-RAB22A 组比较差异均无统计学意义（P>〇. 05)。见表3
。
• 332•中华实用诊断与杂志2021年4月第35卷第4期JC hinP ractD iagn T her，Apr. 2021，Vol. 35, No. 4
a b e d e
注：a为si-PCG EM l组，可见细胞发生迁移、侵袭；b为miR-506-3p组，可见迁移细胞数、侵袭细胞数与Si-PCGEM1组相近；£：为si-RAB22A组，可见迁移细胞数、侵袭细胞数与si-PC G EM l组相近；d为Si-PCGEMl + anti-miR-506-3p组，可见迁移细胞数、侵袭细胞数骤增；e为si-PCGEMl + PcDNA-RAB22A组，可见迁移细胞数、侵袭细胞数骤增。
图2 5组细胞Transw ell小室实验图（结晶紫染，X200)
2. 4 5 组细胞 RAB22A、cyclin D1、MMP-2 和 MMP-
9蛋白相对表达量比较5组细胞RAB22A、cyclin D l、MMP-2和MMP-9蛋白相对表达量比较差 异有统计学意义（P<〇. 05 )。si-PCGEMl+ anti-miR-506-3p 组、si-PCGEMl +pcDNA-RAB22A 组 RAB22A、cyclin D l、MMP-2 和 MMP-9 蛋白相对 表达量高于s i-P C G E M l组、miR-506-3p组、si-RAB22A组（P<0. 05)，si-PCGEMl 组、miR-506-3p 组、si-RAB22A组组间两两比较及si-PCGEMl + anti-miR-506-3p组与 si-PCGEM l+pcDNA-RAB22A 组比较差异均无统计学意义（P>0. 05 )。见表4 及图3。
表4 5 组细胞RAB22A、cyclin D1、MMP-2 和
M M P-9蛋白相对表达量比较（1±5)
组别R A B22A C y c lin D l M M P-2M M P-9
s i-P C G E M l ^0.43+0.050.38士0.050.33+0.030.40士0.(H
m iR-506-3p组0.40士0.040.45士0.050.40+0.040.32+0.03
s i•臟2A组0.48+0.050.35士0.040.4:2士0. O S0.30士0.03
s i*P C G E M l+a n tl*m iR-506-3p组0.96±0.10a b c0.88+0.09a b c0.76±0.08a b c0.72土0.07a b c
s h P C G E M l+p c D N A-R A B22A组0.92±0.09a b c0.82±0.08a b c0.70+0.07a b c0.68+0.07a b c
F值140.320137.197103.859138.000
P值<0.001<0.001<0.001<0.001注：a 与si-PCGEMl 组比较，_P<〇. 05 ; b 与miR-506-3p 组比较，P<0. 05;c 与si-RAB22A 组比较，P<0. 05。
RAB22A
cyclin D1
注：1为si-PCGEMl 组；2 为miR-506-3p 组；3 为si-RAB22A 组;
4 为si-PCGEMl +anti-miR-506-3p 组；
5 为si-PCGEMl +
pcDNA-RAB22A 组。
图3 5 组细胞RAB22A、cyclin D l、MMP-2 和MMP-9 蛋白
表达Western blot 图
2.5双荧光素酶报告实验结果Starbase预测发现 IncRNA PCGEM1和miR-506-3p具有耙向结合位点(图4a)。双荧光素酶活性检测结果显示，miR-506-3p 组共转染IncRNA PCGEM1-W T时的细胞荧光素酶活性低于m i R-N C组（P<0.05 )，共转染IncRNA PCGEM1-M U T时的细胞荧光素酶活性与m iR-N C组比较差异无统计学意义（P>0. 05 )。Starbase预测发现miR-506-3p和RAB22A存在耙向 结合位点（图4b)。双荧光素酶活性检测结果显示，miR-506-3p组共转染 RAB22A-3’UTR-WT时的细胞
表3 5组细胞存活率、迁移细胞数、侵袭细胞数比较U±s)
组别细胞存活率^迁移细胞数/个侵袭细胞数/个
s i-P C G E M l 组53.07士5.31105.67士10.577U4 士7.12
m iR-506-3p组63.04+6.31102.02士10.2061.02士6.10
s rR A B22A组47.25+4.73135.29±13.5351.01士5.11
s i"P C G E M l+a n ti*m iR-506-3p组92.H士9.21a b c201.56+20.16a b c134.36il3.43a b e
s i"P C G E：M l+p c D N A-R A B22A组87.26±8.73a b c196.08+19.61a b c130.57+13.06a b c
F I72.94687.441153.044
P值<0.001<0.001<0.001注：a 与si-PCGEMl 组比较，f<0. 05; b 与miR-506-3p 组比较，f<0. 05;c 与si-RAB22A 组比较，f<0. 05。2.3 5组迁移细胞数、侵袭细胞数比较培养48h，5组迁移细胞数、侵袭细胞数比较差异有统计学意义(P<0.05)。si-PCGEMl十anti-miR-506_3p组、si-PCGEM1+pcDNA-RAB22A组迁移细胞数、侵袭 细胞数多于s i-P C G E M l组、miR-506-3p组、si-RAB22A组（P<0. 05)，si-PCGEMl 组、miR-506-3p 组、si-RAB22A组组间两两比较及si-PCGEMl + anti-miR-506-3p组与 si-PCGEM l+pcDNA-RAB22A 组比较差异均无统计学意义（P>〇. 05)。见表3及 图2。
i l w
頦涅银槲
蝉
中华实用诊断与杂志2021年4月第35卷第4期JC hinP ractD iagn Ther,A pr. 2021, Vol. 35, No. 4• 333.
荧光素酶活性低于m iR-N C组（PC O.05)，共转染RAB22A-3’U T R-M U T时的细胞荧光素酶活性与m iR-N C组比较差异无统计学意义（P>0.05 )。见表5。
| IncRNA PCGEM1-W T 5'... 3'|
|m iR-506-3p 3'...5. |
| IncRNA PCGEM1-M UT5'... 3'|
a
|RAB22A-3,UTR-W T 5'... 3'|
n m n
|m iR-506-3p 3'...5* |
|RAB22A-3'UTR-M UT5'... 3*|
b
注：a 为Starbase 对miR-506-3p 和IncRNA PCGEM1 结合的预测;
b 为Starbase 对RAB22A 和miR-506-3p 结合的预测。
图4 Starbase 对miR-506-3p 和IncRNA PCGEM1
及RAB22A和miR-506-3p结合预测示意图
表5 miR-NC组与miR-506-3p组细胞共转染PCGEM1、RAB22A-3’U T R野生型（W T)及突变型（M UT)时
双荧光素酶活性比较
组别I n c R N A P C G E M l-W T I n c R N A P C G E M1-M U T R A B22A-3'U T R-W T R A B22A-3T O M U T m i R-N C组1.00+0. II1.06+0.121.00+0.111.02士0.10
m iR-506-3p组0.35±0.041.04±0.100.38+0.041.0410,12
/I16.6600.38415.8910.384
P值<0.0010./06<0.0010.706
2. 6 不同转染条件下细胞m iR-506-3p和RAB22A 蛋白相对表达量比较p c D N A-P C G E M l组 m iR-506-3p相对表达量低于p c D N A-N C组 (P<0. 05),si-PCGEM1 组 miR-506-3p 相对表达量高 于si-N C
电解阳极板
组（P<0.05)，即上调P C G E M1表达可减少 m iR-506-3p表达，下调P C G E M1表达可增加miR-506-3p表达。miR-506-3p 组 RAB22A 蛋白相对 表达量低于miR-NC 组（j P<0_05)，anti-miR-506-3p 组R A B22A蛋白相对表达量高于and-rm R-N C组 (Pc^O. 05)，即上调 miR-506-3p 表达可降低 RAB22A 蛋白表达，下调miR-506-3p表达可增加R A B22A蛋 白表达（P<〇. 05)。见表6-7及图5。
表6不同转染条件下细胞miR-506-3p
相对表达量比较士 S)
组另miR-506-3p
pcDNA-NC 组 1.00 士0. 13
pcDNA-PCGEMl 组0. 45士0. 05a
si-NC 组 1.04 士0.11
si-PCGEMl 组 1. 69士0. 17b
F值153.397
P值<0. 001
注：a与pcD N A-N C组比较，P<0. 05; b与si-N C组比较，P<0.05o
表7不同转染条件下细胞RAB22A蛋白
相对表达量比较G±s)
组另l j RAB22A蛋白
miR-NC 组 1. 12±0. 11
miR-506-3p 组0. 40 士0. 04a
anti-miR-NC H. 1. 10 士 0. 10
anti-miR-506-3p 组 1. 38士0. 15b
F值137.351
P值<0. 001
注：a 与miR-NC 组比较•P<0. 05 ；
P<0.05o
b 与anti-miR-NC 组比较，
12 3 4
rab22a
注：1为miR-NC 组；2 为miR-506-3p 组；3 为anti-miR-NC 组；4 为anti-miR-506-3p 组。
图5不同转染条件下细胞RAB22A蛋白表达Western b lo t图3讨论
研究[89]发现，IncRNA通过转录、表观遗传和转录后水平调控基因表达而调节肿瘤的生物学功能•其 异常表达是参与癌症发病机制的关键顺式或反式调节 因子，提示IncRNA可能成为人类肿瘤辅助诊断或的新靶点。本研究结果显示，口腔鳞癌HSC-3、SCC-25X A L-27 细胞 IncRNA PCGEM1相对表达量 明显高于N H O K细胞，与相关研究结果^5]相符.提 示IncRNA PC.GEM1可能作为口腔鱗癌的致癌因子，促进肿瘤进展。本研究结果显示，si-PCGEMl + anti-miR-506-3p 组、si-PCGEMl +pcDNA-RAB22A 组细胞存活率、迁移细胞数、侵袭细胞数及RAB22A、cyclin D l、MMP-2和MMP-9
蛋白相对表达量均高于 si-PCGEMl 组、miR-506-3p 组、si-RAB22A 组；说明 低表达IncRNA PCGEM1可抑制HSC-3细胞存活、迁移、侵袭及cyclin D l、MMP-2和MMP-9蛋白的表 达，提示IncRNA PCGEM1对口腔鳞癌的发生、发展 有促进作用，下调其表达可有效抑制口腔鱗癌细胞增殖、迁移和侵袭。研究[1°]发现IncRNA PCGEM1可 通过上调R hoA途径而诱导卵巢上皮癌细胞的增殖、迁移和侵袭，减少细胞凋亡。IncRNA PCGEM1可能 通过作为miR-129-5p的竞争性内源R N A上调STAT3表达，影响子宫内膜癌的发生、发展，促进子宫 内膜癌细胞的增殖、迁移和侵袭，抑制细胞凋亡[11]。因此，本研究可为IncRNA PCGEM1作为致癌基因影 响肿瘤进程的观点提供新证据。
m iR N A可调节与肿瘤发生有关的过程（如炎症、细胞周期、应激反应、分化、凋亡和侵袭），
是潜在的致
