·短篇论著·
ｓｉＲＮＡ干扰ｌｎｃＲＮＡＡＮＲＩＬ表达对经脂多糖诱导的结肠上皮细胞的影响及作用机制 陈 君 姜淑贤
【摘要】 目的 观察小干扰Ｒ
ＮＡ（ｓｉＲＮＡ）干扰长链非编码ＩＮＫ４基因座的反义ＲＮＡ（ｌｎｃＲＮＡＡＮＲＩＬ）表达对经脂多糖（ＬＰＳ）诱导的结肠上皮细胞（ＦＨＣ）
的影响。方法 将ＦＨＣ细胞随机分为４组：空白组（未作处理），模型组（ＬＰＳ），对照组（ＬＰＳ＋ｓｉＲＮＡ ＮＣ转染）和ｓｉＲＮＡ ＡＮＲＩＬ组（ＬＰＳ＋ｓｉＲＮＡ ＡＮＲＩＬ转染）。用经ＬＰＳ诱导 ＦＨＣ细胞模拟ＵＣ样改变。观察干扰ｌｎｃＲＮＡＡＮＲＩＬ表达对经ＬＰＳ诱导的ＦＨＣ细胞活力、细胞凋亡的影响，并探究其与Ｔｏｌｌ样受体４（ＴＬＲ４）表达的关系。结果 与空白组比较，模型组ＦＨＣ细胞吸光度（ＯＤ）值降低，凋亡率、ｌｎｃＲＮＡＡＮＲＩＬｍＲＮＡ、ＴＬＲ４ｍＲＮＡ和ＴＬＲ４水平升高，差异均有统计学意义（犘＜０．０５）。与对照组相比，ｓｉＲＮＡ
ＡＮＲＩＬ组细胞ＯＤ值升高，凋亡率、ｌｎｃＲＮＡＡＮＲＩＬｍＲＮＡ、ＴＬＲ４ｍＲＮＡ、ＴＬＲ４水平降低，差异均有统计学意义（犘＜０．０５）。结论 抑制ｌｎｃＲＮＡＡＮＲＩＬ表达可对经ＬＰＳ诱导的ＦＨＣ细胞起到一定保护作用，增强细胞活力并抑制其凋亡，其机制可能与调控ＴＬＲ４有关。
【关键词】 溃疡性结肠炎；
速录器
小干扰ＲＮＡ；ｌｎｃＲＮＡＡＮＲＩＬ；脂多糖；Ｔｏｌｌ样受体４ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３ ５３４Ｘ．２０２０．０４．０１６ 作者单位：２６５７００ 龙口市人民医院消化内科
溃疡性结肠炎（
自动排污阀ＵＣ）是一种以黏膜炎性反应为主要病理特征的慢性非特异性结肠炎性疾病［１
］。近年来调查结果显示，中国的ＵＣ发病率呈上升趋势，
且患者以青壮年为主［２ ４］。ＵＣ严重影响了患者的生存质量，也给社会造成沉重的医疗经济负担［５］。ＵＣ患
者长链非编码ＩＮＫ４基因座的反义ＲＮＡ（ｌｎｃＲＮＡＡＮＲＩＬ
）表达明显增多，是ＵＣ患者可能的生物学标志物［６
］。ＵＣ患者炎性因子Ｔｏｌｌ样受体４（ＴＬＲ４
）的表达量明显增多［７］。推测ｌｎｃＲＮＡＡＮＲＩＬ可能通过
在ＵＣ中调控ＴＬＲ４发挥作用。本实验以经脂多糖（ＬＰＳ）诱导的结肠上皮细胞ＦＨＣ为研究模型，
通过观察ｌｎｃＲＮＡＡＮＲＩＬ对ＦＨＣ细胞凋亡及对炎性因子ＴＬＲ４的影响，探讨其在ＵＣ中的具体作用，以期为ＵＣ的提供新的思路。
１ 材料与方法
pigi１．１ 细胞培养、
分组及干预首先配制细胞培养液，在ＤＭＥＭ培养基（美国Ｇｉｂｃｏ公司）中加入２．５％胎牛血清。将胎儿结肠上
彩油泥
皮细胞ＦＨＣ（上海冠异生物公司）在３７℃、５％ＣＯ２、
１００％湿度培养箱中进行培养。每２～３ｄ更换１次培养液，５～６ｄ传代１次。将ＦＨＣ细胞随机分为４组：空白组、模型组、对照组和ｓｉＲＮＡ ＡＮＲＩＬ组。空白组不予处理，
模型组、对照组和ｓｉＲＮＡ ＡＮＲＩＬ组用８μｇ／ｍＬＬＰＳ２４ｈ诱导ＦＨＣ细胞模拟ＵＣ样改变，
检测细胞活力和炎性因子水平来判断ＵＣ细胞模型是否造模成功［８］
。当ＦＨＣ
细胞汇合度大约达到５０％时，对照组和ｓｉＲＮＡ ＡＮＲＩＬ组分别转染ｓｉＲＮＡ ＮＣ及ｓｉＲＮＡ
ＡＮＲＩＬ［９］
，经过６ｈ后，将培养液换成含１０％血清的ＤＭＥＭ培养基，培养４８ｈ后，进行下一步实验。１．２ ＭＴＴ法检测细胞活力将ＦＨＣ细胞接种于９６孔板中，进行转染，４８ｈ后，舍弃培养液，每孔加入２０μＬ终浓度为０．５ｍｇ／ｍＬ的ＭＴＴ，３７℃继续培养４ｈ后，舍弃上清液，每孔加入１５０μＬ的二甲基亚砜（ＤＭＳＯ），通过震荡使紫结晶物充分溶解，使用酶标仪（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＭｕｌｔｉＳｋａｎＧｏ）于５６０ｎｍ波长
处测吸光度（ＯＤ）
值［１０
］。·
８７２·国际消化病杂志２０２０年８月第４０卷第４期 ＩｎｔＪＤｉｇＤｉｓ，Ａｕｇ
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