安徽医科大学学报 i4cia2019 Jan;54(1)• 21 •网络出版时间：2019 -1 -317:25 网络出版地址：k n s. cnki. net/kcm s/detail/34.1065. r.20181230.1809.005. html LncRNA-HOTTIP促进肺癌发生发展的作用及机制研究 杨莉^，孙耕耘\秦一雨3，葛安兴3
摘要目的探讨长链非编码RNA-HOTTIP在肺癌发生发展中的作用和机制。方法通过芯片技术检测肺癌和癌旁组织中的LncRNA表达谱并以Real-time P C R对结果进行验证，分析其表达水平与临床病理因素之间的关系；通过CCK-8实验检测H0TTIP对肺癌细胞增殖的影响、Aimexin V/PI 双染法检测H0TTIP对肺癌细胞凋亡的影响、Western blot检测H0TTIP对增殖和凋亡相关蛋白表达的影响。结果 锁扣>diat超级电容器结构H0TTIP在肺癌组织和细胞中表达异常增高，其表达水平与肿瘤大小、淋巴结转移和TNM分期正相关；功能学实验显示H0TTIP在体外可促进肺癌细胞增殖，而沉默其表达则能诱导凋亡；沉默H0TTIP表达可促进b a x和caspase-3活性片段增多，抑制bcl-2表达，进而诱导凋亡。m iR-137与H0TTIP 存在潜在结合位点，并且miR-137表达水平与H0TTIP呈反比。结论H0TTIP可能通过竞争性结合miR-137，减弱后者的抑癌作用，进而促进肺癌细胞发生发展。
关键词肺癌;HOTTIP; miR-137
中图分类号R 734.2
文献标志码A文章编号1000-1492(2019)01 -0021 -07 doi ： 10.19405/j. cnki. issnlOOO - 1492.2019.01.005
肺癌是人类最常见的恶性肿瘤，我国是肺癌大 国，年新发病例数约占全球总数一半，并呈逐年上升 趋势[1]。近年来，手术、放化疗等手段日益进 展，但肺癌整体疗效并不理想[2]3。研究肺癌发生发 展的分子机制对改善目前中晚期肺癌患者预后具有 重大意义。长链非编码R N A(long non-coding R N A，L n c R N A)是一类长度大于200 b p、不编码蛋白的R N A，通过多种途径调控基因表达，发挥生物学功 能。近年来L n c R N A与肿瘤之间的关系逐渐受到重 视，它们作为原癌基因发挥促癌作用，也能作为抑癌
2018 -08-07 接收
基金项目：国家自然科学基金青年基金项目（编号:81702422)；江苏 省卫生职业技术教育研究立项课题（编码:J201606)；盐城
市科学技术局项目（编码:YK2016044)
作者单位:1安徽医科大学第一附属医院呼吸内科，合肥230001 2安徽医科大学铜陵临床学院呼吸内科，铜陵244000
滑动水口机构
3江苏医药职业学院临床医学院，盐城224000
作者简介：杨莉，女，硕士研究生；
孙耕耘，男，主任医师，教授，博士生导师，责任作者,£-
mail ：sungengy@ 126. com 基因发挥抑癌作用[3_4]。该研究通过长链非编码R N A芯片对肺癌组织和癌旁组织中差异表达的L nc R N A进行筛查，发现 H0X A 远端转录本（H0X A transcript at the distal tip,H O T T I P)基因表达显著增 高，并通过一系列细胞和分子生物学实验探讨h o t-t i p对肺癌细胞增殖和凋亡的影响和机制。
1材料与方法
1.1 材料携带 H O T T I P-s h R N A、H O T T I P全长序 列的慢病毒以及空白慢病毒购自上海伯豪生物科技 有限公司；特异性H O T T I P原位杂交检测试剂盒(H O T T I P R N A s c o p e 2.0)购自美国 A d v a n c e d Cell Diagnostic公司;D M E M高糖细胞培养液购自美国G i b c o公司；胎牛血清购自美国H y c l o n e公司;TRIzol 裂解液购自美国S i g m a公司；P C R引物由上海生物 工程技术服务公司合成；反转录试剂盒购自日本T a k a r a公司;Annexin V-F I T C/P I双染试剂盒购自美 国公司；蛋白提取试剂盒购自中国碧云天公司；P V D F膜购自美国Millipore公司；所有抗体包括一 抗和
二抗均购自美国Santa C r u z公司；E C L化学发 光试剂盒购自美国Pierce公司；X-O M A T-B l u e film 购自美国K o d a k公司。双锯片切割机
水化硅酸钙
1.2方法
1.2.1组织标本收集收集铜陵市人民医院胸外科行肺癌手术的80例肺癌患者，其中男52例，女 28例；年龄37 ~ 75岁，中位年龄64岁；肺癌肿块切 除后采用福尔马林予以固定保存，同时切除肿块周 围2 c m以外的癌旁组织作为对照组。所有80例患 者均签署了知情同意书和手术同意书。
1.2.2 L n c R N A芯片检测采用T R I z o l提取3例 肺癌组织及癌旁组织中的总R N A，然后送公司进行 L n c R N A芯片检测（美国Agilent公司）。该芯片可 检测41053条L n c R N A和29417条m R N A。检测结 果采用Real-time P C R进彳了验证。
1.2.3细胞培养人肺癌细胞株95-D、A549和人 永生化肺上皮细胞株B E A S-2B购自中国科学院上 海分院细胞库。三种细胞均采用添加10%胎牛血 清和1%青链霉素的高糖D M E M培养基培养于
