·短篇论著·
郭 剑 袁丽侠
【摘要】
目的 探究食管鳞状细胞癌（ESCC ）组织中长链非编码RNA-牛磺酸上调基因1（lncRNA-TUG1）的表达水平及临床意义。方法 收集2013年10月至2015年10月在渭南市中心医院行外科手术的103例ESCC 患者的肿瘤组织及癌旁组织标本。采用实时定量PCR （real time qRT-PCR ）法测定lncRNA-TUG1的表达水平。采用Cox 比例风险回归模型分析ESCC 患者预后的影响因素。结果 lncRNA-TUG1在ESCC 组织中的表达水平显著高于癌旁组织，差异有统计学意义（P ＜0.01）。lncRNA-TUG1的表达水平与患者的肿瘤分期、分化程度及淋巴结转移情况有关（P ＜0.05）。生存分析结果显示，lncRNA-TUG1高表达患者的5年生存率显著低于lncRNA-TUG1低表达患者（P ＜0.05）。淋巴结转移和lncRNA-TUG1高表达是ESCC 患者预后生存的独立危险因素（P ＜0.05）。结论 lncRNA-TUG1在ESCC 组织中的表达水平较高，且与患者的预后显著相关。
【关键词】 食管鳞状细胞癌；lncRNA-TUG1；预后
DOI: 10. 3969/j. issn. 1673-534X. 2022. 03. 013
作者单位：714000 渭南市中心医院消化内科（郭剑）、检验科（袁丽侠）
通信作者：食管癌（EC ）是消化系统中常见的恶性肿瘤之一，在全球范围内其发病率居恶性肿瘤的第9位，病死率居第6位，在亚洲地区及非洲东南部的发病率较高[1]。EC 主要分为食管腺癌和食管鳞状细胞癌（ESCC ），其中ESCC 是EC 的主要组织学亚型。在中国，平均每年有15万左右的EC 患者死亡，其中90%以上为ESCC 患者[2]。ESCC 的发病较为隐匿且早期症状不明显，大多数患者在确诊时已是中晚期，其5年生存率仅15%左右。因此，亟需寻一种能够早期诊断ESCC 的生物标志物。
长链非编码RNA （lncRNA ）是一类长度大于200 nt 的非编码RNA ，具有广泛的生物学功能，可通过与DNA 、蛋白质等大分子相互作用，调控肿瘤的发生和发展。牛磺酸上调基因1（TUG1）位于人类染体22q12.2，可通过与甲基化的PRC2蛋白结合，调控与生长相关的基因表达[3]。Young 等[4]的研究表明，沉默lncRNA-TUG1可使发育中的视网膜细胞生长减慢，或致其凋亡。研究表
明，lncRNA-TUG1在结肠癌、胃癌等消化系统肿瘤的发生、发展中起着重要作用[5-6]，但目前其与E
SCC 相关的报道较少。本研究检测了ESCC 组织中lncRNA-TUG1的表达水平，并分析其与ESCC 患者的临床病理特征及预后的关系。1 资料与方法1.1 一般资料
收集2013年10月至2015年10月在渭南市中心医院行ESCC 根治性切除术的103例患者的肿瘤组织及癌旁组织（距肿瘤组织边缘＞5 cm ）标本。所有组织在采集后均于30 min 内进行速冻处理，并保存于－80 ℃的冰箱中待用。纳入标准：（1）术前未接受放射、化学；（2）术后经病理检查确诊为ESCC ；（3）签署知情同意书。排除标准：（1）并发其他恶性肿瘤者；（2）心、肝、肾等重要器官功能不全者；（3）合并自身免疫性疾病者。本研究经医院医学伦理委员会批准。
103例ESCC 患者中男性70例（67.96%），女性33例（32.04%），年龄41～72岁，平均年龄为（59.81±7.62）岁。根据国际抗癌联盟（UICC ）和美国癌症联合委员会（AJCC ）于2017年联合发布
的第八版食管癌TNM分期标准进行分期[7]，其中Ⅰ期25例，Ⅱ期22例，Ⅲ期30例，Ⅳ期26例；术后经病理检查确诊的分化程度为低分化20例，中分化32例，高分化51例。
1.2 lncRNA-TUG1水平检测
采用实时定量PCR（real time qRT-PCR）法测定lncRNA-TUG1的表达水平。使用TRIzol试剂盒提取E
SCC组织及癌旁组织标本中的总RNA，严格按照试剂盒说明书进行操作。使用酶标仪测定RNA的浓度和纯度。使用PrimeScript TM RT Master Mix试剂盒进行反转录，生成cDNA。使用PCR仪进行扩增反应，反应条件为95 ℃预变性10 min，之后95 ℃ 20 s、60 ℃ 30 s、72 ℃ 30 s，共40个循环。以U6作为内参，采用2-ΔΔCT法表示lncRNA-TUG1的相对表达量。PCR引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，引物序列见表1。
表1 引物序列
引物名称序列
lncRNA-TUG1正向：5'-TAGCAGTTCCCAATCCTTG-3' 反向：5'-CACAAATTCCCATCATTCCC-3'
U6正向：5'-CTTCAGCCGGCACAGCT-3'
反向：5'-CGCTAATTTGCGTTCAAACG-3'
1.3 随访
采用门诊或电话的方式对ESCC患者进行为期5年的随访。随访开始时间为术后，第1年每3个月随访1次，第2年每6个月随访1次，之后每年随访1次。随访截至2020年10月，以患者死亡作为随访终点事件。
1.4 统计学方法
应用SPSS 20.0软件进行统计学分析。计量资料以均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用独立样本t检验；计数资料以例（%）表示，组间比较采用χ2检验。采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线，采用Cox比例风险回归模型对ESCC患者的预后影响因素进行单因素和多因素分析。P＜0.5为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 lncRNA-TUG1在ESCC组织及癌旁组织中的表达水平
lncRNA-TUG1在ESCC组织中的相对表达量为3.28±0.26，高于癌旁组织（1.03±0.09），两组比较差异具有统计学意义（P＜0.01）。2.2 lncRNA-TUG1的表达水平与ESCC患者临床病理特征的关系
根据103例ESCC患者lncRNA-TUG1的相对表达量的中位数（1.58），将患者分为lncRNA-TUG1高表达组（≥1.58，n＝58）和lncRNA-TUG1低表达组（＜1.58，n＝45）。结果显示，lncRNA-TUG1的表达水平与患者的年龄、性别、烟酒史及肿瘤位置（靠近咽部者为高位，靠近胃下端者为低位，处于中间者为中位）无关（P＞0.05）；与患者的肿瘤分期、分化程度及淋巴结转移情况有关，lncRNA-TUG1高表达组中Ⅲ～Ⅳ期者、低分化者、发生淋巴结转移者的占比显著高于lncRNA-TUG1低表达组，两组比较差异均有统计学意义（P均＜0.05）。见表2。
表2 lncRNA-TUG1表达与患者临床病理特征的关系/例（%）项目
例
数
高表达组
（n＝58）
低表达组
（n＝45）
χ2值P值年龄 3.2740.089＞60岁5830（51.72%）28（62.22%）
≤60岁4528（48.28%）17（37.78%）
性别0.0370.886男7040（68.97%）30（66.67%）
女3318（31.03%）15（33.33%）
烟酒史0.5390.441有6337（63.79%）26（57.78%）
无4021（36.21%）19（42.22%）
肿瘤分期13.6530.002Ⅰ期258（13.79%）17（37.78%）
Ⅱ期229（15.52%）13（28.89%）
Ⅲ期3020（34.48%）10（22.22%）
Ⅳ期2621（36.21%）5（11.11%）
分化程度27.8830.000高5123（39.66%）28（62.22%）
中3221（36.21%）11（24.44%）
低2014（24.14%）6（13.33%）
淋巴结转移16.4710.000是5842（72.41%）16（35.56%）
否4516（27.59%）29（64.44%）
肿瘤位置0.0520.764低位3017（29.31%）13（28.89%）
中位3821（36.21%）17（37.78%）
高位3520（34.48%）15（33.33%）
2.3 lncRNA-TUG1的表达水平与ESCC患者预后的关系
生存分析结果显示，lncRNA-TUG1高表达组
的5年生存率为24.14%，低于lncRNA-TUG1低表达组（51.11%），两组比较差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）。见图1。
2.4 影响ESCC 患者预后生存的相关因素
将患者的年龄、性别、烟酒史、肿瘤分期、分化程度、淋巴结转移、肿瘤位置和lncRNA-TUG1水平作为自变量，将ESCC 患者的预后生存情况作为因变量，纳入Cox 单因素回归分析，结果显示肿瘤分期、分化程度、淋巴结转移和lncRNA-TUG1水平均与ESCC 患者的预后生存有关（P 均＜0.05）。将单因素分析中P ＜0.05的项目，包括肿瘤分期、分化程度、淋巴结转移和lncRNA-TUG1水平作为自变量，将ESCC 患者的预后生存情况作为因变量，纳入Cox 多因素回归分析，结果显示淋巴结转移和lncRNA-TUG1高表达是ESCC 患者预后生存的独立危险因素（P 均＜0.05）。见表3。3 讨论
EC 是一种具有异质性且容易高度恶化的消化道肿瘤，在全球范围内具有较高的发病率和病死率，严重威胁人类的健康。在中国，每年有数十万人死于EC ，且主要以ESCC 亚型为主。近年来，虽
图1 不同lncRNA-TUG1表达水平的ESCC 患者的生存分析
表3 影响ESCC 患者预后生存的单因素和多因素Cox 比例风险回归分析
项目
单因素
多因素HR 值95% CI P 值HR 值95% CI P 值年龄（＞60/≤60岁）0.8370.326～1.0110.421———性别（男/女）0.6240.577～1.2610.246———烟酒史（有/无）
0.3880.205～1.0320.137———肿瘤分期（Ⅲ＋Ⅳ/Ⅰ＋Ⅱ期） 2.873 1.588～3.6060.0010.8380.426～1.3970.366分化程度（低/中高） 3.771 2.062～4.1370.000 1.0620.721～1.9060.258淋巴结转移（有/无） 2.683 1.842～3.4790.002 2.162 1.833～3.697
0.003肿瘤位置（低位/中高位）
0.5880.354～1.3690.503———lncRNA-TUG1水平（高表达/低表达） 4.862
2.906～5.613
0.000
3.896
2.774～5.382
0.000
注：“—”表示无数据
1.00.80.60.40.20.0
累积生存分析低表达高表达
低表达-检剔后高表达-检剔后
lncRNA-TUG1表达0 10 20 30 40 50 60
随访时间/月
然ESCC 的方式得到了显著改进，但患者的5年生存率并未明显升高。大多数EC 患者早期症状不明显，确诊时常已失去手术机会。因此，寻一种新的潜在标志物，加强对ESCC 的早期诊断、预防和是当前的研究重点。
lncRNA 在机体正常的生物学过程中发挥着重要的作用，可调控基因表达，参与染体重排、组蛋白修饰、转录激活与干扰等过程。此外，lncRNA 也参与了包括肿瘤在内的人体多种疾病的调控。研究表明，lncRNA 与肿瘤的浸润和转移有关[8]。lncRNA-TUG1最初是在小鼠视网膜细胞中被发现的[4]。Zhang 等[9]的研究发现，lncRNA-
TUG1在骨肉瘤组织中高表达，且与肿瘤的分期、大小及患者预后密切相关，lncRNA-TUG1高表达的患者术后生存时间显著低于低表达者。Cai 等[10]的研究表明，lncRNA-TUG1在神经胶质瘤患者中呈高表达，当其被沉默后，神经胶质瘤细胞对化学的敏感度增高。研究发现，lncRNA-TUG1在体外可通过介导miR-148a-3p/MCL-1/Wnt/β-catenin 轴调控ESCC 的生物学功能和上皮间质转化[11]。另有研究表明，lncRNA-TUG1可能通过与PRC2结合，从而在ESCC 的发生、发展中发挥作用[12-13]。本研究结果指出，lncRNA-TUG1在ESCC 组织中的表达水平显著高于癌旁组织，这提示lncRNA-TUG1的
表达可能与ESCC的发病有关。此外，本研究还指出，lncRNA-TUG1的表达水平与患者的肿瘤分期、
分化程度及淋巴结转移情况有关，lncRNA-TUG1的表达水平越高，患者的肿瘤分期越高，肿瘤分化程度越低，且更容易发生淋巴结转移，这提示lncRNA-TUG1可能与ESCC的转移及恶化相关。
多项研究表明，lncRNA-TUG1可作为膀胱癌、结肠癌、宫颈癌的预后指标[14-16]。本研究结果显示，lncRNA-TUG1高表达的ESCC患者术后生存率显著低于lncRNA-TUG1低表达者，这提示lncRNA-TUG1的表达水平可能可以预测ESCC患者的预后生存情况。Cox回归分析结果表明，lncRNA-TUG1高表达和淋巴结转移是影响ESCC患者预后生存的独立危险因素。该结果提示在临床中需要加强对lncRNA-TUG1高表达患者的术后监测，必要时予以辅助，以防止疾病复发。
综上所述，ESCC患者的肿瘤组织中lncRNA-TUG1的表达水平较高，且其表达水平与ESCC的发生、发展及患者的预后生存情况密切相关；监测ESCC患者lncRNA-TUG1的表达水平有助于判断病情进展及预后情况。今后需对lncRNA-TUG1在ESCC中的具体调控机制进行深入探究。
参 考 文 献
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（收稿日期：2021-05-12）
（本文编辑：周骏）
