PCR 体系组分
PCR模板可以是任何DNA来源，包括基因组DNA (gDNA)、互补DNA(CDNA)和质粒DNA。
模板核酸的量与纯化程度，是PCR成败与否的关键环节之一。
1）.核酸提取的DNA模板完整性差、纯度低、用量不足、长片段或高GC等会导致扩增得率低甚至没有扩增； 2）.DNA模板过多、完整性差、长片段或高GC等复杂序列会导致非特异性扩增或条带模糊。 人工合成具有特定序列的寡核苷酸作为引物，该引物序列与进行扩增的目的核酸片段互补匹配，从而开始目的片段的扩增。
注意：
A.引物是PCR特异性反应的关键，PCR产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度
B.引物与起始DNA的其它部分序列具有最小的同源性，以确保目的片段的特异性扩增。
任秀娟
引物是PCR 特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。
引物设计有问题或用量过多，导致非特异性情况或假阳性扩增（比如引物二聚体等）。古典主义时期
湖北医学院引物设计是一个比较重要的环节，需要深入去挖掘。
3. dNTP
DNA复制需要四种脱氧核糖核苷酸，即dATP、dGTP、dCTP、dTTP。dATP（脱氧腺苷5'-三磷酸）和dGTP（脱氧鸟嘌呤5'-三磷酸）构成嘌呤。dTTP（脱氧胸苷5'-三磷酸）和dCTP（脱氧胞苷5'-三磷酸）构成嘧啶。
在PCR反应中，注意4种dNTP的浓度要相等( 等摩尔配制)，如其中任何一种浓度不同于其它几种时(偏高或偏低)，就会引起错配。浓度过低又会降低PCR产物的产量。流量生成
4. Taq DNA聚合酶
DNA聚合酶（DNA polymerase）是细胞复制DNA的重要作用酶。DNA聚合酶 , 以DNA为复制模板，新福林
从将DNA由5'端点开始复制到3'端的酶。DNA聚合酶的主要活性是催化DNA的合成（在具备模板、引物、dNTP 等的情况下）及其相辅的活性。在PCR扩增里，我们常说的Taq酶和高保真酶（Pfu）就是DNA聚合酶。 DNA聚合酶的四大特点——特异性、热稳定性、保真度和合成能力，使这些酶具有多种功能，进一步拓展它们在PCR中的应用。
DNA聚合酶的一般特征包括热稳定性、合成能力、特异性、保真度。
DNA聚合酶浓度过高可引起非特异性扩增，浓度过低则合成产物量减少。
5. PCR buffer 、 Mg 2+
PCR buffer（缓冲液）能够为DNA聚合酶活性提供适宜的化学环境。缓冲液pH通常为8.0-9.5，镁离子（Mg2+）作为DNA聚合酶活性的辅助因子，有助于聚合期间dNTP的结合。酶活性位点处的镁离子可催化引物的3′-OH与dNTP的磷酸基团间形成磷酸二酯键（如下图）。
Mg 2+浓度过低会降低聚合酶活性，导致PCR产物较少或无PCR 产物。
Mg 2+浓度过高则会提高引物-模板复合物的稳定性，产生非特异性PCR产物，并增加由dNTP错误插入导致的复制错误。
例1、PCR的特异性决定因素为（）。
A.模板DNA
B.引物
C.dNTP
D.镁离子
答案：B
例2、下列关于PCR的描述中，正确的是（）
①PCR是一种酶促反应
②引物决定了扩增的特异性
③扩增DNA利用了热变性的原理
④扩增的对象是氨基酸序列
A．①②④B．②③④
C．①③④D．①②③
空军政治学院答案：D
解析：PCR是一种体外迅速扩增DNA片段的技术，在高温条件下，把DNA的双链打开，缓慢冷却后，又重新结合，需要耐高温DNA聚合酶，同时，还需要引物，从引物的3′端连接脱氧核苷酸。
