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中华行为医学与脑科学杂志2021年5月第30卷第5期 Chin J Behav Med Brain Sci，Mav 2021，V o L30，N〇.5
高启超1李蔚然1张升校2柴世凡^赵欣锐1王昭君^
1山西医科大学生理学系，细胞生理学教育部重点实验室，太原030001;2山西医科大 学第二医院风湿免疫科，太原030001
通信作者：王昭君，Email:********************
【摘要】目的探究Nrf2激活剂萝卜硫素（sulfomphane.SFN)改善阿尔茨海默病（Alzheimer's
disease,AD)模型小鼠焦虑情绪和恐惧记忆的行为及其机制。方法选取A D转基因小鼠和同窝对
照野生型（WT)小鼠，随机分为野生型+生理盐水组（WT+ N S组）、野生型+萝卜硫素组（WT+ SFN
组）、AI)模型+生理盐水组（AD+N S组）和A D模型+萝卜硫素组（AD+SFN组），每组12只。S F N用生
理盐水(0.9% NaCl溶液）溶解并配制成浓度为1g/L的溶液，每天在固定时间根据体质董对WT+
SFN组和AD+SFN组小鼠腹腔注射SFN( 10 mg/kg) ,WT+N S组和AD+N S组小鼠腹腔注射等体积生
理盐水，I次八I，连续30 d。采用旷场实验检测小鼠的自主探究能力及焦虑行为，高架十字迷宫检测
小鼠的焦虑情绪，条件恐惧实验检测小鼠的恐惧记忆行为，最后通过E L IS A检测小鼠海马和脑皮质
中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD)及丙二酸（malondialdehyde，MDA)的表达水平。采用
Gmphpad Prism 8.0.2软件进行双因素方差分析。结果在旷场实验中，AD+SFN组小鼠在中央区域
停留时间的百分比[(9.99±0.37)%]高于人0+奶组[(8.47±0.42)%](尸3.842，户<0.05)；高架十
字迷宫中，人0+5[1\组小鼠在3「1\1干预后开放臂停留时间百分比[(26.2±1.6)%]高于八0+ ~5组
[(15. 8±1.0)%]U=7. 452，P<0. 01)。条件恐惧实验中，各组小鼠均形成了恐惧记忆，但在测试阶
段 AD+SFN组小鼠僵直时间百分比[(64. 5±3. 8)%]高于 AD+NS组[(51. 0±4. 3)%]U=5. 266，P<
〇.01 h除此之外，AD+SFN组小鼠的海马（尸6. 370,P<0. 01)和皮质（尸7. 858,P<0. 01)组织中反映
氧化应激水平的重要指标SOD表达均增高，而MDA在海马（(7=5. 146，P<0. 05)和皮质U=5. 833，P<
0.01)中的表达均出现降低f结论SFN可能是通过Nrf2通路抑制氧化应激，从而改善了 A D小鼠的
焦虑情绪和恐惧记忆。
【关键词】萝卜硫素；核因子E2相关因子2；阿尔茨海默病转基因小鼠；焦虑；恐惧记
忆
chart控件基金项目：国家自然科学基金项目（82001740)
D0I：10. 3760/cma.j371468-20201229-00090
Effects of sulforaphane on anxiety and fear memory in AD mice and its oxidative stress mechanism
Gao Qichao1 ,Li Weiran ,Zhang Shengxiao2 yChai Shifati ,Z hao Xinrui1, Wang Zhaojun1
'Department o f Physiology, Key Laboratory o f Cellular Physiology .Ministry o f Education , Shanxi Medical Uni巴洛特利养母
versity, Taiyuan 030001 .C h in a；2 Department o f Rheum atology, the Second Hospital o f Shanxi Medical Univer
sity ,Taiyuan 030001, China
Corresponding author： Wang Zhaojun,E m ail：w zhaojunl025@ 126. com
【A bstract】Objective To explore the effects of sulforaphane (SFN),an activator of Nrf2,on anxie
ty and fear memory in Alzheimer's disease(AD)model mice and mechanism.Methods The AD mice and
wild type (WT)mice with the same background were randomly divided into four groups(n= 12 for each
group)：wild type + normal saline group (WT+NS),wild type + sulforaphane (WT+SFN),AD model + nor
mal saline group (AD+NS)and AD model + sulforaphane group (AD+SFN).SFN was dissolved in nomial
saline (0.9% NaCl)and prepared solution with concentration of 1g/L.According to body weight,mice in
WT+SFN group and AD+SFN group were intraperitoneally injected with SFN (10 mg/kg),and mice in WT+
NS group and AD+NS group were intraperitoneally injected with the same volume of normal saline once a day
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for 30 days. The open field test was used to detect the autonomous exploration ability and anxious behavior of
mice. The elevated cross maze was used to detect the anxiety of mice. Conditional fear test was used to test
the fear memory behavior of mice. Finally, the expression of superoxide dismutase ( SOD) and malonciialcle-
高沸点溶剂
hyde( MDA) in the hippocampus and c erebral cortex were detected by ELISA. Two-way ANOVA analysis was
performed using Graph P ad Prism 8. 0. 2 software. Results In the open fiekl test, the percentage of time in
central region in AD + SFN group ((9.99 + 0. 37)%)was higher than that of AD + NS group ((8.47 +
0. 42) %) (3. 842,P<0. 05). In the elevated cross maze,the percentage of time in open arm of AD+SFN
group ( ( 26. 2± 1.6) %) was higher than that in AD+NS group ( ( 15. 8± 1.0) %) ( 7. 452 J c O. 01 ) •In
the conditional fear test, all the mice of the four groups developed the fear memory, hut AD + SFN group
showed higher freezing time ratio (( 64. 5 ±3. 8) % ) than AD + NS group ( (51. 0± 4. 3)%)(q=5. 266, P<
0.01) in the testing stage. After SFN intervention,the important indicator of oxidative stress,the expression
levels of SOD in hippocampus (q=6.370,P<0. 01) and cortex (q=l.858,P<0. 01) of AD mice increased,
while the level of MDA in hippocampus (q=5.146,P<0. 05) and cortex (q=5.833,P<0. 01) decreased.
Conclusion SFN m ay inhibit oxidative stress through Nrf2 pathway，thereby improving anxiety and fear memory in
AI) mice.
【
Key words 】Sulforaphane; Nuclear factor erythroid-2 related factor 2；AD transgenic mice；
Anxiety ；Fear memory
Fund program：National Natural Science Foundation of China (82001740)
DOI ：
10. 3760/cma. j. cn371468-20201229-00090
阿尔茨海默病（Alzheimer's disease,AD)是一种 起病隐匿、进展缓慢的神经退行性疾病，是痴呆症最 常见的类型，临床表现是进行性认知功能障碍到晚 期的生活不能自理[1]。此外，在整个病程中，有 97%的AD患者会出现情绪异常，包括焦虑、抑郁、冷漠、幻觉、误认等现象:2]，这种情绪的异常严重危 害着患者以及他人的生命，是A1)过程中不可 忽视的方面。近年来，由于脑组织对氧化应激的易 感性，氧化应激成为参与AD发病进程的重要机制 之一。大量研究证实，在AD患者脑内可出现过氧 化表现，患者的大脑中能够检测到典型的氧化应激 标志物|3]。氧化应激导致AD发生和发展已成为众 多研究者的共识。因此，深人研究AD中氧化应激 的机制以及抗氧化制剂的神经保护作用对AD的预 防和将具有重要的现实意义。核因子E2相关因子 2 (nuc.lear factor erythroid-2 related factor 2，N rf2)是大多数内源性抗氧化酶表达的主要调节因 子14。在氧化应激状态下，N rf'2将启动多个抗氧化 的
靶基因转录，在缺乏N rf2的A1)模型小鼠中发现 小鼠的炎症反应及多泛素结合蛋白相关基因显著增 加，淀粉样前体蛋白（am yloid precursor protein，APP)和p-淀粉样蛋白（am yloid (3-protein，Ap)转化 为不溶性部分，APP/P S l介导的氧化损伤加重[5:,:，萝卜硫素（S ulf〇raphane，SFN)是提取于西兰花等十 字花科植物的活性物质，是一种天然的异硫氰酸酯 盐，具有N rf2激活的独特能力>71。据报道SFN可 以预防阿尔茨海默病、帕金森病、脑缺血、亨廷顿氏 病等|iM2，抑制氧化应激和神经炎症导致的认知障碍和精神疾病。水迷宫实验中，SFN明显逆转了 A D
转基因小鼠的空间参考学习和记忆能力的损伤$;
又有报道称，经过轻度应激的小鼠出现抑郁、焦虑等
情绪异常，SFN给药后显著逆转了慢性应激小鼠的
焦虑抑郁行为h4]。然而，SFN能否改善AD在焦虑
情绪和恐惧记忆方面的异常却鲜有报道，因此本研
究将通过慢性腹腔注射SFN，观察其拮抗氧化应激
及改善AD小鼠焦虑和恐惧记忆的神经保护作用。
材料和方法
dmem培养基■、材料
1. 实验动物：1〇月龄雄性APPswe/PSldE9 (APP/P S l)双转基因AD模型小鼠以及同窝对照小
鼠(wild type,WT)，购买于北京华阜康生物科技有
限公司，动物许可证号为SCK (京）2014-00〇4: APP/P S l小鼠是一种公认的A PP基因和早老素I (presenilin 1，PS1)基因突变小鼠，能较好地模拟A D
的病理特征和渐进性病程M51。所有动物饲养于山
西医科大学动物实验中心SP F级动物房，湿度30%
~50%，室温20〜25T，维持12 h/12 h昼夜节律，自
由摄食饮水。
2. 主要试剂与仪器：萝卜硫素受赠于深圳福山 生物科技有限公司。旷场和高架十字迷宫购于深圳
市瑞沃德生命科技有限公司，记录系统为西班牙Panlab公司Smart 3.0软件。条件恐惧实验设备购
买于美国H arvard Apparatus。超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD) 和 丙二醒 （malondialde-hyde，MDA)的ELISA 试剂盒购于江苏酶免实业有
中华行为民学与脑科学杂志 2021 年 5 /j 第 30 卷第 5 期 Chin J Behav Med Brain Sri，MaY 2021，Vol. 30，N c >. 5• 387 •
限公司。二、方法
1. 动物分组及干预方法:24只野生型小鼠按照 随机数字表法分到为两组：野生型+生理盐水组
(WT +NS 组）、野生型+萝卜硫素组（WT + SFN 组）， 每组12只;24只AD 模型小鼠按照随机数字表法分 为两组:AD 模型+生理盐水组（AD +NS 组）和AD 模 型+萝卜硫素组（AD +SFN 组），每组12只。，SFN 用 生理盐水（0.9% NaCl )溶解并配制成浓度为1 g/L 的溶液，每天在固定时间根据体质量给WT +SFN 组 和AD +SFN 组小鼠腹腔注射SFN ( 10 m g /kg )，WT + NS 组和A D + NS 组小鼠腹腔注射等体积的生理盐 水，丨次/d ，连续注射30 d 。
2. 旷场实验n 6]：旷场的长、宽、高分别都为 40 cm ，底面正中央的四分之一区域定义为中央区，
每只小鼠放人旷场都是从中央相同位置方向，自由
探索5 m i n 同时用摄像头记录行走轨迹，并用 Sm art 3.0软件分析小鼠在旷场中的运动总路程和 中央区域停留时间百分比。每只小鼠在实验结束 后，用75%酒精擦拭宫体，防止小鼠气味标记，对后
面小鼠的行为活动造成影响。
3. 高架十字迷宫[17 ：在旷场实验后隔一天进 行。高架十字迷宫是一个尺寸为30 cm x 7 cmx
5 cm ，夹角为90 °的四臂装置。四臂围成一个中央
正方形区，四臂中有两个无边缘保护的开放臂和两 个闭合臂，实验时将小鼠放在中央正方形区同一位 置，让其自由活动5 min ，用摄像头记录小鼠的行走 轨迹，并采用Smart 3. 0软件分析进臂总次数和开放 臂停留时间百分比。同上，在完成每只小鼠的实验 后用75%酒精擦拭宫体。
4.
条件恐惧实验[I S :：在高架十字迷宫实验结束 后隔天进行条件恐惧实验，采用具有足底电刺激的 记忆训练箱。同时，箱底具有压力感应装置，可检测 箱内小鼠安静或者活动状态的压力，并通过换能、放 大，在计算机上显示实时的压力变化曲线。设定压 力阈值，软件分析并识别小鼠相对活跃或者僵直状 态。整个实验流程无外界干扰，在训练阶段，先让各 组小鼠在箱内自由活动30 s ，随后给予持续30 s 的 声音刺激（频率2 900 Hz 、强度90 dB )，最后2 s 在 足底同时施加〇. 3 mA 的直流电刺激，
声波+直流电 刺激反复进行5次，每次间隔90 S 。整个过程记录 每30 s 内的僵直状态所占时间百分比，也就是僵直 比率。训练阶段结束24 h 后进人测试阶段，把小鼠
放在与训练阶段颜不一样的训练箱，待小鼠活动
150 s ，然后给予150 s 的声音刺激（频率2 900 Hz 、 强度90 dB ，此处不给直流电刺激），即条件刺激 (coiiditimiing stimulus , CS )。记录小鼠条件刺激前 (Pre -CS )和刺激（CS )期间两个150 S 的僵直时间百 分比，比较四组小鼠不同时期的僵直时间百分比。
5.
酶联免疫吸附实验（ELISA )：采用ELISA 法
测定小鼠大脑皮质和海马组织中SOD 和MDA 含 量。5%的水合氯醛（0.07 m l /10 g )麻醉小鼠后，取 脑，迅速分离皮质和海马组织，每1 g 组织加人9 m l 无菌PBS ，充分勻浆，4 1 3 000xg 离心20 min ，收集 上清。其余所有步骤都严格按照ELISA 试剂盒使
用说明书操作。
6.
统计学处理：所有数据使用Graphpad Prism 8. 0.2软件处理并绘图，数据都通过正态分布检验 后以均数±标准差表示，采用双因素方差分析法进 行统计，采用Turkey 法进行组间两两比较,P <0. 05表示差异有统计学意义。
结
果
一
、
SFN 对AD 小鼠自主探究行为和焦虑的影响
在旷场实验中，WT +NS 组，WT +SFN 组，AD+NS
组和AD +SFN 组小鼠在旷场内5 min 运动总距离分
别为[(2 093. 62 ± 56. 87 ) c ‘m ]，[ ( 2 124. 20 ±
44.35)(?111]，[(2 029.66±31.69)〇11]和[(2 069.86
±23. 02) cm ]，四组小鼠在旷场中的行动轨迹及运动 总距离差异无统计学意义。但是AD + NS 组小鼠在 中央区域停留时间百分比[(8. 47±0. 42)%]明显低 于 W T + N S 组[(9. 97±0. 42)%] ( <7= 4. 939，尸<0. 01)。AD +SFN 组小鼠在旷场中央区停留时间百
分比相对于A D + N S 组小鼠增加到[(9. 99 ±
0.37)%](9=3.842，P <0.05)。见图 1。
二、 SFN 对AD 小鼠焦虑样行为的影响高架十字迷宫实验结果显示，WT +NS 组小鼠在 开放臂停留时间百分比为[(24. 4±0. 7)%]，显著高 于 A D + N S 组的[(15. 8±1. 0)%] ( </=6. 129，尸<0.01)。AU +SFN 组小鼠在开放臂停留时间百分比 高于AD +NS 组小鼠增加到[(26. 2±1. 6)%] (9 = 7.452，P <0.01)；同时，各组间小鼠的进臂总次数差 异无统计学意义（/>>〇. 05)。见图2:
三、 SFN 对AD 小鼠恐惧记忆的影响
训练阶段，经过五次的声音与电刺激的组合刺 激强化以后，四组小鼠均形成条件性恐惧记忆，各组 小鼠间的僵直时间百分比差异无统计学意义（
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中华行为医学与脑科学杂志2021年5 |j第30卷第5期Chin J Behav M e (丨Brain S d ，M ay 2021，Vol. 30，N». 5
■ WT+NSSi - AD+NS&l ■打鑛■麵组
2 4 6 8 10 12
时间（min)
_ W T +N S 组 _ AIHNS 绀♦ W T+SFN 组 + AD+SFNitt _ W T+N SS1 _ A D +N S 组
■ WT+SFNm _ AD+SFN 组
笫1次刺激l U f 第5次剌激G
兰4〇.
-rr+NS 组
-W T+SFN 组 4 A D *S F N
W T+NS 组
WT+SFNm
AD+NS^Il
AD+SFNm
1 2 3 4 5 Pre-CS C S
时间（Bin)
与 WT+NS 组比较，aP <0. 01；丨-j AD + NS 组比较，bP <
0.05 ，与 W T+N S 组比较//)<0. 05；与 AD + NS 组比
较，1T <0. 05, W T+N S：野牛.咽+牛.理盐水组；W T +SFN ：野牛型+萝卜硫素组；A D +N S：阿尔茨海默病模型+生理 盐水组；AD + SFN ：阿尔茨海默病模型+萝卜硫素组
Pre-C S：条件刺激前;C S ：条件刺激
图3
萝卜硫素对A D 小鼠恐惧记忆能力的影响（A ：训
练阶段在自由探索期和5次刺激期间小鼠的僵*时间
f f 分比，灰柱子表示5次刺激；B ：训练阶段小鼠第1
次刺激前和第5次刺激后的偶灯时间白分比柱状图；C：测试阶段小鼠的僵直时间「丨分比，灰区域表示声音刺 激阶段;D ：测试阶段条件刺激前和条件刺激后小鼠的僵
#时间百分比柱状图）
讨 论
AD 的发病机制尚不明晰，相关研究学说众多，
fH 到目前为止，所有针对A p 和tau 磷酸化的抗AD 药物在临床实验上都以失败告终。据报道，A D 患 者脑内氧化负担严重lwl，其血液中氧化应激生物标 志物的高水平表达也反映了存在显著的氧化应激现 象。因此，A D 的氧化应激学说逐渐受到关注。神 经元的组成成分（脂质、蛋白质、核酸）均可被氧化.
〇. 05)。但在第二天的测试阶段，条件性刺激时期 AD +N S 组小鼠的僵直时间百分比从[(51. 0± 4.3)%]明显低于\^1’ + 吧组的[(67.4±2.4)%] (<p 6.410，P <0.01)。而AD +SFN 组小鼠的僵直时 间百分比高于AD + N S 组，并且上升到[(64_ 5 ± 3.8)%] (9=5_266，P <0.01)。见图 3。
A
与W T +N S 组比较，7<0. 05；与AD + NS 组比较//>< 0. 05 W T +NS 组：野生甩+U I !盐水组；W T +SFN 组：野 生型+萝卜硫素组；AD +NS 组：阿尔茨海默病模型+生 理盐水组；AD +SFN 组：阿尔茨海默病模型+萝卜硫素 组图I
萝卜硫素对A [)小鼠的f 1主：探究行为和焦虑情绪 的影响（A ：四组小鼠在旷场内的代衣性轨迹图；B ：
四组 小鼠运动总距离的柱状ra ;c :w m 小M fV ：中央区域停留 时间分比的柱状图）
MDA 表达水平的影响根本违约
与W T +NS 组相比，AD + NS 组的SOD 表达水平 在海马（f /=9. 070，P <0. 01)和皮质（9= I 3.670，P < ().()1)均明显降低，AD +SFN 组SOU 的表达水平与 AD +NS 组相比有所恢复（海马:g =6. 370，P <0_01; 皮质：尸7. 858,P <0. 01)；关于MDA 的表达水平, AD +NS 组与WT +N S 组相比在海马U =6.288，P < ().〇丨）和皮质（9= 5. 307, P <0. 05)中的表达水平均 升高，而AD +SFN 组的MDA 表达水平较AD +NS 组 降低（海马：<7=5. 146,P <0.05；皮质：<?=5_ 833，P < ().〇1)。见图 4。
Ij WT+NS 组比较/PcO . 01；与 AU + NS 组比较，b P <
0.01
与 W T+N S 组比较,"尸<0. 05; y AD + NS 组比
较，hP <0. 051 W T+N S：野，t :.增 + 牛现盐水组；W T+SFN : 野牛型+萝卜硫素组；A D +N S：阿尔茨海默病模型+生理 盐水绀；AD+SFN ：阿尔茨海默病模咽+萝卜硫素组 图2 S F N 对A D 小鼠的焦虑样行为的影响（A ：四组小 鼠在高架十字迷宫内的代衣n 轨迹W ：横向为开放臂，
纵叫为闭合臂；B ：四组小鼠进V I '总次数的柱状图；C : W 小鼠在开放臂停留时间「〖分比的柱状阁）
四、SFN 对AD 小鼠海马和皮质组织中SOD 及
D
(％)
#
o
Q Q
o 8
6(4 2 (％)
#-±f v
}
M
§
中华行为医学 4脑科学杂志 2021 年 5 月第 30 #第 5 期 Chiii j Behav Med Brain S(.i,May 2021，Vol. 30，N 〇.5• 389 •
=
WT+NS 组■ AD+NS 组
o W T+SFN m _ A D +S F N ’m
oWT + NSm _A D +N S caWTtSFN <1l ■AD+SFNm
oWT^NSHI -AD *NS^ll
caWT +S F N ’m ■ A D +SFN 31
b
m
I W T W ’sm _ A D +N s m
»W T^SFNm M A D +SFN^li
i i
WT+NS 组比较，aP <0. 05；与 AD + NS 组比较 0.05，与 W T + NS 组比较，aP <0. 05；与 AD + NS 组比 较，1
0• 05 W T + NS 组：野生咽+生理盐水组；W T +
SFN 组：野生型+萝卜硫素组;A D +N S 组：阿尔茨海默病
模咽+生理盐水组；A D +SFN 组：阿尔茨海默病模喂+萝 卜硫素组;S O D ：超氧化物歧化酶;M D A ：丙二醒 图4 各组小鼠海马和皮质中SO D 和M D A 表达水平 (A 、B 分别为四组小鼠在海马和皮质中SO D 相对表达 水平的柱状图;C 、D 分别为四组小鼠海马和皮质M D A 相对表达水平的柱状图）
氧化损伤的神经元A p 清除和tau 蛋白过度磷酸化 均会受到影响，而这又会加剧线粒体功能障碍产生 过M 活性氧，氧化损伤增强，形成恶性循环[2° ，因 此，氧化应激造成的氧化损伤在a d 发病进程中占 了十分重要的地位，提示减轻氧化损伤能A D
N rf 2作为大多数内源性抗氧化酶表达的主要调 节因子M ，其在氧化应激状态下可以启动多个抗氧 化靶基因的转录，还上调与线粒体生物发生相关基 因的表达，包括线粒体转录因子AAM 、Nrfl 12I ]。此 外，N rf 2能够诱导与还原型辅酶D (NADPH )产生有 关的酶，包括葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、苹果酸酶1、异 梓檬酸脱氢酶1和6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶[22，它 们在维持氧化还原平衡屮至关重要，是生物合成反 应所必需的N rf 2的激活可拮抗AI )的A p 聚集、 氧化应激、炎症等反应m
本研究中采用的SFN 是
迄今为止0然界中发现的N rf 2最强激活剂，通过对 KeaP 1中巯基部分的修饰使其结构发生紊乱，从而 使泛素连接酶活性下降，激活N rf 2 2425 SFN 活化
N rf 2之后可减轻AD 小鼠的认知障碍26 ,,
本研究中AD 转基因小鼠在旷场实验的中央区 域探索时间较对照组小鼠显著减少，其0主探究行 为受到影响，怛运动总距离没有组间差异，说明SFN
并没有影响AD 小鼠的主活动能力，却增强其探
索欲望。另外，高架十字迷宫的高度增加了小鼠的 焦虑心理，在进臂总次数没有差异的情况下，SFN 干 预的AD 小鼠进人开放臂的次数显著增加，说明 SFN 减少了 AD 小鼠的焦虑情绪条件恐惧实验 中，AD 小鼠在形成条件性恐惧记忆后，受到条件性 刺激时其僵直比率明显低于W T 小鼠。经过SFN 干预后，AD 小鼠的僵直比率显著上升。可见，A D 小鼠的恐惧记忆出现丢失，经过SFN 干预后有所恢 复。有研究表明N rf 2基因缺失的小鼠表现出了抑戳脚翻子
郁表型，似这丼现象可以通过抗氧化剂来改善，由此 发现N rf 2缺失的小鼠天生容易受到情绪的影 响l 271。AD 病程中情绪的改变可能与N H 2减少有 关。
目前，在AD 患者或相关动物模型中发现了许 多氧化应激的血液标志物，包括8-羟基脱氧鸟苷、 8-羟基鸟苷、丙二醛、4-羟基壬烯醛和F 2-异前列腺 素等其中，SOI )和MDA 是用来评估清除氧自 由基能力的两个常用指标lMI 。SOD 可以清除体内 生成的大M 自由基，在保护人体免受活性氧损害的 过程
屮发挥着重要作用而MDA 水平越高，机体 氧化水平就越高，间接反映了细胞的受损伤程 度|3°]。本实验观察到AD 小鼠大脑皮质和海马组 织中存在着显著的氧化应激反应，经SFN 腹腔注射 给药后，通过激活N rf 2通路，抗氧化水平得到增强， SOD 表达水平上升，MDA 水平下降。由此可见， SFN 干预之后对AD 小鼠焦虑情绪和恐惧记忆的行 为学改善与激活N H 2，增强小鼠脑内抗氧化能力有 关。
综上所述，本实验发现SFN 能够减轻AD 小鼠 的焦虑情绪和恐惧记忆能力的异常现象，这种冲经 保护作用是由于激活N rf 2通路来增强抗氧化能力 实现的。因此，使用SFN 激活N rf 2信号通路，减弱 脑内氧化水平，增强抗氧化能力，为减轻A D 的焦 虑、恐惧等情绪异常方面提供了新的研究依据：利益冲突所打作者均声明+存4：利益冲突 作者贡献声明高启超：实施研究、采集数据、论文撰W ；李蔚然：分 析、解释数据；张升校：酝酿和设计实验、获取研究经费；柴世凡：实施 研究；赵欣锐：采集数据；K 昭彳分析.解释数据、获取研究经费.指 导.支撑性n 献
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