1. TCA-丙酮法
（1）称量一定量的样品置于液氮预冷的研钵中，加少许PVPP，反复加液氮研磨至粉末。 （2）研磨好的样品用10 倍体积（w/V）的10%微电脑时间控制器
的TCA-丙酮溶液悬浮，加入0.1 M PMSF、 1 M DTT 尺码圈至终浓度为1 mM PMSF、10mM DTT，超声5 分钟，于-20℃静置6 小时或
过夜后，4℃，20000g 离心15 分钟，弃上清。
（3）沉淀用10 倍体积于样品的丙酮溶液重悬浮，于-20℃静置1 小时后，4℃，20000g 离
心15 分钟，弃上清。
（4）重复步骤（3错位匹配）一次。汽车智能防盗系统
（5）沉淀用10 倍体积于样品的乙醇/乙醚=1:1 洗，于-20℃静置1 小时后，4℃，20000g 离
心15 分钟，弃上清。
（6）重复步骤（3）一次。
（7）取出沉淀真空干燥约壁挂燃气锅炉5 分钟，除尽有机溶剂。
（8）按10mg 干粉末加200 微升裂解液的比例，加入1 mM PMSF静压试验、10mM DTT，超声5
分钟，充分溶解1 小时，10℃，35000g 离心30 分钟，上清为所需的蛋白溶液。
（9）用Bradford 法测定蛋白样品的蛋白浓度。
（10）蛋白样品溶液小量分装，-80℃保存。
注意事项：
（1） TCA 有利于去除酚类素等物质，但不利于蛋白的抽提，使用浓度不宜过高，在后
面丙酮处理中，尽量除去。
（2） 蛋白样品保存：样品浓度不宜过高，建议将高浓度样品适度调整，为避免反复冻融
应分装保存，长期保存用-80℃，短期保存用-20℃。
（3） 1M DTT：0.1542g DTT 用1ml MilliQ 水溶解，-20℃保存。
（4） 0.1M PMSF：0.0174g PMSF 用1ml 异丙醇溶解，-20℃保存。
