-实验研宪-
IL-4.IFN-7的影响
刘慧霞1刘莉(李东棋1吴跃2田理(
【摘要】目的探讨％丹益肺通窍颗粒对变应性鼻炎(AR)大鼠血清IL-4.IFN-!表达的影响，初步
探讨该方AR的作用机制(方法将32只SPF级SD大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、
组，组又分为中药组与西药组，每组8只，雌雄各半(除空白对照组外，其余3组均采用卵白蛋白
(OVA)腹腔注射致敏、双侧鼻腔滴鼻激发制备变应性鼻炎(AR)大鼠模型(造模成功后，中药组给予％丹
益肺通窍颗粒溶液灌胃，西药组给予氯雷他定混悬液灌胃，模型组灌胃等量生理盐水。连续给药14天后
处死大鼠，取血清，观察一般情况及鼻部症状评分，计算大鼠主要脏器系数，采用ELISA法检测血清中白
细胞介素4、干扰素！含量(结果与空白对照组比较，模型组大鼠血清中IL4水平明显升高"FN-!水
平降低(均P V0.05)；与模型组比较，％丹益肺颗粒组和氯雷他定组证候表现明显改善，鼻部症状评分降
低，血清中IL4水平降低、IFN-!水平升高(均!<0.05)，但2个组比较，差异无统计学意义
(!〉0.05)结论％丹益肺通窍颗粒可有效控制AR大鼠鼻痒、喷嚏等症状，其机制可能是下调IL4水
平与上升IFN-!水平来纠正Th1/Th2失衡而对AR大鼠发挥作用，减轻鼻部炎症反应，本研究为运
用益血通窍变应性鼻炎(
【关键词】变应性鼻炎；％丹益肺通窍颗粒；白介素4)-干扰素；益气活血法
DOI：10.3969/j.issn.1674-9006.2020.04.001
中图分类号：R765.21
Effect of qidan yifei tongqiao granule on serum IL・4、IFN・y of allergic rhinitis rats Liu Huixia1,L$L#,Li
Dongqi1/u Yue2,Tian Li3(1.Chengdu University of TCM,Chengdu,Sichuan,610075；2.Shenzhen
Luohu Maternal and Child Health Hospital,Shenzhen,Guangdong,518019；3.A f f iliated Hospital of
Chengdu University of TCM,Chengdu,Sichuan,610072)
【Abstract】Objective To investigate the effect of Qidan Yifei Tongqiao Granule on serum IL-4、IFN-
!expression in rats with allergic rhinitis(AR),and to explore the mechanism of AR treatment.Methods
32rats of SPF grade SD were randomly divided into blank control group,model control group and
treatment group,The treatment group was divided into traditional Chinese medicine group and western
medicine group,Eight in each group,Half male and half female.Except for the blank control group,The
other three groups were sensitized by intraperitoneal injection of ovalbumin(OVA)and induced by bilateral
nasal drip to prepare allergic rhinitis(AR)rat model.After making the model,The traditional Chinese
medicinegroup wasgiven Qidan YifeiTongqiaogranulesoluIionIoIhesIomach The wesIern medicine
group was given loratadine suspension,The model group was given the same amount of normal saline.
After14daysofcontinuousadministration rats wereki l ed Taketheserum Observegeneralcondition
and nasal symptom score Calculatingthe majororgancoe f icientsofrats Thecontentsofinterleukin4
(IL-4)and interferon in serum were detected by enzyme linked immunosorbent assay(ELISA)!Results Comparedwiththeblankcontrolgroup The serum IL-4level of rats in modelgroup wassignificantly
increased and IFN-y level was decreased(P<all0.05);Compared to the model group,The syndromes of
Qidan Yifei granule group and loraIadine group improved obviously'Reduced nasal sympIom score'Serum
基金项目：四川省人社厅基金(HRS2017070)；成都中医药大学附属医院基金(19TS04)
作者单位+.610075，四川成都，成都中医药大学2.518019，广东深圳，深圳市罗湖妇幼保健院).610072，四川成都，成都中医药大学附属医院
通讯作者：田理,E-mail:189****
IL-4levels decreased,IFN-y levels increased(all P V0.05);and0.05),But in two treatment groups, (!〉0.05)The difference was not statistically significant0.05).Conclusion Qidan Yifei Tongqiao Granule can effectively control the symptoms of itching and sneezing in AR rats,The mechanism may be to down-regulate the level of IL-4and rising IFN-y to correct the imbalance of Th1/Th2and play a therapeutic role in allergic rhinitis rats,Reducing nasal inflammation,This study provides an experimental basis for the treatment of allergic rhinitis by using Yiqi Huoxue Tongqiao method.
【Keywords】Allergic rhinitis；Qidan Yifei Tongqiao granule；Interleukin4；y-interferon；Yiqi Huoxuemethod
大功率led天花灯变应性鼻炎（allergic rhinitis,AR）是I型变态反应介导的鼻腔黏膜高反应性疾病据报道［Z（］,AR 发病率影响全世界高达40%的人口，而该病在中国的发病率也高于35%，是全球范围内患病率增长迅速的呼吸道疾病。同时AR具有高复发率的特点，易出现鼻窦炎、支气管哮喘等并发症，严重影响患者的生活质量⑷。益气活血法是临床AR有效方法之一，祖国医学在益气扶正方面已有文献记载，《素
问》言“邪之所凑，其气必虚”、“正气存内，邪不可干”，纯中药％丹益肺通窍颗粒是田理教授基于“肺心同治”和经方时用来AR的有效内治法，前期研究表明对本病症状缓解及预防复发有显著优势［5：］，本实验通过研究％丹益肺通窍颗粒变应性鼻炎大鼠行为学观察、脏器系数及血清白介素4（Interleukin4,IL-4）、干扰素（interferon-,IFN-）表达的影响，探讨%丹益肺通窍颗粒在AR大鼠中的免疫调节机制，并为该方剂的临床应用提供可靠的实验依据。
1材料
1.1实验动物SPF级SD大鼠32只，雌雄各半，体质量180〜220g（购买于成都达硕有限公司，生产许可证号：SCXK（川）2020030），由SPF大小鼠维持饲料喂养（北京科澳协力饲料有限公司生产，生产许可证号：SCXK（京）2019-0003）；饮水：实验动物饮用水（纯化水），自制。以上动物饲养于四川省食品药品检验检测院（实验单位实验动物使用许可证号：SYXK（川）2020127）。饲养条件：饮水自由不受限制；笼舍：4只每笼饲养，雌雄分开；环境:SPF级大鼠饲养于屏障系统内，饲养房间采用12/12小时明暗交替照明，保持温度20'〜26'，相对湿度40%〜70%。
1.2药物与试剂
1.2.1药物％丹益肺通窍颗粒，中药处方包括黄％、白术、防风、牡丹皮、川穹、黄苓、生荆芥等11味药，均由成都中医药大学附属医院药剂科提供，并由其制备而成。以上诸药均由药剂科袁华强药师鉴
定，符合国家中药的临床应用标准。取％丹益肺通窍颗粒生药141g，加纯净水煎煮至浓度为2.8g/mL，于冰箱中冷藏保存备用。氯雷他定片（10mg/片，海南海神同洲制药有限公司，批号：H20040797）。
rat组合
1.2.2试剂卵清白蛋白（大连美伦生物技术有限公司批号:M0228）；氢氧化铝粉末（哈药集团生物制药有限公司生产）；IL4ELISA检测试剂盒（ExCell Bio批号：22J009）；IFN-y ELISA检测试剂盒（ExCell Bio批号：BZZ1185）。
1.3仪器电子天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有
SQPQVINTIX2102-ICN）；速心机（赛默飞世尔科技（中国）有限公司ST16R型）；金属浴（Scilogex型号:HB120-S）；低温离心机（恒诺型号：Ministar）；酶标仪（普朗型号：DNM9602G）；移液（艾斯玛特型号：5-50$L；20-200$L；200-1000$L）。2方法
2.1动物造模、分组及给药将32只SPF级SD大鼠适应性喂养3天后，雌雄各半，分别称重、标记，根据随机数字表随机分为空白对照组、AR模型组和组，组又分为ARC%丹益肺通窍颗粒组与AR +氯雷他定组，各组8只。造模方法参照AR动物模型制备规范（草案）7-。初步致敏：除空白组外，其余3组将0.3mg的卵清蛋白与30mg的氢氧化铝粉末和1mL的生理盐水相混合，制成混合悬液腹腔注射，隔日一次，共7次。强化致敏：然后使用OVA滴鼻行局部激发，均以5%卵清蛋白局部鼻腔免疫，
每只每侧50$L,1次/日。对大鼠进行最后一次鼻腔制造过敏反应30min以内，参照表1持续观察大鼠出现的症状，上述指标可叠加定量评分，分数大于5分则成功造模归。造模成功后，空白对照组不做处理，按照《药理实验方法学》各组药物灌胃剂量如下：中药组灌胃%丹益肺通窍颗粒溶液（10mL/kg）,2次/日，氯雷他定AR组每日以成人临床剂量8倍的氯雷他定（0.9mg/kg）灌胃，1次/日,10-，模型对照组给予等量生理盐水灌胃，2次/日，连续给药14天。每次用药后采用5%卵清蛋白局部鼻腔免疫每只100$L ,
1次/日，共14次，空白组以等量PBS缓冲液滴鼻, 30min内观察动物的行为。
表1行为学评分标准
观察指标0分1分2分3分鼻无轻微抓鼻1次〜2次反复抓鼻剧烈抓鼻不止喷嚏无1次〜3次4次〜10次11次
流涕无鼻内湿润鼻孔附近流出鼻孔
2.2症状学观察观察大鼠挠鼻次数、打喷嚏次数等并记录评分。
2.3样本采集于第14次24小时后，用钠麻醉大鼠后处死，取腹主动脉血保存备用。
2.4ELISA检测血清IL4及IFN-y的含量采用ELISA试剂盒检测血清中的IL4、IFN-y等细胞因子浓度，单位用Ku/L表示。
2.5统计学处理采用SPSS26.0软件进行统计学处理，计量资料均用&士s)表示，多组间数据比较采用单因素方差分析判断差异的显著性，检验水准a=0.05,P<0.05为差异有统计学意义。
3结果
3.1%丹益肺通窍颗粒对AR大鼠鼻部症状观察(见表2)。
与空白对照组比较，激发第1天、7天模型对照组大鼠鼻部症状评分升高(P<0.05)；与模型对照组同期比较，％丹益肺通窍颗粒组及氯雷他定组给药7、14天评分均下降(P<0.05)。
表2不同组间？鼠鼻部症状评分(分,％±s)
组别n激发第1天激发第7给药后7天给药14天空白对照组
8 2.56士0.26&' 1.49士0.76&' 2.72士0.36&' 1.56士0.64&
模型对照组809.49士0.96(28.49士3.57(14.72士1.39*'8.22士0.92*' %丹益肺通窍颗粒810.89士0.30(25.72士4.16*09士0.30*& 2.06士0.06&氯雷他定组810.。6士0.62(28.89士3.62*8.06士0.61*& 2.22士0.10&注：与空白对照组比较，-!<0.05；与模型对照组比较，&!<0.05；与％丹益肺颗粒组比较,'P<0.05
3.2%丹益肺通窍颗粒对AR大鼠脏器的影响(见表3)对大鼠进行解剖，肉眼观察各组动物主要脏器均未见异常。&士s,n=8)计算脏器系数，与空白对照组比较，各组小鼠在胸腺、心、肺、脾、肾的脏器指数比较，差异无统计学意义(P>0.05)，表明％丹益肺通窍颗粒组对小大鼠的脏器无明显影响。
表3不同组间？鼠的各种脏器I数(％)比较
部位空白组(n=8)模型组(=8)%丹颗粒组n=8)氯雷他定组(n=8)胸腺0.1513士0.044220.1300士.028280.1438士0.024460.1288士0.02532心0.3100士0.031170.3375士.029640.3213士0.040860.3288士0.02475肺0.4750士0.069900.5125士0.090200.4650士0.072700.4850士0.07597脾0.2575士0.024350.2425士0.038820.2425士0.039190.2200士0.02204肾0.6838士0.062320.6913士0.052760.6812士0.061510.6788士0.03137
3.3对AR大鼠血清IL4和IFN-y水平的影响(见表4)与空白对照组比较，模型组大鼠血清中IL4水平明显升高、IFN-y水平降低均(P<0.05)；与模型组比较，％丹益肺颗粒组和氯雷他定组大鼠血清中IL4水平降低、IFN-y水平升高(均P<0.05)，但2个组间比较，差异无统计学意义(P>0.05)。
表4不同组间？鼠血清IL-4J FN-!比较(％±s)
组别n IFN-y IL-4空白对照组836.11士12.3011.39士2.98
模型对照组825.46士5.67*'18.09士3.05*' %丹益肺通窍颗粒833.22士2.28&14.25士1.95&氯雷他定组83188士7.77&14.91士3.20&
注：与空白对照组比较，-P<0.05；与模型对照组比较，&P<0.05；与%丹益肺颗粒组比较，'P<0.054讨论
变应性鼻炎是I型变态反应介导的鼻腔黏膜高反应性疾病［1］，以突然和反复发作的喷嚏、鼻塞、清水样涕、鼻痒为主要表现。目前普遍认为其发病机制是过敏原作用于机体，导致Th1/Th2失衡而引发的以鼻腔黏膜Th2免疫反应为主的炎性反应［11'13］。活化后的Th2细胞分泌的介质IL-4，促进体液免疫反应, IL-4是重要的促炎因子［1Z］,Th1细胞分泌的IFN-y，可抑制Th2细胞的分化和功能，介导细胞免疫反应。
鼻j的发生与肺心两脏密切相关［14］，古籍云“五气入鼻，藏于心肺，心肺有病，而鼻为不利也”，心主血脉，肺主气，气为血之帅，血为气之母，心肺发挥气血
运化功能，使鼻窍通利，若气虚则血液运行无力、流动受阻，最终形成血瘀，血瘀与气虚、气滞常伴随(田老,41门认为，鼻j发病多以气虚为本，血瘀为标，因气虚起病，因血瘀难愈，“气虚血瘀，窍络瘀阻”乃此病基本病机，治以肺心同治，益气活血通窍，经方时用，由玉屏风散加味而成％丹益肺通窍颗粒来效果佳。
%丹益肺通窍颗粒以黄％为君药，白术、防风、川莒为臣药，君药黄％，甘，微温；归脾、肺经，有健脾补肺、益卫固表，补气升阳，利水消肿之功，为补气之圣药，而甘温之性，补益肺脾之气佳[1819]。现代研究,0-表明，黄％含有黄酮类、皂昔类、多糖类等多种有效成分，具有调节免疫、抗癌、抗病毒、神经保护、降糖，等诸多药理学活性。徐江涛等通过黄％多糖对肺气虚型AR大鼠模型影响的研究，得出黄％多糖可能通过下调TSLP.OX40L mRNA表达，抑制Th2细胞分化信号，减轻变应性鼻炎中Th2炎症反应，缓解AR 大鼠鼻黏膜炎性症状。髓源性抑制细胞在自身免疫性疾病等过程中发挥重要的作用。报道[2224]显示黄%多糖可以降低宫颈癌、肺癌患者及荷瘤鼠脾脏中髓源性抑制细胞(MDSCs)水平，提高机体免疫功能。臣药白术，味甘、苦，性温，归脾、胃经，具有燥湿利水、补脾健胃、止汗、安胎等功效，主治脾虚泄泻、食少肚胀、倦怠乏力、胎动不安等病症[25]，为“脾脏补气健脾第一要药”。白术的主要化学成分[26]为挥发油、内酯及多糖，白糖具、肿、血糖及免疫节等多种生物活性。报道称[25]，白术多糖可能对脾淋巴细胞培养体系中的T、B淋巴细胞具有选择性作用，能促进ConA诱导的脾淋巴细胞转化，但对LPS刺激的脾淋巴细胞转化具有抑制作用。防风味辛、微甘，性温，主归膀胱、肝、脾经，具有解表祛风、胜湿之功效2-。研究发现防风具有免疫调节、镇痛、抗炎等作用。臣药川莒，味辛、温，入心包经，是活血行气的良药。川莒嗪是从川莒中提取的生物碱类有效成分，研究发现[2930]，其有保护内皮细胞、抗炎、抗氧化应激、抗血小板活化等作用。君药黄％与臣药白术配伍对减缓气道重塑进展有积极作用[3132]，且该药对补益肺脾之气较单味药的力量更强，效果更好可通过IL邛而发挥调控炎症反应、氧化应激反应、血管新生COPD,4]。
本研究显示，模型组大鼠较正常大鼠血清中IL4水平明显升高、IFN-y水平降低均(P<0.05)；与模型组比较,％丹益肺颗粒组和氯雷他定组证候表现明显改善，鼻部症状评分降低，血清中IL-4水平降低、IFN-y水平升高(均P<0.05)，但2个组比较，差异无统计学意义(P>0.05)，说明％丹益肺通窍颗粒可有效控制AR大鼠鼻痒、喷嚏等症状，其机制可能是下调IL4水平与上升IFN-y水平来纠正Th1/Th2失衡而对变应性鼻炎大鼠发作用，研究为用益
活血通窍法变应性鼻炎提供了实验依据。
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(下转第193页)
为预防闭角型青光眼发作的手术方式，还需要充分考虑到术后前房深度的变化、特别是术前已存在前房角狭窄的病人术后有效人工晶状体位置的变化，从而减少屈光误差的发生(另外，本研究结果显示中央角膜厚度较术前有所增加，可能是由于术中灌注液的冲洗、超声震荡及器械影响等引起的前方波动导致的角膜细胞水肿引起，硬核患者角膜内皮细胞水肿导致的角膜厚度增加较为明显。王涛[10]等研究表明，术后1级水肿和未发生角膜水肿的患者基本能在3月左右恢复对角膜内皮的修复。本研究为术后1月的横断面研究，量化白内障术前术后的前节变化，需进一步随访术后3月进行数据采样分析。
综上，对于年龄相关的白内障病人，早期可采用Pentacam对前房深度和前房角进行精确测量，尤其是对于前房角较狭窄的病人，早期行白内障摘除手术，在一定程度上避免白内障后期过熟，晶状体膨胀引起的急性闭角性青光眼发生，提高患者术后视力和生活质量，同时还需要考虑眼前节术前术后参数的变化，合理精确地选择人工晶状体度数，减少屈光误差。
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