分散液液微萃取-气相谱法测定复杂食品基质中对羟基苯甲酸酯类 何浩;陈幸莺;梁林富;钟鹏鹏;蔡永;孙映球;赵娟
【摘 要】建立复杂食品基质中对羟基苯甲酸酯类及其钠盐的分散液液微萃取(Dispersive Liquid-Liquid Microextraction,DLLME)-气相谱(Gas Chromatography,GC)检测方法.样品浸泡在水中,经煮沸和超声两个步骤提取目标物质.取4 mL待测液,调节pH后分别加入0.6 g氯化钠,0.3 mL四氯化碳和0.6 mL丙酮,手动和涡旋萃取,离心后取下层有机相分析,外标法定量.该方法在25 mg/kg~1000 mg/kg范围内线性良好,r2为0.9972~0.9990,回收率为95.6%~99.2%,相对标准偏差均小于4.0.对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯和丁酯的定量下限为1.2 mg/kg~3.2 mg/kg.%A dispersive liquid liquid microextraction (DLLME)and gas chromatographic (GC)method for the determination of p-hydroxy benzoates and its salts in complex food matrix was established. Sample was soaked in water, using boiling and ultrasound two steps to extract the target material. Take 4 mL sample solution, after adjusting pH, 0.6 g sodium chloride, 0.3 mL carbon tetrachloride and 0.6 mL acetone were added. Using manu-al and vortex extraction, after centrifugation, the organic phase was analyzed. The linearity was good in 25 mg/kg-1000 mg/kg using this method, r2 was 0.9972-0.9990, the recovery rate was 95.6%-99.2%, the relative standard deviation was less than 4.0. The lower limit of quantification for methyl,ethyl,propyl, butyl paraben was 1.2 mg/kg-3.2 mg/kg.
【期刊名称】《食品研究与开发》
【年(卷),期】2017(038)023
【总页数】5页(P146-150)
【关键词】分散液液微萃取;气相谱法;对羟基苯甲酸酸酯类;复杂食品基质
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【作 者】何浩;陈幸莺;梁林富;钟鹏鹏;蔡永;孙映球;赵娟
【作者单位】湘潭市食品药品检验所,湖南湘潭411100;湘潭市食品药品检验所,湖南湘潭411100;中南林业科技大学,湖南长沙410004;湘潭市食品药品检验所,湖南湘潭411100;湘潭市食品药品检验所,湖南湘潭411100;湘潭市食品药品检验所,湖南湘潭411100;湘潭市食品药品检验所,湖南湘潭411100
【正文语种】中 文
样品前处理是食品添加剂检测的一个重要步骤。食品基质复杂，各种添加剂和天然成分众多，食品中目标物质的提取和净化是一个复杂、繁琐和重要的工作。食品前处理的方法主要有液液萃取（liquid-liquid extraction，LLE）[1]，固相萃取 （solid phase extraction，SPE）[2]、超临界萃取（supercritical fluid extraction，SFE）[3]。各种试剂消耗量小的微萃取技术得到较大发展，主要包括固相微萃取（solid-phase microextraction，SPME）[4]、溶剂微萃取（solvent microextraction，SME）[5]、液相微萃取（liquid phase microextraction，LPME）[6]、单液滴微萃取（single drop microextraction，SDME）[7]等。M Rezaee[8]等首次系统地提出了分散液液微萃取方法（dispersive liquid-liquid microextraction，DLLME），该方法汲取浊点萃取和均质液液萃取的优点，具有萃取效率高，平衡时间快，试剂使用少，回收率和准确率高等优点，是一个集萃取和富集于一体的前处理方法。
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对羟基苯甲酸酯类，俗称尼泊金酯，是食品和化妆品中常用的一种广谱防腐剂。GB2760-2014《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》[9]规定对羟基苯甲酸酯类及其钠盐可在醋
、酱油、碳酸饮料及其酱制品中适量使用，其最大使用量为0.012 g/kg～0.5 g/kg。检测食品中对羟基苯甲酸酯类的方法主要有气相谱法[10-12]、液相谱法[13]、气质联用法[14]等。张茂升[15]等研究水中苯、甲苯、二甲苯的分散液液微萃取/气相谱-氢离子火焰（DLLME/GC-FID）测定方法，韩熠[16]等研究饮料中4种对羟基苯甲酸酯类的测定方法。学者主要对萃取剂、分散剂的种类和体积、离子强度、萃取时间等做了研究。研究主要集中于液体样品中有机物的提取与测定，主要使用的萃取剂有、四氯甲烷、二氯乙烯、乙酸乙酯、正辛醇等，分散剂主要有丙酮、乙腈、甲醇等。本文研究DLLME/GC-FID测定食品中对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯、丁酯的方法，采用四氯化碳作为萃取剂、丙酮作为分散剂，实现复杂食品基质中对羟基苯甲酸酯类及其钠盐的同时提取和测定。 GC2010plus型气相谱仪（配FID检测器）、ATY224电子天平：日本岛津公司；HP-5石英毛细管柱（30 m×0.32 mm，0.25 μm）：美国安捷伦公司；MS3数显型混匀器：德国IKA公司；TG16-WS台式高速离心机：湖南湘仪公司；HH-4恒温水浴锅：常州智博瑞仪器制造有限公司；KQ-500VDV型超声波清洗器：昆山市超声仪器有限公司；微量进样器（100 μL）：上海安亭微量进样器厂。
对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯标准品：中国食品药品检定研究院；对羟基苯甲酸丁酯：美国AccuStandard公司；丙酮、无水乙醇、、四氯化碳（谱纯）、盐酸（优级纯）：国药集团化学试剂有限公司；乙腈（谱纯）：迪马科技有限公司；氯化钠、二水乙酸锌（分析纯）：西陇化工股份有限公司；亚铁（分析纯）：天津市光复科技发展有限公司；B-广泛试纸（pH 1～14）：上海三爱思试剂有限公司。
榨菜、酱油、食用槟榔等：当地超市。
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准确称取0.1 g（精确至0.000 1 g）对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯和丁酯标准物质，用丙酮溶解后移入100 mL容量瓶中，定容摇匀，4种标准物质的浓度均为1 000 μg/mL，作为标准物质储备液，于-4℃保存。使用时用丙酮逐级稀释至所需浓度。
准确称取样品约10 g于100 mL具塞比管中，加去离子水至约80 mL，于沸水浴中放置0.5 h，取出后立即超声0.5 h（超声功率为500 W,超声频率为50 kHZ），冷却。加入5 mL 106 g/L亚铁溶液，摇匀后加入5 mL 220 g/L乙酸锌溶液，定容，摇匀。静置0.5 h后用中速定性滤纸过滤至250 mL锥形瓶中，样品溶液备用。在榨菜样品中加入 1.6、200、1 000
μg标准物质，做加标回收试验。
用聚乙烯吸管吸取4.0 mL样品溶液至10 mL锥形离心管中，用（1+1）盐酸调节pH至2～5（用pH试纸检测），加入0.6 g氯化钠，摇匀。加入0.3 mL四氯化碳和0.6 mL丙酮，手动振荡200次后立即放在混匀器上，1 000 r/min涡旋60 s，再手动振荡100次，静置5 min后放入离心机中，3 000 r/min离心5 min，用微量进样器移取150 μL离心管底部有机相至1.5 mL进样瓶中，在进样瓶中补加0.85 mL丙酮，进样瓶在混匀器上涡旋10 s，上机。
分别移取含对羟基苯甲酸酯各 10、20、30、40、50、80 μg的标准使用液于10 mL锥形离心管中，定容至4 mL，加入 1滴（1+1）盐酸，加入 0.6 g氯化钠，摇匀。加入0.3 mL四氯化碳，加入一定体积的丙酮（使加入的丙酮和标准物质中带入的丙酮体积之和为0.6 mL），以下步骤同样品溶液的制备。外标法定量。
进样量：1 μL；分流比为 10∶1；谱柱流量：1.49 mL/min；升温程序：80℃（保持 3 min），10℃/min到200℃，（保持3 min）再以20℃/min升温到250℃（保持9.5 min），程序升温总时间为30 min，进样口温度为220℃，检测器温度为260℃。
萃取剂应符合以下条件：第一，萃取剂的密度应显著大于水的密度，保证离心时萃取剂聚集于锥形离心管底部；第二，萃取剂在水中溶解度应很小，离心后能显著分层；第三，目标物质在有机相的溶解度应远远大于在水相的溶解度，确保萃取效率。本文比较二氯甲烷、和四氯化碳作为萃取剂的萃取效率。3种试剂在20℃时密度为：二氯甲烷（1.325 g/mL）＜（1.484 0 g/mL）＜四氯化碳（1.595 g/mL）。20℃时在水中溶解度为：二氯甲烷（20 g/L）＜（7 g/L）＜四氯化碳（0.8 g/L）。因此，选用四氯化碳作为本次试验的萃取剂。
分散剂应选择在水相和有机相都有较高溶解度的物质，在水相中将目标物质提取后，将目标物质转移至萃取剂中。本次试验比较丙酮、乙醇和乙腈作为分散剂时的萃取效率。试验发现，在萃取剂四氯化碳0.3 mL，氯化钠0.6 g条件下，在乙醇和乙腈作为分散剂时，对羟基苯甲酸甲酯和乙酯在萃取剂四氯化碳中浓度很低，而在水相中浓度较高，萃取效率不高。丙酮作为分散剂则达到了预期的效果。
丹参提取物萃取剂体积的大小对萃取效率有重大影响。萃取体积太小，会使水相中目标物质萃取不充分；萃取体积太大，将使水相中的丙酮转移至有机相中，降低了目标物质在萃取剂中的浓
度。本次试验比较萃取剂四氯化碳在0.1 mL～0.5 mL条件下，对羟基苯甲酸甲、乙、丙、丁酯的峰面积变化，见图1。本文选用萃取剂体积为0.3 mL。
分散剂体积的大小直接影响萃取剂在水相中微滴的形成和萃取效率。本次试验比较分散剂丙酮在0.1 mL～0.5 mL条件下，对羟基苯甲酸甲、乙、丙、丁酯的峰面积，见图2。
对羟基苯甲酸乙酯、丙酯、丁酯的峰面积在丙酮体积在0.1 mL～0.4 mL时逐渐升高，丙酮体积在0.4 mL～1.2mL时逐渐降低。对羟基苯甲酸甲酯的峰面积在丙酮体积为0.1 mL～0.6 mL时逐渐升高，丙酮体积在0.6 mL～1.2 mL时逐渐降低。综合考虑，选择分散剂的体积为0.6 mL。
