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本技术提供了一种复合磁性微粒、去除外周血或骨髓细胞中红细胞的方法及其应用，涉及特异性细胞分离技术领域。所述复合磁性微粒的表面偶联有特异性识别红细胞表面抗原的单抗或多抗，该复合磁性微 粒由于表面偶联有特异性识别红细胞表面抗原的单抗或多抗，进而能够通过抗原抗体反应特异性的将外周血或骨髓细胞中的红细胞吸附去除，有效缓解了现有骨髓细胞中去除红细胞的方法工艺复杂、制备成本高的问题，可以广泛应用于单核细胞的制备过程中。
技术要求
1.一种复合磁性微粒，其特征在于，所述复合磁性微粒包括磁性微粒和特异性单抗或多抗；
所述特异性单抗或多抗包括特异性识别红细胞表面抗原的单抗或多抗；
所述特异性单抗或多抗偶联于磁性微粒表面。
2.根据权利要求1所述的复合磁性微粒，其特征在于，所述复合磁性微粒包括表面含有羧基的磁性微粒，优选为日本JSR公司生产的货号为MagnosphereTM MS300/Caboxyl的磁性微粒。
3.一种根据权利要求1或2所述的复合磁性微粒的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
可控硅触发电路提供含磁性微粒的溶液，随后加入特异性识别红细胞表面抗原的单抗或多抗和偶联剂，偶联，得到复合磁性微粒。
4.根据权利要求3所述的复合磁性微粒的制备方法，其特征在于，所述偶联剂包括戊二醛、硫酸铵、碳二亚胺/N-羟基琥珀酰亚胺(EDC/NHS)和含有NHS酯的抗体中的至少一种，优选为可溶于水的碳二亚胺；
优选地，所述磁性微粒与单抗或多抗混合偶联质量比为5～15：2.5～7.5。
5.根据权利要求3所述的复合磁性微粒的制备方法，其特征在于，所述偶联为震荡偶联；水车式增氧机
优选地，所述震荡偶联的反应条件至少满足如下中的至少一个：
震荡偶联的温度为35～40℃、时间为1.5～2.5h、震荡功率为25～35瓦，频率为35-50rpm；
更优选地，所述震荡偶联的反应条件至少满足如下中的至少一个：
震荡偶联的温度为37℃、时间为2h、震荡功率为25～35瓦，频率为30～40rpm。
6.根据权利要求3所述的复合磁性微粒的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括将复合磁性微粒进行收集的步骤；槐木可以做防腐木吗
优选地，收集包括以下步骤：利用磁铁吸附复合磁性微粒，然后弃上清洗涤沉淀，随后将沉淀悬浮于含有封闭剂的溶液中；
更优选地，所述封闭剂为Sigma公司生产的ProClinTM300。
7.一种去除外周血或骨髓细胞中红细胞的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(A)、提供外周血或骨髓细胞，加入缓冲液混匀，得到外周血或骨髓细胞悬液；
(B)、向外周血或骨髓细胞悬液中加入权利要求1或2所述的复合磁性微粒混匀，静置，随后取上清，得到去除红细胞后的溶液。
触控开关8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述步骤(A)中外周血或骨髓细胞与缓冲液的体积比为1:1～2，优选为1:1；
优选地，所述步骤(A)缓冲液包括0.9％生理盐水、MEM或D-Hanks中的一种；优选为PBS溶液；
优选地，所述步骤(B)外周血或骨髓细胞悬液与复合磁性微粒的体积比为2～6:1～4，优选为2:1；
优选地，所述步骤(B)静置的时间为3～8min，优选为5min。
促进剂ns9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(A)、提供外周血或骨髓细胞，随后将外周血或骨髓细胞与缓冲液以1:1～2的体积比混匀，得到外周血
或骨髓细胞悬液；
(B)、以2～6:1～4的体积比向外周血或骨髓细胞悬液中加入权利要求1或2所述的复合磁性微粒混匀，静置3～8min，随后取上清，得到去除红细胞后的溶液；如仍有未除去的红细胞，可重复上述方法；
优选地，所述方法包括以下步骤：
(A)、提供外周血或骨髓细胞，随后将外周血或骨髓细胞与缓冲液以1：1的体积比混匀，得到外周血或骨髓细胞悬液；
(B)、以2:1的体积比向外周血或骨髓细胞悬液中加入权利要求1或2所述的复合磁性微粒混匀，静置
5min，随后取上清，得到去除红细胞后的溶液。
10.如权利要求1或2所述的复合磁性微粒、如权利要求7～9任一项所述的去除外周血或骨髓细胞中红细胞的方法在制备单核细胞中的应用。
技术说明书
乐谱架复合磁性微粒、去除外周血或骨髓细胞中红细胞的方法及其应用
技术领域
本技术涉及特异性细胞分离技术领域，尤其是涉及一种复合磁性微粒、去除外周血或骨髓细胞中红细胞的方法及其应用。
背景技术
单核细胞(monocytes)是血液中最大的血细胞，也是体积最大的白细胞，是机体防御系统的一个重要组成部分。在目前非洲猪瘟活疫苗的生产过程中，需要使用骨髓细胞中的单核细胞进行生产，然而骨髓细胞中除了单核细胞外，还含有大量的红细胞。在生产过程中，需先将这些红细胞去除，以制备单核细胞。
现有的在骨髓细胞中去除红细胞的方法存在费时、费力、成本高的缺点，并不适合工业化生产。以骨髓细胞在50ml离心管中为例，将骨髓冲洗液通过Falcon单细胞滤网，收集于50mL离心管，1500rpm
5min 4℃离心，去除上清。使用等体积1×红细胞裂解液重悬细胞沉淀，再加入至25ml红细胞裂解液混匀，快速放入25℃水浴锅放置2分钟裂解红细胞(放置期间每一分钟轻柔上下颠倒混匀)，2min后加入25ml骨髓冲洗液终止裂解， 1500rpm 5min4℃离心，弃上清收集沉淀。加入骨髓冲洗液清洗细胞，1500rpm 5min 4℃离心，弃上清收集沉淀。重复清洗2次。第3次加入适量骨髓冲洗液，1500rpm 5mi
n 4℃离心，弃上清收集沉淀，细胞沉淀即为单核细胞。该方法操作完成需40min，需购买或配置红细胞裂解液，且如此多的操作步骤易污染细菌，造成潜在风险。此外，规模化生产不适合应用离心机获取单核细胞。同时，外周血中单核细胞分离，需购买商品化的淋巴细胞分离液，也需要离心，在成本和生产方式上亦不适用于产业化生产单核细胞。
因此，研究开发出一种具有工艺简单、经济性强的去除外周血或骨髓细胞中红细胞的方法，进而高效的制备单核细胞，变得十分必要和迫切。
有鉴于此，特提出本技术。
技术内容
本技术的第一目的在于提供一种复合磁性微粒，所述复合磁性微粒为表面偶联有特异性识别红细胞表面抗原的单抗或多抗，进而该复合磁性微粒通过抗原抗体反应能够特异性的将外周血或骨髓细胞中的红细胞吸附去除。
本技术的第二目的在于提供一种复合磁性微粒的制备方法。
本技术的第三目的在于提供一种去除外周血或骨髓细胞中红细胞的方法。
本技术的第四目的在于提供一种上述复合磁性微粒、上述去除外周血或骨髓细胞中红细胞的方法在单核细胞制备过程中的应用。
为了实现本技术的上述目的，特采用以下技术方案：
本技术提供的一种复合磁性微粒，所述复合磁性微粒包括磁性微粒和特异性单抗或多抗；
所述特异性单抗或多抗包括特异性识别红细胞表面抗原的单抗或多抗；
所述特异性单抗或多抗偶联于磁性微粒表面。
进一步的，所述复合磁性微粒包括表面含有羧基的磁性微粒，优选为日本JSR公司生产的货号为MagnosphereTM MS300/Caboxyl的磁性微粒。
本技术提供的一种上述复合磁性微粒的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
提供含磁性微粒的溶液，随后加入特异性识别红细胞表面抗原的单抗或多抗和偶联剂，偶联，得到复合磁性微粒。
进一步的，所述偶联剂包括戊二醛、硫酸铵、碳二亚胺/N-羟基琥珀酰亚胺(EDC/NHS)和含有NHS酯的抗体中的至少一种，优选为可溶于水的碳二亚胺；
优选地，所述磁性微粒与单抗或多抗混合偶联质量比为5-15mg：2.5-7.5 mg，较佳地，5-10mg：3.5-4.5mg，更佳地，8-10mg：4-5.5mg。
进一步的，所述偶联为震荡偶联；所述震荡偶联的反应条件至少满足如下中的至少一个：
震荡偶联的温度为35～40℃、时间为1.5～2.5h、震荡功率为25～35瓦，频率为30-40rpm。
更优选地，所述震荡偶联的反应条件至少满足如下中的至少一个：
震荡偶联的温度为37℃、时间为2h、震荡功率为30瓦，频率为35rpm。
进一步的，所述制备方法还包括将复合磁性微粒进行收集的步骤；
优选地，所述收集包括以下步骤：利用磁铁吸附复合磁性微粒，然后弃上清洗涤沉淀，随后将沉淀悬浮于含有封闭剂的溶液中；
更优选地，所述封闭剂为Sigma公司生产的ProClinTM300。
本技术提供的一种去除外周血或骨髓细胞中红细胞的方法，所述方法包括以下步骤：
(A)、提供外周血或骨髓细胞，加入缓冲液混匀，得到外周血或骨髓细胞悬液；
(B)、向外周血或骨髓细胞悬液中加入上述复合磁性微粒混匀，静置，随后取上清，得到去除红细胞后的溶液。
进一步的，所述步骤(A)中外周血或骨髓细胞与缓冲液的体积比为1:1～2，优选为1：1；
优选地，所述步骤(A)缓冲液包括0.9％生理盐水、MEM或D-Hanks 中的一种；优选为PBS溶液；
优选地，所述步骤(B)外周血或骨髓细胞悬液与复合磁性微粒的体积比为2～6:1～4，优选2:1。
优选地，所述步骤(B)静置的时间为3～8min，优选为5min。
进一步的，所述方法包括以下步骤：
