抗坏血酸过氧化物酶安徽医科大学
ANHUI MEDICAL UNIVERSITY
论文题目胶质母细胞瘤干细胞与肿瘤血管生成的相关性研究Correlative research between glioblastoma stem-like cells and tumor vascularization
作者姓名贺虎
核桃开口机指导教师牛朝诗教授
学科专业外科学（神外）
研究方向脑肿瘤基础与临床
论文工作时间2010年5月至2012年5月
学位论文独创性声明
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日期：年月日
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日期：年月日日期：年月日
目录
英文缩略词表 (1)
中文摘要 (2)
英文摘要 (4)
前言 (6)
第一章胶质母细胞瘤干细胞分离、培养、纯化与鉴定
1引言 (8)
2材料与方法 (8)
3结果 (13)
4讨论 (18)
5结论 (22)
第二章胶质母细胞瘤干细胞能够向内皮细胞分化以促进肿瘤血管生成
1引言 (23)
2材料与方法 (23)
3结果 (26)
4讨论 (31)
5结论 (32)
全文总结及下一步研究方向 (34)
参考文献 (35)电烤箱温度控制系统
附录 (39)
致谢 (41)
综述 (42)
英文缩略词表
英文缩写英文全称中文名称坐垫纸
bFGF Basic fibroblast growth factor碱性成纤维生长因子BM Basic medium基础培养基
BTSCs Brain tumor stem cells脑肿瘤干细胞
BTS Brain tumor sphere脑肿瘤干细胞球
DAPI Diamidine-phenyl-indolel二脒基苯基吲哚DMEM/F12Dulbeco's modified Eagle's medium/F12改良的Eagle/F12培养基EDTA Ethylene diamine tetraacetic acid乙二胺四乙酸
EGF Epidermal growth factor表皮生长因子
FBS Fetal bovine serum胎牛血清
FITC Fluorescein isothiocyanate异硫氰酸荧光素
GBM Glioblastoma胶质母细胞瘤
GFAP Glial fibrillary acidic protein胶质纤维酸性蛋白GSCs Glioblastoma stem cells胶质母细胞瘤干细胞NSCs Neural stem cells神经干细胞
NSE Neurone specific enolase神经元特异性烯醇酶PBS Phosphate buffered solution磷酸盐缓冲液
SFM Serum-free medium无血清培养基
SCM Serum-containing medium含血清培养基
VEGF Vascular Epidermal growth factor血管内皮生长因子
胶质母细胞瘤干细胞与肿瘤血管生成的相关性研究
中文摘要
目的（1）从胶质母细胞瘤组织中分离、培养肿瘤干细胞，并进行纯化和鉴定从而获得可靠的BTSCs株；（2）检测CD133、Nestin、CD31和VEGF在胶质母细胞瘤干细胞和肿瘤微血管系统中的表达，探讨胶质母细胞瘤干细胞在肿瘤血管的生成中所起的作用。
方法（1）利用简化的无血清培养基（SFM）和悬浮培养方法，从15例GBM 中分离培养BTSCs，采用有限稀释法克隆筛选以纯化BTSCs，观察BTSCs在体外的增殖、分化，并通过免疫荧光染方法鉴定其干细胞特性；（2）采用免疫组织化学法检测CD133、Nestin和VEGF在70例胶质母细胞瘤组织中的表达。（3）采用免疫荧光双染法检测CD133/CD31、CD133/Nestin、Nestin/CD31和VEGF/CD31的
共表达情况，计算CD133+细胞、CD133+血管、Nestin+细胞和Nestin+血管所占的百分率，并进行统计学分析，从而探讨肿瘤干细胞与肿瘤血管生成之前的联系。
结果（1）在GBM中成功分离出BTSCs，在上述SFM中呈悬浮球状生长，具有很强的自我更新与增殖能力，表达特异性抗原标记物CD133，在SCM中BTSCs 发生贴壁分化，表达神经元和星形胶质细胞的特异性抗原神经元特异性烯醇酶（NSE）、GFAP；（2）CD133+肿瘤干细胞或Nestin+肿瘤干细胞不仅在脑胶质母细胞瘤中表达，并且表达于血管内皮细胞。在CD133+肿瘤干细胞或Nestin+肿瘤干细胞分布的区域有丰富的CD133+血管或Nestin+血管表达，同时可见肿瘤干细胞包绕着血管生长。并且，CD133+细胞或Nestin+细胞的百分比与CD133+血管（r =0.482,P=0.002）或Nestin+血管（r=0.390,P=0.015）的表达呈正相关。免疫荧光双染可见，CD133+细胞或Nestin+细胞聚集于CD31+血管周围，并且，CD133+/CD31+、Nestin+/CD31+细胞共表达于血管内皮细胞。同时，我们还发现
