香青兰总黄酮通过调控ｌｎｃＲＮＡＦＯＸＤ３ ＡＳ１对ｏｘ ＬＤＬ诱导的血管内皮细胞损伤的影响算牌器
宋欣丽１，于 梦１，孙 丽２，梁 芳１，鲁卫星１
（１．北京中医药大学第三附属医院，北京１０００２９；２．北京中医药大学东方医院，北京１０００２９）
摘要：目的 探讨香青兰总黄酮对氧化型低密度脂蛋白（ｏｘ ＬＤＬ）诱导的人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）损伤的影响及可能机制。方法 不同浓度（２５、５０、１００μｇ／ｍＬ）的香青兰总黄酮作用于ｏｘ ＬＤＬ诱导的ＨＵＶＥＣ、ｏｘ ＬＤＬ诱导转染ＦＯＸＤ３ ＡＳ１小干扰ＲＮＡ的ＨＵＶＥＣ或香青兰总黄酮作用于ｏｘ ＬＤＬ诱导的转染ＦＯＸＤ３ ＡＳ１过表达载体的ＨＵＶＥＣ后，检测细胞中ＭＤＡ、ＳＯＤ和ＧＳＨ Ｐｘ水平，流式细胞仪检测细胞凋亡，ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ检测细胞中Ｂａｘ和Ｂｃｌ ２蛋白表达水平，ＲＴ ｑＰＣＲ检测ＦＯＸＤ３ ＡＳ１表达水平。结果 ｏｘ ＬＤＬ诱导ＨＵＶＥＣ细胞后，细胞中ＭＤＡ水平、细胞凋亡率、Ｂａｘ蛋白和ＦＯＸＤ３ ＡＳ１表达升高（Ｐ＜０．０５），ＳＯＤ和ＧＳＨ Ｐｘ活性、Ｂｃｌ ２蛋白表达降低（Ｐ＜０．０５）；而香青兰总黄酮干预后，ｏｘ ＬＤＬ诱导的ＨＵＶＥＣ细胞中ＭＤＡ水平、细胞凋亡率、Ｂａｘ蛋白和ＦＯＸＤ３ ＡＳ１表达降低（Ｐ＜０．０５），ＳＯＤ和ＧＳＨ Ｐｘ活性、Ｂｃ
ｌ ２蛋白表达升高（Ｐ＜０．０５），且呈剂量依赖性（Ｐ＜０．０５）。干扰ＦＯＸＤ３ ＡＳ１表达后，ｏｘ ＬＤＬ诱导的ＨＵＶＥＣ细胞中ＭＤＡ水平、细胞凋亡率和Ｂａｘ蛋白表达降低（Ｐ＜０．０５），ＳＯＤ和ＧＳＨ Ｐｘ活性、Ｂｃｌ ２蛋白表达升高（Ｐ＜０．０５）。过表达ＦＯＸＤ３ ＡＳ１后，香青兰总黄酮处理的ｏｘ ＬＤＬ诱导的ＨＵＶＥＣ细胞中ＭＤＡ水平、细胞凋亡率和Ｂａｘ蛋白表达升高（Ｐ＜０．０５），ＳＯＤ和ＧＳＨ Ｐｘ活性、Ｂｃｌ ２蛋白表达降低（Ｐ＜０．０５）。结论 香青兰总黄酮可能通过下调ＦＯＸＤ３ ＡＳ１表达减轻ｏｘ ＬＤＬ诱导的ＨＵＶＥＣ氧化应激和凋亡，保护细胞免受ｏｘ ＬＤＬ损伤。
关键词：香青兰总黄酮； ＦＯＸＤ３ ＡＳ１； 氧化应激； 细胞凋亡
中图分类号：Ｒ２８５．５ 文献标识码：Ａ
ＴｈｅＥｆｆｅｃｔｏｆＴｏｔａｌＦｌａｖｏｎｏｉｄｓｆｒｏｍＤｒａｃｏｃｅｐｈａｌｕｍＭｏｌｄａｖｉｃａＬ．ｏｎｏｘ ＬＤＬ ｉｎｄｕｃｅｄＶａｓｃｕｌａｒＥｎｄｏｔｈｅｌｉａｌＣｅｌｌＩｎｊｕｒｙｂｙ
ＲｅｇｕｌａｔｉｎｇｌｎｃＲＮＡＦＯＸＤ３ ＡＳ１
ＳＯＮＧＸｉｎｌｉ１，ＹＵＭｅｎｇ１，ＳＵＮＬｉ２，ＬＩＡＮＧＦａｎｇ１，ＬＵＷｅｉｘｉｎｇ１
（１．ＢｅｉｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅＴｈｉｒｄＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００２９，Ｃｈｉｎａ；
２．ＤｏｎｇＦａｎｇＨｏｓｐｉｔａｌ，ＢｅｉｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００２９，Ｃｈｉｎａ）
硬盘马达Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔａｎｄｐｏｔｅｎｔｉａｌｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｆｒｏｍＤｒａｃｏｃｅｐｈａｌｕｍｍｏｌｄａｖｉｃａＬ．ｏｎｏｘ ＬＤＬ ｉｎｄｕｃｅｄｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｉｎｊｕｒｙ．ＭｅｔｈｏｄｓＤｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ（２５，５０，１００μｇ／ｍＬ）ｏｆｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｆｒｏｍＤｒａｃｏｃｅｐｈａｌｕｍｍｏｌｄａｖｉｃａＬ．ｗｅｒｅａｐｐｌｉｅｄｏｎｏｘ ＬＤＬ ｉｎｄｕｃｅｄＨＵＶＥＣ，ｏｘ ＬＤＬｉｎｄｕｃｅｄＨＵＶＥＣｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｗｉｔｈＦＯＸＤ３ ＡＳ１ｓｍａｌｌｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇＲＮＡ，ｏｒｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｆｒｏｍＤｒａｃｏｃｅｐｈａｌｕｍｍｏｌｄａｖｉｃａＬ．ａｃｔｅｄｏｎｏｘ ＬＤＬ ｉｎｄｕｃｅｄＨＵＶＥＣｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｗｉｔｈＦＯＸＤ３ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒ．ＴｈｅｋｉｔｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆＭＤＡ，ＳＯＤａｎｄＧＳＨ Ｐｘｉｎｔｈｅｃｅｌｌｓ．Ｔｈｅｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙｗａｓｕｓｅｄｔ
ｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｃｅｌｌａｐｏｐｔｏｓｉｓａｎｄｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆＢａｘａｎｄＢｃｌ ２ｉｎｔｈｅｃｅｌｌｓ．Ａｌｓｏ，ＲＴ ｑＰＣＲｗａｓｃｏｎｄｕｃｔｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆＦＯＸＤ３ ＡＳ１．ＲｅｓｕｌｔｓＡｆｔｅｒｏｘ ＬＤＬｉｎｄｕｃｅｄＨＵＶＥＣ，ｔｈｅＭＤＡｃｏｎｔｅｎｔ，ａｐｏｐｔｏｓｉｓｒａｔｅ，ａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＢａｘｐｒｏｔｅｉｎａｎｄＦＯＸＤ３ ＡＳ１ｉｎｔｈｅｃｅｌｌｓｉｎｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０５），ｗｈｉｌｅｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＳＯＤａｎｄＧＳＨ Ｐｘａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆ
ＤＯＩ：１０．１１７４８／ｂｊｍｙ．ｉｓｓｎ．１００６－１７０３．２０２０．１２．０２９
收稿日期：２０２０ ０９ ０４；修回日期：２０２０ １０ ２２
作者简介：宋欣丽（１９８８—），女，２０１８级在读博士研究生。研究方向：中医药防治心血管病的研究。
通讯作者：鲁卫星（１９５９—），男，硕士，主任医师。研究方向：中医药防治心血管病的研究。Ｅ ｍａｉｌ：ｗｅｉｘｉｎｇｌｕ＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ
Ｂｃｌ ２ｐｒｏｔｅｉｎｄｅｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０５）．ＡｆｔｅｒｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｆｒｏｍＤｒａｃｏｃｅｐｈａｌｕｍｍｏｌｄａｖｉｃａＬ．ｗａｓａｐｐｌｉｅｄｔｏｉｎｔｅｒｆｅｒｅｏｘ ＬＤＬ ｉｎｄｕｃｅｄＨＵＶＥＣ，ｔｈｅＭＤＡｃｏｎｔｅｎｔ，ａｐｏｐｔｏｓｉｓｒａｔｅ，ａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＢａｘｐｒｏｔｅｉｎａｎｄＦＯＸＤ３ ＡＳ１ｉｎｔｈｅｃｅｌｌｓｄｅｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０５），ｗｈｉｌｅｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＳＯＤａｎｄＧＳＨ ＰｘａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＢｃｌ ２ｐｒｏｔｅｉｎｉｎｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０５），ｗｉｔｈａｄｏｓｅ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｍａｎｎｅｒ（Ｐ＜０．０５）．ＡｆｔｅｒｔｈｅｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｗｉｔｈＦＯＸＤ３ ＡＳ１ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ｔｈｅＭＤＡｃｏｎｔｅｎｔ，ａｐｏｐｔｏｓｉｓｒａｔｅ，ａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＢａｘｐｒｏｔｅｉｎｉｎｔｈｅｏｘ ＬＤＬ ｉｎｄｕｃｅｄＨＵＶＥＣｄｅｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０５），ｗｈｉｌｅｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＳＯＤａｎｄＧＳＨ ＰｘａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＢｃｌ ２ｐｒｏｔｅｉｎｉｎｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０５）．ＡｆｔｅｒｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｆｒｏｍＤｒａｃｏｃｅｐｈａｌｕｍｍｏｌｄａｖｉｃａＬ．ｗａｓａｐｐｌｉｅｄｔｏｉｎｔｅｒｆｅｒｅｏｘ ＬＤＬ ｉｎｄｕｃｅｄＨＵＶＥＣｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｅｄＦＯＸＤ３ ＡＳ１，ｔｈｅＭＤＡｃｏｎｔｅｎｔ，ａｐｏｐｔｏｓｉｓｒａｔｅ，ａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＢａｘｐｒｏｔｅｉｎｉｎｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０５），ｗｈｉｌｅｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＳＯＤａｎｄＧＳ
Ｈ ＰｘａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＢｃｌ ２ｐｒｏｔｅｉｎｄｅｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０５）．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＴｈｅｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｆｒｏｍＤｒａｃｏｃｅｐｈａｌｕｍｍｏｌｄａｖｉｃａＬ．ｍａｙｒｅｄｕｃｅｔｈｅｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆｏｘ ＬＤＬ ｉｎｄｕｃｅｄＨＵＶＥＣｂｙｄｏｗｎ ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＦＯＸＤ
３ ＡＳ１，ｗｈｉｃｈｃａｎｐｒｏｔｅｃｔｃｅｌｌｓｆｒｏｍｏｘ ＬＤＬｄａｍａｇｅ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＴｏｔａｌｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｆｒｏｍＤｒａｃｏｃｅｐｈａｌｕｍｍｏｌｄａｖｉｃａＬ．； ＦＯＸＤ３ ＡＳ１； Ｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓ； Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ 动脉粥样硬化是高血压、冠心病等多种心血管疾病的病理基础，是由斑块聚集引起的动脉病症。血管内皮下层氧化低密度脂蛋白（ｏｘ ＬＤＬ）的沉积
是动脉粥样硬化发生的主要诱因［
１］
。研究显示，ｏｘ ＬＤＬ可引起血管内皮细胞损伤，导致脂质成分、炎
性细胞在损伤局部浸润，逐渐形成粥样斑块［２］
。
因
此，抑制ｏｘ ＬＤＬ诱导的血管内皮细胞损伤对于防治动脉粥样硬化尤为重要。香青兰总黄酮是唇形科一年生草本植物香青兰的主要活性成分，具有多种药理活性。研究显示，香青兰总黄酮可通过激活Ｐ ＥＲＫ１／２信号通路抑制Ｈ２Ｏ２诱导的Ｕ８７细胞氧化应激，且促进细胞增殖，具有神经退行性疾病的
潜力［３］；香青兰总黄酮可抑制心肌缺血再灌注而引
起大鼠心肌组织氧化损伤和炎症反应，减轻心肌缺血再灌注大鼠心肌损伤
［４］
。目前，香青兰总黄酮对
血管内皮细胞损伤的影响和机制还未知。叉头框转录因子Ｄ３的反义ＲＮＡ１（ＦＯＸＤ３ ＡＳ１）是一种长链
非编码ＲＮＡ（ｌｎｃＲＮＡ），与肿瘤［５］、变应性鼻炎［６］等
空气过滤材料
疾病的发生发展密切相关。有报道称，ＦＯＸＤ３ ＡＳ１可促进高氧诱导的肺上皮细胞凋亡，参与肺损伤过
程［７］
。但ＦＯＸＤ３ ＡＳ１对血管内皮细胞损伤的影响
还未知。因此，本研究采用ｏｘ ＬＤＬ诱导人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）建立损伤模型，观察了香青兰总黄酮对ＨＵＶＥＣ损伤的影响及其能否调控ＦＯＸＤ３ ＡＳ１发挥作用，报道如下。
预埋螺母材料和方法
１ 细胞和试剂
ＨＵＶＥＣ细胞系，武汉普诺赛生命科技有限公司；胎牛血清（ＦＢＳ），美国Ｈｙｃｏｌｎｅ公司；ＤＭＥＭ培养基、
ＡｎｎｅｘｉｎＶ ＦＩＴＣ／ＰＩ细胞凋亡试剂盒和二喹啉甲酸（ＢＣＡ）蛋白检测试剂盒，北京索莱宝科技有限公司；
ＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅＴＭ
２０００试剂盒和Ｔｒｉｚｏｌ试剂，美国
Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司；ＦＯＸＤ３ ＡＳ１小干扰ＲＮＡ（ｓｉ ＦＯＸＤ３ ＡＳ１）、乱序无意义阴性序列（ｓｉ ＮＣ）、ＦＯＸＤ３ ＡＳ１过表达载体（ｐｃＤＮＡ ＦＯＸＤ３ ＡＳ１）、空载体（ｐｃＤＮＡ）和ＰＣＲ引物，上海生工生物工程有限公司；丙二醛（ＭＤＡ）、超氧化物歧化酶（路网
ＳＯＤ）和谷胱甘肽过氧化酶（ＧＳＨ Ｐｘ）试剂盒，南京建成生物工程研究所；兔抗人Ｂ淋巴细胞瘤 ２（Ｂｃｌ ２）、Ｂ淋巴细胞瘤 ２相关蛋白（Ｂａｘ）和甘油醛 ３ 磷酸脱氢酶（ＧＡＰＤＨ）多克隆抗体，美国ＳａｎｔａＣｒｕｚ公司；反转录试剂盒和ＰＣＲ试剂盒，深圳晶美生物工程有限公司。 ２ 方法
２．１ 香草兰总黄酮的制备 参考文献方法［８］制备香青兰总黄酮。香青兰药材干燥、粉碎，并过
２００目筛，以１∶３（质量∶体积）加入４０％乙醇，７０℃加热回流，提取３次，合并滤液。滤液经ＨＰ大孔吸附树脂纯化，然后用７０％乙醇洗脱，浓缩干燥后得到香青兰总黄酮。采用紫外分光光度计法测定总黄酮含量为６５．２９％。
２．２ 细胞培养和转染 复苏ＨＵＶＥＣ，用含１０％ＦＢＳ的ＤＭＥＭ培养基（常规培养基）培养。将
对数生长期的ＨＵＶＥＣ以１×１０５
个／孔接种于６孔板
中，用ＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅＴＭ
２０００脂质体法，分别转染ｓｉ ＦＯＸＤ３ ＡＳ１、ｓｉ ＮＣ、ｐｃＤＮＡ ＦＯＸＤ３ ＡＳ１、ｐｃＤＮＡ。转染６ｈ后，更换培养基。再培养２４ｈ，收集细胞备用。
２．３ 细胞分组处理 将ＨＵＶＥＣ以２．５×１０４个／孔接种于２４孔板中。未转染的细胞分为对照组
（Ｃｏｎ组）、ｏｘ ＬＤＬ组、ｏｘ ＬＤＬ＋香青兰总黄酮 低
组、ｏｘ ＬＤＬ＋香青兰总黄酮 中组、ｏｘ ＬＤＬ＋香青兰总黄酮 高组，Ｃｏｎ组细胞常规培养基培养，ｏｘ ＬＤＬ组细胞用含２５μｇ／ｍＬ［９］ｏｘ ＬＤＬ的培养基培养，ｏｘ ＬＤＬ＋香青兰总黄酮 低组、ｏｘ ＬＤＬ＋香青兰总黄酮 中组、ｏｘ ＬＤＬ＋香青兰总黄酮 高组细胞分别用含２５
、５０、１００μｇ／ｍＬ［３］香青兰总黄酮与２５μｇ／ｍＬｏｘ ＬＤＬ的培养基共同培养。转染ｓｉ ＦＯＸＤ３ ＡＳ１、ｓｉ ＮＣ的细胞用含２５μｇ／ｍＬｏｘ ＬＤＬ的培养基培养，记为ｏｘ ＬＤＬ＋ｓｉ ＦＯＸＤ３ ＡＳ１组、ｏｘ ＬＤＬ＋ｓｉ ＮＣ组。转染ｐｃＤＮＡ ＦＯＸＤ３ ＡＳ１、ｐｃＤＮＡ的细胞用１００μｇ／ｍＬ香青兰总黄酮与２５μｇ／ｍＬｏｘ ＬＤＬ的培养基共同培养，记为ｏｘ ＬＤＬ＋香青兰总黄酮＋ｐｃＤＮＡ组、ｏｘ ＬＤＬ＋香青兰总黄酮＋ｐｃＤＮＡ ＦＯＸＤ３ ＡＳ１组。培养２４ｈ后，收集细胞，进行相关指标检测。每组设３个复孔，实验重复３次。
２．４ 试剂盒法检测细胞中ＭＤＡ、ＳＯＤ和ＧＳＨ Ｐｘ水平 裂解各组细胞，３５００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，上清液－２０℃保存。分别参照ＭＤＡ、ＳＯＤ和ＧＳＨ Ｐｘ试剂盒说明书，检测其上清中水平。
２．５ 流式细胞仪检测细胞凋亡 ＰＢＳ清洗各组细胞２次，按照ＡｎｎｅｘｉｎＶ ＦＩＴＣ／ＰＩ试剂盒说明书，用流式细胞仪检测细胞凋亡。
２．６ ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ法检测Ｂａｘ和Ｂｃｌ ２蛋白表达ＲＩＰＡ试剂提取各组细胞中总蛋白，ＢＣＡ法对蛋白定量，行ＳＤＳ ＰＡＧＥ电泳，并将分离蛋白转至ＰＶＤＦ膜。置于５％脱脂奶粉溶液中封闭１ｈ后，分别于Ｂａｘ（１∶５００）、Ｂｃｌ ２（１∶５００）和ＧＡＰＤＨ（
１∶８００）一抗孵育液中４℃过夜，再于山羊抗兔二抗（１∶２０００）孵育液中３７℃孵育１ｈ。最后加显影液避光显影，曝光拍照。
２．７ ＲＴ ｑＰＣＲ检测ＦＯＸＤ３ ＡＳ１表达 Ｔｒｉｚｏｌ试剂提取各组细胞中总ＲＮＡ，反转录为ｃＤＮＡ，然后行ＰＣＲ扩增。扩增条件：９５℃３ｍｉｎ，９５℃１０ｓ，６０℃３０ｓ，７２℃３０ｓ，共３５个循环。引物序列：ＦＯＸＤ３ ＡＳ１上游５′ ＡＴＧＧＴＧＡＴＧＡＧＣＧＣＧＡＴＧＴＡ ３′，下游５′ ＧＧＡＣＡＧＡＣＡＧＧＧＡＴＴＧＧＧＴＴ ３′；内参ＧＡＰＤＨ上游５′ ＧＣＣＧＡＴＣＣＡＣＡＧＣＴＣＧＣＡＣＧＴＧ ３′，下游５′ ＣＧＡＴＡＧＣＧＣＧＣＴＡＣＡＴＡＣＣＡＣＴ ３′。２－△△Ｃｔ法计算ＦＯＸＤ３ ＡＳ１的相对表达水平。
３ 统计学处理
ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ７．０分析实验数据。计量资料以均数±标准差（ｘ±ｓ）表示。两组间比较用独立样本ｔ检验。多组间比较用单因素方差分析，进一步两两比较采用ＳＮＫ ｑ检验。以Ｐ＜０．０５表示差异有统计学意义。
结 果
１ 香青兰总黄酮对ｏｘ ＬＤＬ诱导的血管内皮细胞氧化应激的影响
如表１所示，ｏｘ ＬＤＬ诱导ＨＵＶＥＣ细胞后，细胞中ＭＤＡ水平升高（Ｐ＜０．０５），ＳＯＤ和ＧＳＨ Ｐｘ活性降低（Ｐ＜０．０５）；而香青兰总黄酮干预后，ｏｘ ＬＤＬ诱导的ＨＵＶＥＣ细胞中ＭＤＡ水平降低（Ｐ＜０．０５），ＳＯＤ和ＧＳＨ Ｐｘ活性升高（Ｐ＜０．０５），且呈剂量依赖性（Ｐ＜０．０５）。
表１ 香青兰总黄酮对ｏｘ ＬＤＬ诱导的ＨＵＶＥＣ氧化应激的影响（ｎ＝９，ｘ±ｓ）
组别ＭＤＡ（ｎｍｏｌ／Ｌ）ＳＯＤ（Ｕ／ｍＬ）ＧＳＨ Ｐｘ（Ｕ／ｍＬ）
对照组０．４２±０．０３４１．０１±４．０５８３．８１±６．５５
ｏｘ ＬＤＬ组６．７５±０．４５ １１．７８±１．０３ ２３．１３±２．２３ ｏｘ ＬＤＬ＋香青兰总黄酮－低组５．０３±０．３１＃１８．０９±１．４９＃４１．１２±３．４０＃
ｏｘ ＬＤＬ＋香青兰总黄酮－中组３．４２±０．２９＃＆２６．１９±２．０５＃＆５７．８２±４．１３＃＆
ｏｘ ＬＤＬ＋香青兰总黄酮－高组１．１３±０．０９＃＆＄３４．５６±２．１５＃＆＄７２．９１±６．２１＃＆＄Ｆ值８０１．３３２２２２．１１３２３１．１６９
Ｐ值＜０．００１＜０．００１＜０．００１
注：与对照组比较， Ｐ＜０．０５；与ｏｘ ＬＤＬ组比较，＃Ｐ＜０．０５；与ｏｘ ＬＤＬ＋石香兰总黄酮 低组比较，＆Ｐ＜０．０５；与ｏｘ ＬＤＬ＋石香兰总黄酮 中组比较，＄Ｐ＜０．０５
２ 香青兰总黄酮对ｏｘ ＬＤＬ诱导的血管内皮细胞凋亡的影响
如图１、表２所示，ｏｘ ＬＤＬ诱导ＨＵＶＥＣ细胞后，细胞凋亡率和Ｂａｘ蛋白表达升高（Ｐ＜０．０５），Ｂｃｌ ２蛋白表达降低（Ｐ＜０．０５）；而香青兰总黄酮干预后，ｏｘ ＬＤＬ诱导的ＨＵＶＥＣ细胞凋亡率和Ｂａｘ蛋白表达降低（Ｐ＜０．０５），Ｂｃｌ ２蛋白表达升高（Ｐ＜０．０５），且呈剂量依赖性（Ｐ＜０．０５）。
注：Ａ凋亡相关蛋白表达；Ｂ细胞凋亡流式图
图１ 香青兰总黄酮对ｏｘ ＬＤＬ诱导的ＨＵＶＥＣ凋亡的影响
表２ 香青兰总黄酮对ｏｘ ＬＤＬ诱导的ＨＵＶＥＣ凋亡的影响（ｎ＝９，ｘ±ｓ）
组别凋亡率（％）Ｂｃｌ ２蛋白Ｂａｘ蛋白
对照组６．８８±０．５５０．６１±０．０３０．２３±０．０２
ｏｘ ＬＤＬ组３４．５４±２．５９ ０．１３±０．０２ ０．６８±０．０５ ｏｘ ＬＤＬ＋香青兰总黄酮－低组２６．６１±２．１０＃０．２５±０．０２＃０．５６±０．０３＃
ｏｘ ＬＤＬ＋香青兰总黄酮－中组１８．６９±１．１１＃＆０．３６±０．０３＃＆０．４３±０．０３＃＆
ｏｘ ＬＤＬ＋香青兰总黄酮－高组１１．７７±１．０２＃＆＄０．５４±０．０３＃＆＄０．３１±０．０３＃＆＄Ｆ值４０７．６９４５０８．７５７２６７．３４８
Ｐ值＜０．００１＜０．００１＜０．００１
注：与对照组比较， Ｐ＜０．０５；与ｏｘ ＬＤＬ组比较，＃Ｐ＜０．０５；与ｏｘ ＬＤＬ＋石香兰总黄酮 低组比较，＆Ｐ＜０．０５；与ｏｘ ＬＤＬ＋石香兰总黄酮 中组比较，＄Ｐ＜０．０５
３ 香青兰总黄酮对ｏｘ ＬＤＬ诱导的血管内皮细胞中ＦＯＸＤ３ ＡＳ１表达的影响
如表３所示，ｏｘ ＬＤＬ诱导ＨＵＶＥＣ细胞后，细胞中ＦＯＸＤ３ ＡＳ１表达升高（Ｐ＜０．０５）；而香青兰总黄酮干预后，ｏｘ ＬＤＬ诱导的ＨＵＶＥＣ细胞中ＦＯＸＤ３ ＡＳ１表达降低（Ｐ＜０．０５），且呈剂量依赖性（Ｐ＜０．０５）。
表３ 香青兰总黄酮对ｏｘ ＬＤＬ诱导的ＨＵＶＥＣ中 ＦＯＸＤ３ ＡＳ１表达的影响（ｎ＝９，ｘ±ｓ）
组别ＦＯＸＤ３ ＡＳ１对照组１．００±０．０５
ｏｘ ＬＤＬ组
３．３４±０．２２
ｏｘ ＬＤＬ＋香青兰总黄酮－低组２．５８±０．１７＃ｏｘ ＬＤＬ＋香青兰总黄酮－中组１．８５±０．１５＃＆ｏｘ ＬＤＬ＋香青兰总黄酮－高组
１．３６±０．１２
＃＆＄Ｆ值３４３．２５７Ｐ值
＜０．００１
注：与对照组比较， Ｐ＜
０．０５；与ｏｘ ＬＤＬ组比较，＃Ｐ＜０．０５；与ｏｘ ＬＤＬ＋石香兰总黄酮 低组比较，＆Ｐ
＜０．０５；与ｏｘ ＬＤＬ＋石香兰总黄酮 中组比较，＄Ｐ＜０．０５
４ 干扰ＦＯＸＤ３ ＡＳ１表达对ｏｘ ＬＤＬ诱导的
血管内皮细胞损伤的影响
如图２、表４所示，干扰ＦＯＸＤ３ ＡＳ１表达后，ｏｘ ＬＤＬ诱导的ＨＵＶＥＣ细胞中ＭＤＡ水平降低（Ｐ＜０．０５），ＳＯＤ和ＧＳＨ Ｐｘ活性升高（Ｐ＜０．０５），细胞凋亡率和Ｂａｘ蛋白表达降低（Ｐ＜０．０５），Ｂｃｌ ２蛋白表达升高（Ｐ＜０．０５）
。
注：Ａ凋亡相关蛋白表达；Ｂ细胞凋亡流式图
图２ 干扰ＦＯＸＤ３ ＡＳ１表达对ｏｘ ＬＤＬ诱导的血管内皮细胞凋亡的影响表４ 干扰ＦＯＸＤ３ ＡＳ１表达对ｏｘ ＬＤＬ诱导的ＨＵＶＥＣ损伤的影响（ｎ＝９，ｘ±ｓ）
组别ＦＯＸＤ３ ＡＳ１ＭＤＡ（ｎｍｏｌ／Ｌ）ＳＯＤ（Ｕ／ｍＬ）ＧＳＨ Ｐｘ（Ｕ／ｍＬ）凋亡率（％）Ｂｃｌ ２蛋白Ｂａｘ蛋白ｏｘ ＬＤＬ＋ｓｉ ＮＣ组１．００±０．０５
６．９３±０．４５
１０．８２±０．８９２２．５０±２．１３３５．９３±２．１２
０．１２±０．０２
木纹扣板０．７０±０．０４
ｏｘ ＬＤＬ＋ｓｉ ＦＯＸＤ３ ＡＳ１组
０．３２±０．０３
１．６１±０．１５
２８．２３±１．４５ ６３．０５±５．０５ １５．９４±１．２５
０．５１±０．０３
０．３９±０．０３
ｔ值３４．９８６３３．６４７３０．６９９２２．１９６２４．３６７３２．４５０１８．６００Ｐ值
＜０．００１
＜０．００１
＜０．００１
＜０．００１
＜０．００１
＜０．００１
＜０．００１
注：与ｏｘ ＬＤＬ＋ｓｉ ＮＣ组比较， Ｐ＜
０．０５ ５ 过表达ＦＯＸＤ３ ＡＳ１逆转香青兰总黄酮对
ｏｘ ＬＤＬ诱导的血管内皮细胞损伤的作用
如图３、表５所示，过表达ＦＯＸＤ３ ＡＳ１后，香青兰总黄酮处理的ｏｘ ＬＤＬ诱导的ＨＵＶＥＣ细胞中
ＭＤＡ水平升高（Ｐ＜０．０５），ＳＯＤ和ＧＳＨ Ｐｘ活性降低（Ｐ＜０．０５），细胞凋亡率和Ｂａｘ蛋白表达升高（Ｐ＜０．０５），Ｂｃｌ ２蛋白表达降低（Ｐ＜０．０５）
。
注：Ａ凋亡相关蛋白表达；Ｂ细胞凋亡流式图
图３ 过表达ＦＯＸＤ３ ＡＳ１逆转香青兰总黄酮对ｏｘ ＬＤＬ诱导的ＨＵＶＥＣ凋亡的作用
