田艳销，杨小东，刘成功
驻马店市中心医院全科医疗科（河南驻马店463000)
【摘要】目的探讨长链非编码R N A M E G3(l n c R N A M E G3)在2型糖尿病（T2D M)伴幽门螺杆菌（W p)感染患者血清中的表达及意义。方法选取132例T2D M患者为研究对象，根据是否感染W p分为非感染W p 组（49例）和感染//p组（83例）。实时荧光定量P C R(R T-q P C R)检测两组患者血清I n c R N A M E G3水平，全 自动分析仪检测血清游离脂肪酸（F F A)水平，乳胶增强免疫（超敏）比浊法检测超敏C反应蛋白（h s - C R P)、酶联免疫吸附法检测肿瘤坏死因子a(T N F-a)、白细胞介素-6(I L-6)、丙二醛（M D A)水平、超氧化物歧化酶（S O D)和谷胱甘肽还原酶（G S H -P x)表达水平。比较两组患者各检测指标水平差异，并进行P e a r s o n相关性分析。L o g i s t i c回归分析影响T2D M患者感染//p的因素。结果与非感染Z/p组比较，感染办组患者血清I n c R N A M E G3、S0D和 G S H -P x 7]c平显著降{氐（P<〇. 05)，F F A、T N F-a、I L-6、h s-C R P和 M D A水平均显著升高（f <0.05)。P e a r s o n相关性分析结果显示，T2D M伴///>感染患者血清l n c R N A M E G3水平与F F A、T N F-a、I L-6、h s — C R P和 M D A呈负相关（P<0.05)，与S O D和G S H-P x呈正相关（P< 0.05)o Logistic 多因素分析结果显示，l n c R N A M E G3是影响T2D M患者感染//p的独立因素（P <0.05)。结论 I n c R N A M E G3在 T2D M伴冲感染患者血清中表达降低，其可能通过调节机体内脂肪酸水平、炎性因子表达及氧化应激水平参与T2D M感染过程。
【关键词】I n c R N A M E G3;2型糖尿病；幽门螺杆菌；感染
【中图分类号】R587.1;R573【文献标志码】A
DOI：10. ki.gdyx.20200561
Expression and significance of IncRNA MEG3 in serum of T2DM patients infected with H p.TIAN Yan -juan, YANG Xiao -dong, LIU Cheng -gong. Department of General Medicine, Zhumadian Central Hospital,Zhumadian 463000, Henan, China
【Abstract】Objective T o investigate the expression a n d significance of I n c R N A M E G3s e r u m of rr2D M patients infected with Hp.Methods 132T2D M patients w e r e selected. T h e y w e r e divided into n o n- Hp g r o u p(49 c a ses) a n d Hp g r o u p(83c a s e s) a c c o r d i n g to w h e t h e r they w e r e infected with Hp.R T -q P C R w a s u s e d to detect the s e r u m I n c R N A M E G3levels. T h e fully a u t o m a t i c analyzer w a s u s e d to detect s e r u m free fatty acid (F F A)le
vels. T h e latex e n h a n c e d i mm u n e(hypersensitivity) turbidimetric m e t h o d w a s u s e d to detect the h s - C R P.E n z y m e -linked i m m u n o s o r b e n t assay w a s u s e d to detect the levels of T N F - a,IL -6,M D A,S O D a n d G S H - Px. T h e differences in the levels of detection indicators b e t w e e n the t w o g r o u p s of patients w e r e c o m p a r e d,a n d P e a r s o n correlation analysis w a s performed. Logistic regression analysis w a s p e r f o r m e d to a n a l y z e d the factors affecting Hp infection in T2D M patients. Results C o m p a r e d with the n o n- Hp g r o u p,s e r u m levels of I n c R N A M E G3,S O D a n d G S H - P x in patients with Hp infection w e r e significantly red u c e d(P <0. 05) ,a n d levels of F F A,T N F - a,IL -6,hs - C R P a n d M D A w e r e significantly increased ( P <0. 05). P e a r s o n correlation analysis s h o w e d that s e r u m I n c R N A M E G3level in T2D M patients infected with Hp w a s significantly negatively correlated with F F A,T N F-a,I L-6,h s-C R P,a n d M D A(P<0. 05) ,a n d positively correlated with S O D
a n d G S H - P x( P <0. 05). Logistic multivariate analysis s h o w e d that I n c R N A M E G3a n d h s - C R P w e r e i n d e p e n d e n t factors affecting Hp infection in T2D M patients. Conclusion T h e expression of I n c R N A M E G3is r e d u c e d in s e r u m of T2D M patients infected with Hp.I t m a y participate in the process of Hp infection in T2D M
b y regulating the level of fatty acids, i n f l ammatory factors a n d oxidative stress in the body.
【Key w ords】I n c R N A M E G3 ;type 2 diabetes; Helicobacter pylori;infection
*基金项目：河南省医学科技攻关计划项目（201806210)
2型糖尿病（type2 d i a b e t e s，T2D M)是以胰岛素 抵抗所导致的高血糖为主要特征的慢性代谢性炎性 疾病，其发病率呈增长趋势，成为继肿瘤、心血管疾 病之后的第3位威胁人类健康的重大疾病[1]。研 究[2]显示，炎症可引起胰岛素抵抗和胰岛(3细胞凋 亡，氧化应激可降低胰岛P细胞功能，导致T2D M
的发生。幽门螺杆菌（helicobacter pylori，///))是一 种革兰阴性弯曲杆菌，冲感染可导致患者出现胰岛 素抵抗、血脂氧化代谢紊乱以及氧化应激反应[3]。由于T2D M患者自身免疫系统紊乱，易感染冲[4]。长链非编码 R N A(l o n g n o n - c o d i n g R N A，I n c R N A)是一类小分子单链非编码R N A，在炎症反应和炎症 性疾病中发挥重要作用[5]。I n c R N A M E G3是近年 来新发现的一种Inc R N A。研究[6_7]显示，I n c R N A M E G3参与肺癌、胃癌等肿瘤的发生发展，可作为肿 瘤的分子靶点和预后判断生物标志物。但目 前，l m‘R N A M E G3在T2D M伴坳感染患者中的表达和意义还未知。本研究通过检测T2D M伴///；感 染患者血清中的表达水平，初步探讨其在该疾病中 的临床意义。
1资料与方法
1.1 一般资料选取2016年10月至2018年12 月于本院就诊的132例T2D M患者为研究对象，诊 断符合2013年中华医学会糖尿病学分会制定的中 国糖尿病防治指南181，其中男59例，女73例。排除 患有严重肾、肝及血管疾病的T2D M患者。经l3C尿 素呼气试验（l3C - U B T，D0B >4为阳性，即感染 冲）检测冲感染者83例（感染埤组），非感染者 49例（非感染W p组）。本研究经医院伦理委员会批 准同意，患者自愿签署知情同意书。
1.2血样采集和指标检测采集所有受试者清晨 空腹静脉血，3 500 r/m i n离心10 m i n，分离血清，-201保存备用。岛津8000全自动分析仪检测血 清游离脂肪酸（F F A)水平，乳胶增强免疫（超敏）比浊法检测超敏C反应蛋白（hs - C R P)，酶联免疫吸 附法检测血清肿瘤坏死因子-a(T N F - a)和白细 胞介素-6(I L-6)、硫代酸法检测血清丙二 醛（M D A)水平，黄嘌呤氧化酶法检测血清超氧化物 歧化酶(S O D)，还原型谷胱甘肽消耗法检测血清谷 胱甘肽还原酶（G S H - P x)，试剂盒（科研用）均购自 南京建成生物工程研究所，所有样本检测时，均设置 3个复孔，结果取平均值。
1.3 实时荧光定量P C R(R T- q P C R)检测血清ln-
c R N A M E G3表达水平T r i z o l试剂提取血清中总 R N A，使用微量核酸仪检测R N A在260 n m和280 m n处的吸光度值U)，比值U260my/l28()l l…,)处于1.8 ~2.0范围内说明R N A纯度较好，可用于后续 检测。参照逆转录试剂盒将R N A合成为c D N A。以c D N A为模板，进行扩增，总体系20 (x L。
扩增条 件:95丈;5 m i n，95t： 10 s，60T； 30 s，72X： 30 s，共35 个循环；I n c R N A M E G3 5' - G C C T G C T G C-C C A T C T A C A C - 3(,- C C T C T T C A T C C T T T-G C C A T C - 3，；G A P D H 上游 5' - A G A G G C A G G G A T-G A T G T T C T G- 3，，下游5' - G A C T C A T G A C C A-C A G T C C A T G C-3'。引物由上海生工生物工程股份 有限公司合成。以3 -磷酸甘油醛脱氢酶（卜《^31-(lehydt*- 3 - phosphate(.丨ehydrogenase，G A P D H)为内 参，采用2_AiG'法计算I n c R N A M E G3的相对表达 水平。
rdt-2611.4统计学方法利用S P S S 2
2.0统计软件，符合 正态分布的计量资料以表示。两组间比较采 用独立样本 < 检验。P e a r s o n相关性分析T2D M伴 卟感染患者血清中I n c R N A M E G3表达水平与F F A、T N F - a、I L - 6、hs- C R P、M D A、S O D 和 G S H -P x水平相关性^L o g i s t i c回归分析影响T2D M患 者感染///)的因素。以P<0. 05为差异有统计学意 义。
2结果
2.1 T2D M伴///，感染患者血清中h i c R N A M E G3和F F A水平与非感染埤组比较，感染坳组患者血清I n c R N A M E G3水平显著降低（P<0.05)，F F A 水平显著升髙（Z5<〇.〇5)。见表1。
表I两组患者血清IncRNA MEG3和FFA水平+i ± s
项目例数IncRNA MEG3FFA( mmol/mL)
非感染Wp组49 1.05 ±0.090.62 ±0.06
感染卟组830.43 ±0.050.95 ±0. 11
/值50.92119.350
P值<0.001<0.001
2.2 T2D M伴冲感染患者血清炎性因子表达水平
与非感染/和组比较，感染///)组患者血清T N F- a、I L-6和hs -C R P水平均显著升高（Z3 <0.05)。见表2。
表2两组患者血清炎性因子表达水平
项目例数
T N F-a
(ng/L)
IL-6
(ng/L)
hs - CRP
(mg/L)
非感染坳组49 2.68 ±0.54 6.39 ±0.817.59 ±0.93
感染坳组838. 19 ±1. 1311.4 ±1.5213.26 ±1.68
f值32.00721.33121.720
Z5值<0.001<0.001<0.001
2.3 T2D M伴///，感染患者血清氧化应激指标水平
与非感染办组比较，感染///)组患者血清M D A
水平显著升高（/"<〇. 05) ,S O D和G S H - P x水平显 著降低（P<0.05)。见表3。
表3两组患者血清氧化应激指标水平.i±S
项目例数
MDA
(nmol/mL)
SOD
(U/m L)
GSH - Px
(U/m L)
非感染卟组498.49 ±1.23112.05 ±10.43328.46 ±21.49感染//p组8314.82 ±2. 1575.61 ±6. 12147.41 ± 12.43£值18.85025.32561.391
户值<0.001<0.001<0.001
2.4 T2D M伴///>感染患者血清中I n c R N A M E G3 与F F A、炎性因子、氧化应激指标的相关性 P e a r-s o n相关性分析结果显示，T2D M伴冲感染患者血清 I n c R N A M E G3 7jC平与 F F A、T N F-a、I L-6、h s- C R P和M D A呈负相关(P<0.05)，与 S O D 和G S H - P x呈正相关(P<0.05)。见表4。
表4血清IncRNA MEG3水平与FFA、炎性因子、
氧化应激指标的相关性
血清指标
IncRNA MEG3
^■值P值FFA-3.4590.042
T N F-a-4.5730.013
IL-6-4.0570.025
h s-C R P-4.6890.009
MDA-3.2750.047
SOD 3.6790.034
GSH - Px 3.5810.038
2.5 影响T2D M患者感染卟的L o g i s t i c多因素分 析 L o g i s t i c多因素分析结果显示，IncRNA M EG3 是影响T2D M患者感染冲的独立因素（P<0. 05 )。见表5。
表5 LogistU'多因素分析
项目回归系数SE WWrf值p值O R值95% C/ FFA0.5980.468 1.6310.089 1.818 1.236 -2.674 T N F-a0.8380.724 1.3390. 134 2.312 1.024 -5.218 IL-6 1. 159 1. 104 1. 1030. 143 3. 188 2.463 -4.127 hs-C R P0.8860.386 5.2730.013 2.426 1.348 -4.367 M DA0.7270.574 1.6050.095 2.069 1.249 - 3.428 SOD-1.2840.943 1.8530.0680.2770• 125 〜0.614 GSH - Px-0.5730.439 1.7050.0730.5640.348 -0.913 IncRNA MEG3-0.7980.347 5.2830.0090.4500.237 〜0.856
3讨论
M E G3基因位于染质14q32. 3，转录产物为 I n r R N A。近年来研究表明，I n c R N A M E G3在与心血 管疾病和炎症性疾病密切相关[9_i e]。Z h o u等["]研 究显示，I n c R N A M E G3在冠状动脉疾病患者组织中 表达降低，过表达I n c R N A M E G3可通过靶向抑制 m i R-21表达降低血管内皮细
胞的增殖。刘振峰 等[12]研究显示，I n c R N A M E G3在骨性关节炎软骨 组织中表达降低，其可能通过调节血管生成在骨性 关节炎的发生、发展中起重要作用。但目前，ln-c R N A M E G3在T2D M伴冲感染患者中的表达和意 义还鲜见相关报道。本研究选取共选取132例 T2D M患者为研究对象，其中83例患者感染办，感 染率为62. 88%，与田利华等[13]报道的T2D M患者 感染率60. 34%的结果接近，说明多数T2D M患者 易感染坳。与未感染坳患者比较，T2D M伴冲感染患者血清中I n c R N A M E G3表达降低，是T2D M患 者感染坳的独立影响因素，提示I n c R N A M E G3可 能参与T2D M感染冲。
冲是人类感染率最高的细菌之一，其可结合内 皮细胞，刺激细胞表达黏附因子，且分泌细胞因子，导致白细胞黏附、聚集并损伤血管内皮，加剧局部炎 症反应[14]。坳还可引起全身性炎症反应升高，诱 导局部动脉炎症，促进T2D M患者动脉粥样斑块的 形成[15]。此外，办可产生脂多糖，诱导机体免疫反 应，产生炎性细胞因子T N F- a、IL-6和hs - C R P。T N F-a具有多种生物学效应，与其他细胞因子形 成复杂免疫网络，参与炎症反应[16]。I L-6在适量 浓度对机体有利，而浓度过高时会产生一系列炎性 损害。h s-C R P是感染的敏感性指标之一，可损伤 内皮细胞功能，促进动脉粥样硬化进展[17]。本研究 显示，1201^伴冲感染患者血清中113-〇^；™?-
a和I L-6水平均显著高于未感染卟的T2D M患 者，与相关研究报道[18]结果一致，且h s-C R P是影 响T2D M感染埤的独立因素，说明坳加剧了T2D M患者机体内炎性反应。P e a r s o n相关性分析 显示，
T2D M伴///>感染患者血清中I n c R N A M E G3 表达水平与h s-C R P、T N F-c x和I L-6均呈负相 关，提示I n c R N A M E G3可能通过影响机体内炎症因 子的表达参与T2D M感染冲。
F F A又被称为非脂化脂肪酸，在正常机体血清 中含量很少。研究[19]显示,F F A 可通过抑制葡萄糖
跨膜转运、促进胰岛细胞凋亡等引起胰岛素抵抗，在
胰岛素抵抗疾病发病过程中起重要作用。此外，
F F A具有较强的细胞毒性，能够损伤细胞膜、线粒体
以及溶酶体等，引起机体内活性氧簇的增加，加剧机
体氧化应激反应[2°]。本研究显示，F F A在T2D M伴
埤感染患者血清中水平明显高于未感染邶的
T2D M患者，其I n c R N A M E G3表达与F F A水平呈负
相关，提示I n c R N A M E G3可能在F F A加剧T2D M
患者氧化应激中起调控作用。
氧化应激可损伤胰岛P细胞，引起胰岛素抵抗，促进T2D M及其并发症的发生、发展[2|]。M D A
是脂质过氧化产物之一，其水平高低可间接反映机
体的氧化应激状态[22]。S O D是机体内的重要抗氧
煤气化制氢化酶，可清除氧自由基，降低对机体组织细胞的损 伤，其活性高低反映机体的抗氧化能力[23]。G S H -
P x也是一种抗氧化酶，与S O D具有协同作用。本
研究显示，T2D M伴///>感染患者血清中M D A含量
升高,S O D和G S H -P x活力降低，与相关研究报
道[24]结果一致，说明冲感染可增强T2D M患者的
氧化应激反应，提示对于T2D M伴感染患者，应
采取干预措施抑制冲感染和氧化应激。本研究还
M示，T2D M伴//p感染患者血清I n c R N A M E G3水
平与M D A呈正相关，与S O D和G S H-P x呈负相 关，提示I n c R N A M E G3表达与T2D M伴卟感染患
者氧化应激密切相关，靶向促进I n c R N A M E G3表达
可能降低患者氧化应激水平。
综上所述，I n c R N A M E G3在T2D M伴///)感染
患者血清中表达降低，其可能通过调节机体内脂肪
酸水平、炎性因子表达及氧化应激水平参与T2D M
感染坳过程
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(收稿日期:2020-02-24编辑：陈兵）
