几种常用的染方法
1．美蓝染法在已干燥、固定好的抹片上，滴加适量的美蓝染液，经1—2min，水洗，沥去多余的水分，吸干或烘干，镜检。 2．革兰氏染法
（1）在已干燥、固定好的抹片上，滴加草酸铵结晶紫染液，经1—2min，水洗。
（2）加革兰氏碘溶液于抹片上媒染，作用1—3min，水洗。
（3）加95％酒精于抹片上脱，约30s---1min，水洗。
（4）加碱性复红液（或沙黄或稀释石炭酸复红液）复染10---30s，水洗。（5）吸干或烘干，镜检。革兰氏阳性菌呈蓝紫，革兰氏阴性菌呈红。3．抗酸性染法
（1）在已干燥、固定好的抹片上，滴加较多量的石炭酸复红染液，在玻片下以酒精灯火焰缓缓加热，至发生蒸汽即止，维持微微发生蒸汽，经3—5min，水洗。 （2）用3％盐酸酒精脱，直至标本无脱出为止，充分水洗。
（3）用美蓝染液复染约1min，水洗。
（4）吸干或烘干，镜检。抗酸性细菌呈红，非抗酸性细菌呈蓝。
以下方法也可：即在干燥、固定好的抹片上，滴加石炭酸复红染1min，水洗，用1％美蓝染液复染约20s，水洗。
对光观察，标本务必全呈蓝，在火焰上烘干、镜检。抗酸性细菌呈红，非抗酸性细菌和背景呈蓝。
4．瑞氏染法
（1）抹片自然干燥后，滴加瑞氏染液于其上，为了避免很快变干，染液可
稍多加些，或看情况补充滴加，经1—3min，加约与染液等量的中性蒸馏水或PBS 液，轻轻晃动玻片，使与染液混匀，约3min左右，直接用水冲洗（不可先将染液倾去），吸干或烘干、镜检。细菌染成蓝，组织、细胞等物呈其它颜。（2）另一方法抹片自然干燥后，按涂抹点大小，盖上一块略大的清洁滤纸片，在其上轻轻滴加染液，至略浸过滤纸，并看情况进行补滴，维持不使变干；染3--5min，直接用水冲洗，吸干或烘干、镜检。此法使染液经滤纸过滤，可大大避免沉渣粘附于抹片上影响镜检观察。
5．姬姆萨染法
（1）于5ml新煮过的中性蒸馏水中滴加5—10滴姬姆萨氏染液原液，即稀释成为常用的姬姆萨氏染液。
（2）抹片经甲醇固定干燥后，在其上滴加足量的染液或将抹片浸入盛有染液的染缸中，染30min，或者染数小时至24h，取出水洗，吸干或烘干、镜检。细菌呈蓝青，组织、细胞等呈其它颜。视野常呈淡红。
（1）染液配制
①美蓝溶液美蓝1g，95％酒精10ml，蒸馏水100ml。将美蓝溶于酒精内，再加蒸馏水混合。
②碱性复红溶液碱性复红0.03g，95％酒精1ml，蒸馏水99ml。将碱性复红溶于酒精内，再加蒸馏水混合。
（2）染法
①涂片经火焰固定后，滴加美蓝溶液，将玻片至火焰上面加热至发生蒸汽为止。
②水洗，以碱性复红溶液复染15—30s。
③水洗后、吸干、镜检。
7.结晶紫福尔马林荚膜染法
（1）染配制
①结晶紫福尔马林染液结晶紫10g，福尔马林溶液100ml。混合使其完全溶解，隔夜过滤。
②碱性复红溶液见前：克利特氏荚膜染法
（2）染法
①涂片用结晶紫福尔马林染液染0.5—1min。
②水洗后，以碱性复红染液复染15—30s。
③水洗、吸干、镜检。
④染后，菌体呈深蓝，荚膜呈淡红。
8.番红染液荚膜染法
（1）染液配制番红（或沙黄）0.7g，95％酒精20ml，蒸馏水15ml。
将番红溶解于酒精内，再加蒸馏水混合而成。
（2）染法
①涂片滴加番红染液，将玻片置火焰上加热至发生蒸气约5min。
②水洗、吸干、镜检。
③染后，菌体呈暗红，荚膜呈淡黄。
9.赫斯氏荚膜染法
（1）染液配制
①龙胆紫酒精溶液龙胆紫酒精饱和液5ml，蒸馏水95ml。
②硫酸铜水溶液硫酸铜20g，蒸馏水100ml。
（2）染法
①涂片加热固定，将龙胆紫酒精溶液滴加于玻片。将玻片置火焰上微加热至见蒸气并保持蒸气约20min。
②用硫酸铜液代替水冲洗染液，用吸水纸吸干、镜检。
③染后，菌体呈深紫，荚膜呈浅蓝。
10．安沙尼氏荚膜染法
（1）染液配制
①1％结晶紫水溶液。
②20％硫酸铜水溶液。
（2）染法
①将涂片在空气中自然干燥。
②以1％结晶紫水溶液染2min（不必加热），再以20％硫酸铜代水冲洗染液。
③吸干、镜检。
④染后，菌体呈紫，荚膜呈淡紫。
11．苗列尔氏芽孢染法
（1）染液配制
①媒染液 5％铬酸液（铬酸5ml，加蒸馏水95ml）
②染液石炭酸复红液
③脱液 2％硫酸液（纯硫酸2ml，加蒸馏水98ml）
④复染液碱性美蓝
（2）染法
涂片，干燥，火焰固定，用媒染液染10min，充分水洗，用炭酸酸复红液加温染（最好在标本上覆盖一张滤纸）2min，水洗，用脱剂脱10s，水洗，用美蓝液复染1min，水洗，干燥、镜检。
结果：芽孢呈红，菌体呈蓝。
12．孔雀绿沙黄芽孢染法
（1）染液 5％孔雀绿液，0.5％沙黄液。
（2）染法
涂片火焰固定，加5％孔雀绿液微微加温染30s—1min，至发生蒸气为止，待冷后水洗，再加沙黄液复染30s，水洗，干燥后镜检。
结果：芽孢呈绿，菌体其它部分呈淡红。
13．李富逊氏鞭毛染法
（1）染液配制 5％钾明矾水溶液10ml，20％鞣酸水溶液10ml，1％碱性复红酒杯精溶液10ml。
将上述三种溶液按次混合配成，如发生沉淀，用其上清液，本染液保存1周，复染液可用下列染液：美蓝0.1g，硼砂0.5g
，蒸馏水100ml。
（2）染法
①所用的载玻片必须十分清洁无油脂、无划痕。可将玻片先浸于重铬酸钾清洁液数天，用镊子取出后以清水冲洗干净（冲洗时切勿用手捏玻片），然后斜插于木架上，置37度温箱中任其干燥后备用。
②菌液最好用10—16h的幼年肉汤培养物。若取自琼脂培养基上的菌落，则用接种环挑取少许，置蒸馏水中制成轻度混浊的细菌悬液，切忌用接种环多作搅动，以免损伤鞭毛。
③挑取肉汤培养物或细菌悬液一环，轻置于玻片一滴，玻片作倾斜放置，使菌液沿玻片面顺向下流，自成一薄菌膜，置37度恒温箱内干燥。
④将上述染液滴加于涂片上，染10—15min，染时间的长短随室温的高低而不同，如在冬季，可置于37度温箱内染。
⑤轻轻地水洗1—2min。
⑥在室温或37度温箱内任其干燥后作镜检，细菌菌体及鞭毛呈红。
⑦如需复染，则用上述美蓝硼砂复染液在水洗后，染10min，用水冲洗，干燥后作镜检。菌体呈蓝，鞭毛呈红。
