一种决明子水提物在制备降尿酸药物中的应用

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1.本发明涉及生物技术领域，更具体地说，它涉及一种决明子水提物在制备降尿酸药物中的应用。

背景技术：

2.决明子是豆科植物决明以及小决明的成熟干燥种子，始载于《神农本草经》列为上品药，为我国药典收载的常用中药。其性味甘、苦、咸，微寒。归肝、大肠经。其主要成分为蒽醌类和萘并吡喃酮类化合物。对羞明多泪、目赤涩痛、眩晕、头痛、习惯性便秘、小便不利等病症均具有作用。现代药理研究证明决明子具有抗菌、保肝、降血压、降血脂等活性，同时又可作为保健饮品的原料。
3.代谢组学是系统生物学的一个小分支，其组学的理念与中医药的整体观不谋而合。因此，引入代谢组学技术对中药进行研究，有助于从整体上阐释中医药的作用机制。

技术实现要素：

4.本发明的目的是提供一种决明子水提物在制备降尿酸药物中的应用，该药常见药理活性表现为降脂、降压、保肝等。采用高分辨率的uplc-q-tof/ms进行物质定性和半定量分析，正常大鼠、决明子水提物给药后大鼠的尿液成分谱变化，首次发现降尿酸作用，为决明子的新临床应用提供参考。
5.本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：一种决明子水提物在制备降尿酸药物中的应用，包括如下步骤，s1：取决明子500g，加入8倍量水浸没药材，浸泡30min后，加热至煮沸，保持微沸60min，分离煎出液，药渣加入4倍量水依法再次煎煮30min，合并2次煎出液，放置于50℃水浴锅中缓慢蒸发，浓缩至500ml(按生药算，浓度相当于1g
·
ml-1)；
6.s2：样本的收集与制备；连续给药14天后，在最后一次给药后的24小时内对动物产生的尿液进行收集；将收集的尿液放入离心机中以转速3000rpm离心10min，用移液器将1ml上清液转移至1.5ml ep管中，离心后的样本于-80℃冰箱中保存待测；
7.s3：样品制备；取步骤s1中的样本600μl，常温解冻；加入600μl乙腈，涡旋混匀，静置2min，在4℃下离心20min，取上清液，经0.22μm微孔滤膜滤过后进样；
8.s4：质控样本(qc)制备；混合所有的尿液样本即得；
9.s5：谱检测；用高分辨率的uplc-q-tof/ms进行物质定性和半定量分析。
[0010][0011]
本发明进一步设置为：所述步骤s3中质控样本(qc)通过连续5针进样平衡系统，插入检测序列中。
[0012]
本发明进一步设置为：所述步骤s4中进行谱检测，谱柱柱温30℃，流速0.5ml
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min-1；进样量:5μl，质谱条件如下：
[0013][0014][0015]
溶剂系统及洗脱程序如下：
[0016][0017]
综上所述，本发明具有以下有益效果：决明子给药后尿酸水平下调，可减少高尿酸水平对肾脏的损伤，从而发挥糖尿病肾病的作用。
附图说明
[0018]
图1与图2是本发明实施例中潜在生物标志物尿酸的总离子流图；
[0019]
图3与图4是本发明实施例中潜在生物标志物尿酸的二级质谱图；
[0020]
图5是本发明实施例中潜在生物标志物尿酸的相对含量变化图。
具体实施方式
[0021]
以下结合附图1-3对本发明作进一步详细说明。
[0022]
实施例：一种决明子水提物在制备降尿酸药物中的应用，如图1、图2所示，包括，取决明子500g，加入8倍量水浸没药材，浸泡30min后，加热至煮沸，保持微沸60min，分离煎出液，药渣加入4倍量水依法再次煎煮30min，合并2次煎出液，放置于50℃水浴锅中缓慢蒸发，浓缩至500ml(按生药算，浓度相当于1g
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ml-1)。大鼠在最后一次给药后转移至代谢笼，在代谢笼底部用离心管收集大鼠在24小时内产生的尿液，在离心机中以转速3000rpm离心10min，用移液器将1ml上清液转移至1.5mlep管中，离心后的样品于-80℃冰箱中保存待测。
[0023]
取步骤s1中的样本600μl，常温解冻；加入600μl乙腈，涡旋混匀，静置2min，在4℃下离心20min，取上清液，经0.22μm微孔滤膜滤过后进样。混合所有的尿液样本得质控样本(qc)。qc样本除通过连续5针进样平衡系统，保证系统的适应性外，还应该插入检测序列中，用于监控分析过程的稳定性。
[0024]
谱条件:谱柱[waters acquityhss t3(1.8μm2.1
×
100mm)]，柱温30℃，流速0.5ml
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min-1；进样量:5μl；溶剂系统及洗脱程序如下：
[0025][0026]
质谱条件：
[0027][0028][0029]
本具体实施例仅仅是对本发明的解释，其并不是对本发明的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本发明的权利要求范围内都受到专利法的保护。

技术特征：

1.一种决明子水提物在制备降尿酸药物中的应用，其特征是，包括如下步骤：s1：取决明子500g，加入8倍量水浸没药材，浸泡30min后，加热至煮沸，保持微沸60min，分离煎出液，药渣加入4倍量水依法再次煎煮30min，合并2次煎出液，放置于50℃水浴锅中缓慢蒸发，浓缩至500ml(按生药算，浓度相当于1g
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ml-1)；s2：样本的收集与制备；连续给药14天后，在最后一次给药后的24小时内对动物产生的尿液进行收集；将收集的尿液放入离心机中以转速3000rpm离心10min，用移液器将1ml上清液转移至1.5ml ep管中，离心后的样本于-80℃冰箱中保存待测；s3：样品制备；取步骤s1中的样本600μl，常温解冻；加入600μl乙腈，涡旋混匀，静置2min，在4℃下离心20min，取上清液，经0.22μm微孔滤膜滤过后进样；s4：质控样本(qc)制备；混合所有的尿液样本即得；s5：谱检测；用高分辨率的uplc-q-tof/ms进行物质定性和半定量分析。2.根据权利要求1所述的一种决明子水提物在制备降尿酸药物中的应用，其特征是：所述步骤s3中质控样本(qc)通过连续5针进样平衡系统，插入检测序列中。3.根据权利要求1所述的一种决明子水提物在制备降尿酸药物中的应用，其特征是：所述步骤s4中进行谱检测，谱柱柱温30℃，流速0.5ml
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min-1；进样量:5μl，质谱条件如下：溶剂系统及洗脱程序如下：

技术总结

本发明公开了一种决明子水提物在制备降尿酸药物中的应用，涉及生物技术领域，其技术方案要点是：取决明子500g，加入8倍量水浸没药材，浸泡30min后，加热至煮沸，保持微沸60min，分离煎出液，药渣加入4倍量水依法再次煎煮30min，合并2次煎出液，放置于50℃水浴锅中缓慢蒸发，浓缩至500mL。最后一次给药后的24小时内对动物产生的尿液进行收集；将收集的尿液放入离心机中以转速3000rpm离心10min，用移液器将1mL上清液转移至1.5mLEP管中，离心后的样本于-80℃冰箱中保存待测；混合所有的尿液样本即得质控样本；进行物质定性和半定量分析。决明子水提物给药后，尿酸水平下调，决明子水提物可减少高尿酸水平对肾脏的损伤，从而发挥糖尿病肾病的作用。疗糖尿病肾病的作用。疗糖尿病肾病的作用。