推荐 胶原酶（collagenase）是从溶组织梭状细胞芽孢杆菌提取制备的，主要水解结缔组织中胶原蛋白成分。当拟消化的组织较硬，内含较多结缔组织或胶原成分时，用胰蛋白酶解离细胞的效果较差，这时可采用胶原酶解离细胞法。 胶原酶仅对细胞间质有消化作用而对上皮细胞影响不大。因此适于消化分离纤维性组织、上皮及癌组织，可使上皮细胞与胶原成分分离而不受损害。常用剂量为最终浓度200U/ml（约为1mg/mL）或0.03%~0.3%。胶原酶分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝细胞专用胶原酶，要根据所要分离消化的组织类型选择胶原酶类型。具体可见胶原酶的种类和选型。 胶原酶消化缓和、无须机械振荡，因而可进一步提高细胞成活率，但胶原酶价格较高，大量使用将增加实验成本。 胶原酶Vs胰蛋白酶 胰蛋白酶和胶原酶消化时间与浓度上的差异，依消化温度而异。另外这两种酶也可混合应用，浓度为：胰蛋白酶0.1mg+胶原酶0.25mg/mL。两酶相比的差别见表1和表2。 表1 胰蛋白酶和胶原酶生物活性的差别 项目 | 胰蛋白酶 | 胶原酶 | 消化特性 | 适用于消化软组织 | 适用于消化纤维多的组织 | 用量 | 0.01%~0.5% | 0.1~0.3 mg/mL（200 U/mL） | 消化时间 | 0.5 ~ 2h | 1 ~ 12h | pH | 8~9 | 6.5~7.0 | 作用强度 | 强烈 | 缓和 | 细胞影响 | 时间过长有影响 | 无大影响 | 血清抑活siro-1967 | 有 | 无 | Ca2+和Mg2+ | 有影响 | 无影响 | | | |
表2 胰蛋白酶和胶原酶在不同温度下消化各种组织小块（0.5~1cm3）时所需时间（h） 酶种类和用量 | 较硬组织 | 软组织 | 4℃ | 室温 | 37℃ | 4℃ | 室温 | 37℃ | 胰蛋白酶（0.25%） | 24~48 | 1~6 | 1~2 | 12~24 | 1~2 | 0.5~1 | 胶原酶（1200 U/mL） | 24 | 6 | 0.5 | 12 | 3 | 0.25 | 胰蛋白酶（0.25%）+胶原酶（200 U/mL） | 12~46地能空调 | 12~24 | 4~12 | 12~24 | 6~12 | 1~2 | | | | | | | |
胶原酶的配置 胶原酶溶液同胰蛋白酶一样配制、消毒灭菌和储藏。关于胰蛋白酶配置方法可见：胰蛋白酶消化法。 注意： 因为Ⅰ型胶原酶分子颗粒比胰酶大，不容易过滤，因此可以用蔡式滤器过滤除菌。 钙、镁离子和血清成分不会影响胶原酶的消化作用，因而可用BSS（如D-hanks或者PBS）或含血清的培养液配制。 胶原酶的使用 1.将漂洗、修剪干净的组织剪成1~2mm3左右小块 2.将组织块放入离心管（三角烧瓶）中加入30~50倍体积的胶原酶溶液，旋紧盖子（密封烧瓶）。 3.将烧瓶放入37℃水浴或者37℃孵箱内，每隔3min振摇一次，如能放在37℃的恒温震荡水浴箱中则更好。消化时间与组织的类别很有关系，对于某些肿瘤组织或其他较致密结缔组织，消化时间4~48h，对于容易消化的组织可以采用37℃震荡消化15~45min，也可以根据具体情况而定。如组织块已分散而失去块的形状，一经摇动即成细胞团或单个细胞，可以认为已消化充分。上皮组织经胶原酶消化后，由于上皮细胞对此酶有耐受性，可能仍有一些细胞团未完全分散，但成团的上皮细胞比分散的单个上皮细胞更易生长，因此，如无特殊需要可以不必再进一步处理。 4.收集消化液（有时含个别组织块及没有充分消化的组织碎屑则需用100目不锈钢网过滤），离心1000r/min，5min，去除上清，用Hanks液或者无血清培养液离心漂洗1~2次，去除上清，加培养液制成细胞悬液，接种培养瓶。 德国Serva胶原NB用于组织解离-实验动物不同细胞上的使用量和方法 不超过1%， 2-3倍体积 4度过夜消化 细胞类型 | 组织 | 物种 | Collagenase NB | 浓度 | 实验条件 | 心肌细胞 | 心脏 | 大鼠 | NB8 | 0.5PZ-U/ml | 30分+X | 加入Hyaluronidase具有实验方法 | 上皮细胞 | 乳腺 | 小鼠 | NB4或NB5 | 0.34PZ-U/ml | 室温15-25分钟 | | 成纤维细胞 | 皮肤 | 小鼠 | NB4G | 0.48PZ-U/ml | 37℃，12-20小时 | | ganglion | 背根 | 新生大鼠 | NB4或NB5 | 0.19PZ-U/ml | 25℃，25分钟电热烧烤炉 | | 肝细胞 | 肝脏 | 小鼠 | NB4G | 0.12PZ-U/ml | 37℃ | 灌注 | 0.07-0.1PZ-U/ml | 37℃ | 灌注 | 胰岛 | 胰腺 | 大鼠 | NB4或NB5 | 0.3PZ-U/ml | | | NB1+NP | 每只大鼠20PZ-U(NB1)+0.4 DMC-U(NP) | 37℃，10-15分钟 | HBSS | 神经元 | 海马 | 大鼠 | NB4或NB5 | 0.28PZ-U/ml | 25℃，25分钟 | | 关节软骨细胞 | 软骨 | 牛 | NB4或NB5 | 0.3PZ-U/ml | 37℃，15-45分钟 | | 软骨细胞 | 半月板 | 牛 | NB8+NP | 1.2PZ-U/ml+1DMC-U/ml | 37℃，2小时 | 总体积20ml | 肝细胞 | 肝脏 | 猪或狗 | NB8 | 135PZ-U/分离（大约150mg） | | | 胰岛 | 胰腺 | 猪 | NB1+NP或NB1 GMP+NP GMP | 每克组织15-18PZ-U(NB1)+0.4-1.0DMC-U(NP) | | UW solution | NB8+NP | 每克组织4.4PZ-U(NB8)+0.7DMC-U(NP) | 37℃，20-25分钟 | | | | | | | | |
几种胶原酶的区别2009-07-27 10:20胶原酶Ⅰ
产品编号 规 格 价 格
C8140-100 100mg 440.00
说明：胶原酶Ⅰ用于上皮、肺，脂肪和肾上腺组织细胞的分离。
别名：led间隔柱Clostridiopeptidase A
CAS＃： 9001-12-1
外观：棕或棕褐结晶性粉末
R： 36/37/38-42 S： 22-24-26-36/37
储存条件：-20℃
From Sigma C0130
胶原酶Ⅱ
产品编号 规 格 价 格
碳纤维加热板C8150-100 100mg 440.00
说明：胶原酶Ⅱ适用于肝脏，骨，甲状腺，心脏和唾液腺组织细胞的分离。
别名：Clostridiopeptidase A
CAS＃：9001-12-1
外观：棕或棕褐结晶性粉末
R： 36/37/38-42 S： 22-24-26-36/37
储存条件：-20℃
From Sigma C6885
胶原酶Ⅲ
产品编号 规 格 价 格
C8490-1500 1500u(原装) 3650.00
说明：用于消化组织中连接部分使其成为单个细胞，用于哺乳动物组织细胞解离。
别名：Clostridiopeptidase A
CAS＃：9001-12-1
外观：冻干粉
胶原消化活力：400u/mg固体
来源：Clostridium histolyticum
R：36/37/38-42 S：22-24-26-36/37
储存条件：？20℃
From Sigma C0255
Collagenase Ⅳ
胶原酶Ⅳ
产品编号 规 格 价 格
C8160-100 100mg 440.00
说明：胶原酶Ⅳ包含至少7中蛋白酶成分，分子量从68-130KD沙袋填充物不等。它能消化多种组织。
别名：Clostridiopeptidase A
CAS＃：9001-12-1
外观：棕或棕褐结晶性粉末
R： 36/37/38-42 S： 22-24-26-36/37
储存条件：-20℃
From Sigma C5138
Collagenase Ⅴ
胶原酶Ⅴ
产品编号 规 格 价 格
C8170-100 100mg 780.00
说明：胶原酶Ⅴ包含至少7中蛋白酶成分，分子量从68-130KD不等。它可用于胰腺小岛组织的分离，将结缔组织分离成单个细胞。
别名：Clostridiopeptidase A
CAS＃：9001-12-1
外 观：棕或棕褐结晶性粉末
溶解性：可溶于TES缓冲液，Hank's平衡盐和Earles平衡盐等溶液。
溶液在-20℃可稳定保存数月。
R：36/37/38-42 S：22-24-26-36/37
储存条件：-20
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