SHOCK, Vol. 32, No. 2, pp. 201-209, 2009 第一个以复方中药制剂作为研究药物在SHOCK杂志发表的文章
单仪入射狭缝抗氧化剂养血清脑颗粒对缺血再灌注损伤引起的大脑微循环障碍的改善作用 徐想顺1），马治中2），王芳1），胡白和1），王传社1）2），刘育英1），赵新荣1），安利华1），常昕1，廖福龙1），樊景禹1），新见英幸1），韩晶岩1
1）北京大学医学部天士力微循环研究中心
2）北京大学医学部基础医学院中西医结合教研室
3）北京大学医学部基础医学院解剖学教研室
4）北京大学医学部基础医学院神经科学研究所
摘要：养血清脑颗粒（CG）是头痛，眩晕和脑血管疾病的中药复方制剂。为了阐明CG的临床疗效，本实验研究CG对缺血再灌注造成的大脑微血管结构和功能损伤的改善作用。138只沙鼠被分为四组，根据研究的不同指标，每组包含36只或者30只沙鼠。为了观测不同组沙鼠（正常组，缺血再灌注组以及缺血再灌注加给药组）的大脑微循环，我们将麻醉后沙鼠的前囟点前开一颅窗。用高速摄影机测定 连续观察并记录细静脉红细胞流速，用共聚焦显微镜系观察和记录大脑皮层FITC标记白蛋白细静脉渗出动态、细静脉管径和细静脉壁粘附白细胞数，测定细静脉管壁DHR荧光强度以及丙二醛的生成量，用扫描电镜和透射电镜观察皮层微血管超微结构的变化，用激光多普勒观察脑表面血流量。实验结果表明：CG前给药在0.4g/kg和0.8g/kg剂量下可以显著的减轻缺血再灌注引发的沙鼠大脑微血管的损伤，CG0.4g/kg+缺血再灌注组、CG0.8g/kg+缺血再灌注组和单纯缺血再灌注组白细胞粘附数分别为2.43 ± 0.24、2.28 ± 0.18和6.00 ± 0.35, 白蛋白渗出数分别为2.51 ± 0.40、2.33 ± 0.29和4.77 ± 0.24, DHR荧光强度分别为7.06 ± 0.81、5.93 ± 0.42和28.38 ± 2.70, 丙二醛表达量分别为16.35 ± 0.52、14.34 ± 0.68和21.46 ± 0.71, 大脑皮层血流量分别为0.43 ± 0.07、0.46 ± 0.02和0.17 ±0.08。CG同样可以改善缺血再灌注引起的沙鼠大脑皮层血管超微结构的改变，抑制毛细血管开放数的减少、改善内皮的结构，包括内皮表面的粗糙、胞内颗粒的增加、血管内皮细胞连接处出现指状突起肥大以及血管周围的水肿。以上结果表明养血清脑颗粒前给药可以改善沙鼠全脑缺血再灌注引起的大脑微血管结构和功能的异常，该作用可能与CG的抗氧化活性相关。
关键词：缺血再灌注，微血管渗透性，白细胞粘附，氧化应激，微循环
前言：
脑微血管缺血再灌注损伤是中风、高血压、动脉粥样硬化以及外伤中首要的致死和致残原因。针对脑rtre
流氓猫
血管的药物可以对上述疾病起到一定预防和的作用。然而，缺血再灌注引发的微循环障碍过程中复杂的病理生理过程对药物的有效提出了新的挑战。众所周知，缺血再灌注会诱导一系列的损伤反应，其特点为氧化应激以及炎症反应（1，2）。在微循环中，主要的病理生理过程包括白细胞和血管内皮细胞的活化，活性氧簇的产生以及细胞因子的释放。这些炎性介质与血细胞以及血管内皮细胞相互作用，最终导致血流不复灌以及血浆的渗出。由于多种因素和生物学通路参与了损伤反应，因此，单纯的其中的一个环节不足以整个微循环系统的损伤。实验研究表明，单纯的抗氧化剂（3，4）、单纯的抗血小板聚集药物（5，6）以及单纯的抗粘附分子的药物（7，8）均不足以综合地改善微循环障碍，临床效果不佳。
养血清脑颗粒（CG）是一种新型的中药复方制剂，1996年被中国国家食品与药品监督管理局（SFDA）作为头痛，眩晕和脑血管疾病的中药复方制剂，批准在中国临床应用。CG包含十一种中药成分（见下页，表1）。已往的体外研究已经证明该中药复方制剂中至少六种化学成分有抗氧化的作用，包括白芍中的芍药苷（9），川芎中的川芎嗪（10），当归中的阿魏酸（11），地黄中的地黄苷（12），鸡血藤中的染料木黄酮（13）以及决明子中的alaternin（14）。同时，川芎嗪体外有抑制白细胞和血管内皮黏附因子表达的作用（15，16）。川芎嗪、芍药甙、阿魏酸还可以减轻缺血再灌注引起的脑梗塞的面积以及组织损伤（15- 19）。但是，有关养血清脑颗粒对缺血再灌注引起的脑微循环障碍的改善作用以及神经保护作用未见报告。
脑根
本研究的目的旨在探讨CG对蒙古沙鼠双侧颈动脉结扎再通造成的全脑缺血再灌注损伤中微循环障碍的改善作用。实验结果表明：CG前给药可以改善沙鼠全脑缺血再灌注引起的大脑微血管结构和功能的异
常，该作用可能与CG的抗氧化活性相关。
现浇梁
材料与方法
动物
蒙古沙土鼠，雄性，体重65～90g，购于首都医科大学实验动物部，合格证号：SCXK（京）2002-0001。在北京大学医学部动物中心，按北京大学医学部实验动物处理规定，单笼饲养，温度22 ± 2 ℃，相对湿度40 ± 5%，12小时切换灯源（早晨7点开灯），自由进食饮水，动物于实验前12小时禁食。
养血清脑颗粒
码垛养血清脑颗粒由天津天士力制药股份有限公司生产，批号：Z10960082。生产过程根据严格的现代生产工艺，药物成分标准化，不含类固醇。实验前配制成80mg/ml和160mg/ml的水溶液。
化学试剂
Dihydrorhodamine 123（DHR）和异硫氰酸荧光素标记白蛋白（FITC-albumin）购买于美国Sigma公司，罗丹明6G购买于美国Fluka公司，乌来糖（Urethane）购买于中国上海天莲精细化工有限公司，丙二醛检测试剂盒以及蛋白定量试剂盒购买于南京建成生物科技有限公司。
缺血再灌注损伤和给药
取20%乌拉坦，按2.0g/kg体重的用量，经腹腔注射麻醉蒙古沙土鼠。在颈部正中切开，分离气管，连接小动物呼吸机（ALC-V8），在整个观察过程保持机
