器材:试管及试管架、移液器或吸量管、恒温水浴锅、721型分光光度计、温度计、动物血清
试剂:
（1）0.1mol/L pH7.4磷酸盐缓冲液：
①0.1mol/L磷酸氢二钠溶液：称取Na2HPO414.22g或Na2HPO4·2H2O17.8g溶
解于蒸馏水中，并稀释至1 000ml,4℃保存。
②0.1mol/L磷酸二氢钾溶液：称KH2PO413.61g溶解dH2O中，稀释至1000ml,
4℃保存。
③将0.1mol/L磷酸氢二钠溶液420ml和0.1mol/L磷酸二氢钾溶液80ml混和即
为0.1mol/L pH7.4的磷酸盐缓冲液。加氯仿数滴，4℃保存。
（2）标准丙酮酸（含丙酮酸2.0μmol/mL） ：
取标准丙酮酸钠10mg，用上述缓冲液准确定容为50mL。此液须当日用当日配。
（3）SGPT底物液(含α-酮戊二酸2汽车尾气抽排系统μmol/ml及DL-丙氨酸200μmol/ml) :
取α-酮戊二酸29.2mg，DL-丙氨酸7g ,用试剂1溶成100ml，在稀释到刻度前，以1mol /L NaOH调pH 7.4（因为转氨酶在pH7.3以下或7.6以上的环境中酶活性下降），加数滴氯仿防腐。此液于冰箱保存可使用4天。
（4）GOT底物液(DL–天冬氨酸200mmol/L ,α-酮戊二酸 2mmol/L):称取α- 酮戊二酸29.2mg和DL-门冬氨酸2.66g置于一小烧杯中,加入1mol/L氢氧化钠20.5ml使溶解,并校正pH至7.4,然后将溶液移入100ml容量瓶内,用0.1mol/L磷酸盐缓冲液定容至刻度。放置冰箱内保存。
（5）2.4-二硝基苯肼溶液:
取分析纯2,4-二硝基苯肼19.8mg，用1mol/L HCl溶于100ml，置棕瓶中保存。
（6）0.4mol/L NaOH溶液:
称取16g固体NaOH，用蒸馏水溶解，冷却至室温，定容至1000mL，备用。
操作步骤：
1、 标准曲线绘制：取试管18支按下表操作。
试 管 号 | 对 照 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
丙酮酸标准液（1毫升2微克分子） | 0 | 0.05 | 0.10 | 0.15 | 0.20 | 0.25 |
SGPT或SGOT底物 | 0.50 | 0.45 | 0.40 | 0.35 | 0.30 | 0.25 |
0.1M磷酸盐缓冲液PH7.4 | 0.1 | 0.1超导失超 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 |
相当于谷丙转氨酶单位 | 0 | 28 | 57 | 97 | 150 | 200 |
相当于谷草转氨酶单位 | 0 | 24 | 61 | 114 | 190 | — |
| | | | | | |
每个样做3个平行，置37水浴30分钟，各管加2，4-二硝基苯肼液0.5mL，混匀，再在37℃水浴中放置20mL，各管加0.4mol/L氢氧化钠溶液5mL，混匀，10分钟后，从水浴箱中取出，以蒸馏水调“零”点，用520nm波长比，读取各管之吸光值，各管之吸光值均减去空白的吸光值，然后以吸光值为纵坐标，各管相应的转氨酶单位为横坐标。绘制成标准曲线。为了方便，可列出各光度相当于转氨酶单位表。
试剂 固液分离装置 | 样品测定（每个样3个平行） | 对 照（每个样3个平行） |
血 清（mL） | 0.1 | 0.1 |
SGPT或SGOT底物（mL） | 0.5 | — |
置37℃水浴30分钟（SGOT为37℃，60分钟后再加枸橼酸苯胺1滴） | 方便盒
2.4-二硝基苯肼（mL） | 0.5 | 0.5 |
置37℃水浴20分钟 |
SGPT或SGOT底物（mL） | — | 0.5 |
NaOH溶液（mL） | 5.0 | 5.0 |
| | |
对照及样品各做3个平行，充分摇匀，静置10分钟后，用520nm波长比，以蒸馏水调节零点，读取吸光值，用样品减去对照吸光值，求得样品的谷丙转氨酶活力。
● 谷丙转氨酶活性单位：
37℃， pH7.4，每小时每毫升血清催化生成1μmol 丙酮酸为1个单位。例：0.1ml血清每小时催化生成0.1μmol丙酮酸, 即相当于GPT 100U / 100ml 血清。
● 注意：
1. 在测定SGPT时，应事先将底物、血清在37℃水浴中
保温，然后在血清管中加入底物，准确记时。
2. 标准曲线上数值在20~500U是准确可靠的，超过
500U时，需将样品稀释。
3. 转氨酶只能作用于α－L－氨基酸，对D－氨基酸无
作用。实验室多用α－DL－氨基酸（较L－氨基酸
价廉），若用L－氨基酸，则用量减半。
4. 溶血标本不宜使用，因血细胞中转氨酶活力较高，
会影响测定效果。
5. 血清样品的测定需在显后30分钟内完成。
6.丙酮酸标准液的浓度要求十分精确。由于丙酮酸开封后易
变质为多聚丙酮酸，而影响丙酮酸标准液的有效浓度而不
易察觉。建议使用质量可靠的市售丙酮酸标准液。
7.每批试剂的空白管吸光度上下波动不应超过0.015A，若有
超出，应仔细检查试剂与仪器方面的问题。
8.严重脂血、黄疸、溶血和糖尿病酮症酸中毒病人血清标本
可增加测定的吸光度，测定这类标本应做血清标本对照管
优点：尽管基质液中余下的a-酮戊二酸同样可生成红棕苯腙硝醌化合物而影响测定结果,但因其量不多,加之对505nm的吸光度远不如丙酮酸生成的苯腙硝醌化合物强,尤其用标准曲线作测定时,所用的酶活性单位通过卡门氏分光光度速率法矫正,摈弃了赖氏法一些固有弊端,结果比其他比法准确.故卫生部临检中心建议国内无条件使用连续监测法的单位使用赖氏法.1981年全国常规生化检验方法学术讨论会认为赖氏法测定ALT活性较为合理, 缺点：由于赖氏法设计的底物浓度,如a-酮戊二酸不足新型橱柜门板,反应速度只能达到最大速度的65%;显剂2,4-二硝基苯肼的用量只及反应液中酮酸浓度的一半;保温30min的酶促反应后,新生成的丙酮酸和未用完的a-酮戊二酸存在着无法人为控制的竞争显的几率问题,如此等等,使赖氏法
的重现性较差,在测量精度上仍与连续监测法相差甚大.
* 1个卡门氏单位的定义是：在温度25℃，打点计时器pH7.4，波长340nm，光径1cm
的条件下，1ml血清使NADH的吸光度下降0.001的转氨酶活性。
* 国际单位：在最适温度（25℃）下，1分钟产生1μmol丙酮酸的酶量为1
