包含骨桥蛋白的组合物及其提高胃肠道中益生菌存活的应用的制作方法

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1.本发明涉及益生菌技术领域，尤其涉及一种用于提高胃肠道中益生菌存活率的包含骨桥蛋白的组合物及其应用。

背景技术：

2.骨桥蛋白(opn)是一种高度磷酸化和糖基化的酸性活性蛋白，包含rgd(arg-gly-asp；整合素)细胞附着序列，存在于很多组织(骨骼、肾脏、表皮粘膜组织)和体液(血、尿、乳汁)中。opn在母乳中浓度较高，在初乳中含有170-220mg/l，在过渡乳中含有120-140mg/l，在成熟乳和晚乳中含量约为60-80mg/l，且被高度地翻译和修饰。乳汁中的opn也称为lpn(乳桥蛋白，lactopontin)。
3.opn存在于母乳、脐带血和婴儿血浆中，这揭示了其与新生儿的发育有关。人乳opn包含有298个氨基酸，牛乳opn包含262个氨基酸，其中人乳opn和牛乳opn有182个氨基酸相同，另外44个残基结构具有高度相似性，约90％氨基酸序列高度相似。人乳opn磷酸化程度仅略高于牛乳(磷酸化位点分别为36、28)，其中约25个磷酸化位点和3个o-糖基化位点相同，且有相同rgd序列以及水解位点等。临床研究表明，食用强化牛乳opn的配方粉，婴儿耐受性良好，生长发育状态佳；相较于一般配方粉，强化opn的配方粉喂养能降低婴儿发热的发生，减少婴儿促炎免疫反应(细胞因子)的发生。
4.另外，opn可以刺激肠上皮细胞增殖，支持肠道发育和肠道健康，研究发现喂养强化牛乳opn配方粉可以降低新生小猪坏死性小肠结肠炎的严重性。也有研究发现在小鼠实验中，牛乳opn可以促进小肠黏膜生长，改善十二指肠绒毛厚度和隐窝深度，增加小肠黏膜表面积，提高小肠养分吸收效率。同时牛乳opn可以通过整合素信号通路调控小肠基因表达，并通过调节细胞迁移和细胞趋化作用影响早期肠道细胞增殖和成熟。
5.除此之外，opn还被发现可以促进髓鞘相关的蛋白合成以及促进髓鞘的形成，从而促进认知发展，实验发现食用富含牛乳opn奶的小鼠在认知测试中表现出更好的记忆力和学习能力。
6.因此，乳汁中opn具有改善婴幼儿免疫、促进肠道健康及促进认知发展等诸多作用。
7.益生菌(probiotics)是活的微生物，当摄入充足的数量时，对宿主产生健康益处。益生菌须能够在恶劣的环境中如低ph的胃酸环境，含有溶菌酶、胆盐的消化道环境中存活并能定植到宿主肠道里，从而去发挥它的作用。在胃肠道里，乳酸菌被认为是肠道环境的重要调节者，其对肠道菌的生态平衡起到非常重要的作用。乳杆菌和双歧杆菌是主要的乳酸菌，是母乳及婴幼儿肠道中重要的有益菌；双歧杆菌在母乳喂养儿肠道中占优势地位，且婴儿双歧杆菌和两歧双歧杆菌普遍分布于婴儿肠道中，是亲和人体的双歧杆菌。肠道内双歧杆菌的增加，可以增加肠道内短链脂肪酸的含量，降低ph值，减少有害物质，改善肠道内的微生态环境，防止有害病原菌在肠道内生长繁殖，从而达到有益健康的作用。据报道，给婴幼儿喂食含有益生菌的食物后，肠道中双歧杆菌的数量增多，致病菌和条件致病菌的数
m63)。
20.更进一步地，所述益生菌选自以下一种或多种：瑞士乳杆菌(lactobacillus helveticus r0052)、两歧双歧杆菌(bifidobacterium bifidum r0071)、动物双歧杆菌乳亚种(bifidobacterium animalis subsp.lactis bb-12)、长双歧杆菌婴儿亚种(bifidobacterium longum subsp.infantis m63)、长双歧杆菌婴儿亚种(bifidobacterium longum subsp.infantis r0033)、动物双歧杆菌乳亚种(bifidobacterium animalis subsp.lactis hn019)或短双歧杆菌(bifidobacterium breve m-16v)。
21.进一步地，所述组合物包括但不限于配方奶粉、调制乳粉、蛋白粉和营养补充剂中的一种或多种。上述产品的原料可以同时包含骨桥蛋白和益生菌；或者，上述产品的原料包含骨桥蛋白但不包括益生菌，当需要服用益生菌制剂时，可以同时服用上述含骨桥蛋白的产品。当骨桥蛋白和益生菌形成组合后，此组合物经过胃肠道的消化，依然能够使得益生菌保持较高的存活率。骨桥蛋白的存在能够避免/降低益生菌在胃肠环境中受到损伤，从而提高益生菌在胃肠中的存活率，以及减轻胃肠道中乳铁蛋白对益生菌存活的抑制作用。
22.进一步地，所述组合物的形态包括但不限于溶液形式、悬浮物形式、乳浊液形式或固态形式，产品的形态不作具体限制，具体的形态根据产品的类型进行设定。
23.进一步地，所述组合物为溶液形式，所述骨桥蛋白在所述组合物中的浓度为47.6mg/l-4762.0mg/l；例如可以为47.6mg/l、476.2mg/l或4762.0mg/l。发明人通过试验研究发现，骨桥蛋白的浓度在上述范围内时，骨桥蛋白能促进胃肠道中益生菌的存活，提高益生菌在胃肠中的存活率，以及减轻胃肠道中乳铁蛋白对益生菌存活的抑制作用。
24.进一步地，所述组合物为益生菌保护剂，所述益生菌保护剂的制备原料包括骨桥蛋白。骨桥蛋白作为益生菌保护剂原料中的一种，可以减少胃肠环境对益生菌的伤害，提高益生菌经胃肠消化后的存活率。
25.进一步地，所述组合物为包埋型益生菌，所述包埋型益生菌包括呈核壳结构的保护壳体和内容物，所述保护壳体的制备原料包括骨桥蛋白，所述内容物包含乳杆菌和/或双歧杆菌。
26.进一步地，所述骨桥蛋白来源于牛、马、羊和人中的一种或组合。
27.进一步地，所述组合物用于提高婴幼儿胃肠道中益生菌的存活率，以更好地维护婴幼儿胃肠道健康。
28.进一步地，所述组合物用于提高胃肠道中益生菌的存活率，包括提高益生菌在胃肠中的耐胃酸能力和耐胃蛋白酶能力，以及提高益生菌的耐胰蛋白酶能力和耐胆碱盐类物质能力。
29.本发明的目的之二采用如下技术方案实现：
30.本发明提供了上述目的之一所述的组合物在制备用于提高胃肠道中益生菌存活率的产品中的用途。
31.进一步地，所述产品选自以下一种或多种：配方奶粉、调制乳粉、蛋白粉、营养补充剂、益生菌保护剂或包埋型益生菌。
32.本发明的目的之三采用如下技术方案实现：
33.本发明提供了骨桥蛋白在制备提高胃肠道中益生菌存活率的产品中的应用。
34.作为本发明所述应用进一步地实施方式，所述骨桥蛋白在胃肠道中提高益生菌的耐胃酸能力和耐胃蛋白酶能力，以及提高益生菌的耐胰蛋白酶能力和耐胆碱盐类物质能力。
35.作为本发明所述应用进一步地实施方式，所述益生菌包括乳杆菌和/或双歧杆菌，更加优选地为瑞士乳杆菌、两歧双歧杆菌、动物双歧杆菌或婴儿双歧杆菌。
36.进一步地，所述益生菌选自以下一种或多种：动物双歧杆菌乳亚种(bifidobacterium animalis subsp.lactis bb-12)、长双歧杆菌婴儿亚种(bifidobacterium longum subsp.infantis r0033)、两歧双歧杆菌(bifidobacterium bifidum r0071)、动物双歧杆菌乳亚种(bifidobacterium animalis subsp.lactis hn019)、动物双歧杆菌乳亚种(bifidobacterium animalis subsp.lactis bi-07)、短双歧杆菌(bifidobacterium breve m-16v)，瑞士乳杆菌(lactobacillus helveticus r0052)、鼠李糖乳酪杆菌(lactobacillus rhamnosus lgg)、鼠李糖乳酪杆菌(lactobacillus rhamnosus hn001)或长双歧杆菌婴儿亚种(bifidobacterium longum subsp.infantis m63)。
37.更进一步地，所述益生菌选自以下一种或多种：瑞士乳杆菌(lactobacillus helveticus r0052)、两歧双歧杆菌(bifidobacterium bifidum r0071)、动物双歧杆菌乳亚种(bifidobacterium animalis subsp.lactis bb-12)、长双歧杆菌婴儿亚种(bifidobacterium longum subsp.infantis m63)、长双歧杆菌婴儿亚种(bifidobacterium longum subsp.infantis r0033)、动物双歧杆菌乳亚种(bifidobacterium animalis subsp.lactis hn019)或短双歧杆菌(bifidobacterium breve m-16v)。
38.作为本发明所述应用进一步的实施方式，所述产品包括配方奶粉、调制乳粉、蛋白粉、营养补充剂、益生菌保护剂和包埋型益生菌等。
39.当所述产品为配方奶粉、调制乳粉、蛋白粉、营养补充剂时，骨桥蛋白可以与益生菌直接混合，形成混合物。优选地，骨桥蛋白和益生菌的重量比为1：0.01-1，例如骨桥蛋白和益生菌的重量比为1：0.01，或者，骨桥蛋白和益生菌的重量比为1：0.1，又或者，骨桥蛋白和益生菌的重量比为1：1。
40.当所述产品为益生菌保护剂时，可以将骨桥蛋白作为益生菌保护剂原料中的一种，再配合其余原料采取合适的方法制备而成，所获得的益生菌保护剂可以保护益生菌在胃肠中的活性，避免/降低益生菌在胃肠环境中受到伤害，从而提高益生菌在胃肠中的存活率，以及减轻胃肠道中乳铁蛋白对益生菌存活的抑制作用。
41.当所述产品为包埋型益生菌时，可以将骨桥蛋白作为包埋型益生菌的保护壳体原料中的一种，包埋型益生菌的内容物可以包括乳杆菌和双歧杆菌。骨桥蛋白形成的保护壳体能够有效保护内置的益生菌，避免/降低益生菌在胃肠环境中受到伤害，从而提高益生菌在胃肠中的存活率，以及减轻胃肠道中乳铁蛋白对益生菌存活的抑制作用。
42.本发明的目的之四采用如下技术方案实现：
43.本发明提供了骨桥蛋白在制备减轻胃肠道中乳铁蛋白对益生菌存活的抑制作用的产品中的应用。
44.发明人在研究中发现，在模拟消化模型中，乳铁蛋白会降低益生菌的存活率，而加
入骨桥蛋白后，可以减轻乳铁蛋白对益生菌存活率的降低作用，可以提高模拟消化模型中益生菌的存活率，提高益生菌的耐胃酸能力、耐胃蛋白酶能力、耐胰蛋白酶能力和耐胆碱盐类物质能力。
45.作为本发明所述应用进一步地实施方式，所述益生菌包括乳杆菌和/或双歧杆菌，更加优选地为瑞士乳杆菌、两歧双歧杆菌、动物双歧杆菌或婴儿双歧杆菌。
46.进一步地，所述益生菌选自以下一种或多种：动物双歧杆菌乳亚种(bifidobacterium animalis subsp.lactis bb-12)、长双歧杆菌婴儿亚种(bifidobacterium longum subsp.infantis r0033)、两歧双歧杆菌(bifidobacterium bifidum r0071)、动物双歧杆菌乳亚种(bifidobacterium animalis subsp.lactis hn019)、动物双歧杆菌乳亚种(bifidobacterium animalis subsp.lactis bi-07)、短双歧杆菌(bifidobacterium breve m-16v)，瑞士乳杆菌(lactobacillus helveticus r0052)、鼠李糖乳酪杆菌(lactobacillus rhamnosus lgg)、鼠李糖乳酪杆菌(lactobacillus rhamnosus hn001)或长双歧杆菌婴儿亚种(bifidobacterium longum subsp.infantis m63)。
47.更进一步地，所述益生菌选自以下一种或多种：瑞士乳杆菌(lactobacillus helveticus r0052)、两歧双歧杆菌(bifidobacterium bifidum r0071)、动物双歧杆菌乳亚种(bifidobacterium animalis subsp.lactis bb-12)、长双歧杆菌婴儿亚种(bifidobacterium longum subsp.infantis m63)、长双歧杆菌婴儿亚种(bifidobacterium longum subsp.infantis r0033)、动物双歧杆菌乳亚种(bifidobacterium animalis subsp.lactis hn019)或短双歧杆菌(bifidobacterium breve m-16v)。
48.作为本发明所述应用进一步的实施方式，所述产品包括配方奶粉、调制乳粉、蛋白粉、营养补充剂、益生菌保护剂和包埋型益生菌等。
49.当所述产品为配方奶粉、调制乳粉、蛋白粉、营养补充剂时，骨桥蛋白可以与益生菌直接混合，形成混合物。优选地，骨桥蛋白和益生菌的重量比为1：0.01-1，例如骨桥蛋白和益生菌的重量比为1：0.01，或者，骨桥蛋白和益生菌的重量比为1：0.1，又或者，骨桥蛋白和益生菌的重量比为1：1。
50.当所述产品为益生菌保护剂时，可以将骨桥蛋白作为益生菌保护剂原料中的一种，再配合其余原料采取合适的方法制备而成，所获得的益生菌保护剂可以保护益生菌在胃肠中的活性，避免/降低益生菌在胃肠环境中受到伤害，从而提高益生菌在胃肠中的存活率，以及减轻胃肠道中乳铁蛋白对益生菌存活的抑制作用。
51.当所述产品为包埋型益生菌时，可以将骨桥蛋白作为包埋型益生菌的保护壳体原料中的一种，包埋型益生菌的内容物可以包括乳杆菌和双歧杆菌。骨桥蛋白形成的保护壳体能够有效保护内置的益生菌，避免/降低益生菌在胃肠环境中受到伤害，从而提高益生菌在胃肠中的存活率，以及减轻胃肠道中乳铁蛋白对益生菌存活的抑制作用。
52.相比现有技术，本发明的有益效果在于：
53.本发明提供了一种包含骨桥蛋白的组合物，骨桥蛋白可以提高经过消化后的益生菌的活菌量，提高进入肠道的益生菌数量，从而使得组合物发挥更多的健康益处。该包含骨桥蛋白的组合物可用于提高胃肠道中益生菌包括乳杆菌和双歧杆菌的存活率，以及减轻胃
肠道中乳铁蛋白对益生菌存活的抑制作用杆菌，并且双歧杆菌是母乳及婴幼儿肠道中重要的有益菌，而骨桥蛋白又作为一种与新生儿发育密切相关的蛋白，这为研发更多促进婴幼儿肠道健康的新产品提供了可能，是非常重要的发现，具有很好地应用价值和商业前景。
附图说明
54.图1为本发明实施例1所提供的r0052经胃肠消化后的活菌量统计图；
55.图2为本发明实施例1所提供的bb12经胃肠消化后的活菌量统计图；
56.图3为本发明实施例1所提供的r0071经胃肠消化后的活菌量统计图；
57.图4为本发明实施例1所提供的m63经胃肠消化后的活菌量统计图。
58.图5为本发明实施例1所提供的r0033经胃肠消化后的活菌量统计图。
59.图6为本发明实施例1所提供的hn019经胃肠消化后的活菌量统计图。
60.图7为本发明实施例1所提供的m16v经胃肠消化后的活菌量统计图。
具体实施方式
61.下面，结合附图以及具体实施方式，对本发明做进一步描述，需要说明的是，在不相冲突的前提下，以下描述的各实施例之间或各技术特征之间可以任意组合形成新的实施例。在下述实施例中所采用的原材料、设备等除特殊限定外均可以通过购买方式获得。
62.本发明实施例中益生菌活菌数测定方法为gb 4789.35食品安全国家标准食品微生物学检验乳酸菌检验和gb 4789.34食品安全国家标准食品微生物学检验双歧杆菌检验。
63.实施例1
64.利用体外模拟胃肠道消化模型，研究不同浓度骨桥蛋白(opn)分别跟瑞士乳杆菌r0052、两歧双歧杆菌r0071、动物双歧杆菌乳亚种bb12、长双歧杆菌婴儿亚种(bifidobacterium longum subsp.infantis m63)、长双歧杆菌婴儿亚种r0033、动物双歧杆菌乳亚种hn019和短双岐杆菌m16v一起经过消化后菌量的变化情况。
65.1.实验方法如下
66.1.1实验组设置
67.对照组：菌粉60mg
68.实验组1：菌粉60mg+骨桥蛋白0.6mg(opn最终浓度为47.6mg/l)
69.实验组2：菌粉60mg+骨桥蛋白6mg(opn最终浓度为476.2mg/l)
70.实验组3：菌粉60mg+骨桥蛋白60mg(opn最终浓度为4762.0mg/l)
71.1.2实验材料
72.(1)菌粉：
73.瑞士乳杆菌r0052：拉曼，8.40
×
10
10
cfu/g
74.两歧双歧杆菌r0071：拉曼，6.90
×
10
10
cfu/g
75.动物双歧杆菌乳亚种bb12：科汉森，2.37
×
10
10
cfu/g
76.长双歧杆菌婴儿亚种m63：森永，3.16
×
10
10
cfu/g
77.长双歧杆菌婴儿亚种r0033：拉曼，3.26
×
10
10
cfu/g
78.动物双歧杆菌乳亚种hn019：丹尼斯克，7.00
×
10
11
cfu/g
79.短双岐杆菌m16v：森永，5.52
×
10
10
cfu/g
80.(2)骨桥蛋白：opn-10，85％
81.(3)胃蛋白酶：sigma，p6887
82.(4)胰酶：sigma，p7545
83.(5)胆盐：sigma，b3883
84.1.3实验过程
85.(1)实验前期准备
86.溶液配制：nacl 2m、kcl 0.5m、nahco
3 1m、cacl2(h2o)
2 0.3m、hcl 1m、naoh 1m
87.模拟胃液(sgf)存储液(2.5倍浓度)(400ml)：加200ml的蒸馏水到烧杯中，加47ml nacl，加26ml kcl，混合，用1m hcl调ph至3.3，定容至400ml，混匀，灭菌。
88.模拟肠液(sif)存储液(2.5倍浓度)(400ml)：加200ml的蒸馏水到烧杯中，加入82ml nacl，加入20ml kcl，加入85ml nahco3，混合，用1m hcl调节ph至6.6，定容至400ml，混匀，灭菌。
89.(2)胃阶段(食物：sgf＝63:37)
90.称样实验样品放入到50ml的离心管里，加入无菌水，混匀，构成总体积为12.6ml的消化样品；加入2.46ml的sgf并记下此时50ml离心管的重量w1；用盐酸将ph调至3.3；称量50ml离心管的重量w2并计算加入的盐酸的体积w3；在管内加入(4.44-w3)ml的水；用加热搅拌器水浴加热离心管内溶液；加0.5ml胃蛋白酶溶液(通过测定酶活力，使得最终胃蛋白酶活力为269u/ml，用sgf进行配制)；在37℃下加热1小时，然后用1m hcl调节ph至7停止胃酶活性。
91.(3)小肠阶段(食物：sgf：sif＝39:23:38)
92.加3.403ml的sif到胃阶段消化产物，记下50ml离心管重量w4；用酸碱液调节ph至6.6；称量50ml离心管重量w5，计算加入的酸液或者碱液的体积w6；加入(7.232-w6)ml水；加入1ml胆盐溶液(通过试剂盒测试后，使得最终浓度为3.1mm，用sif进行配制)；加入0.5ml胰酶溶液(通过测定酶活力，使得最终胰蛋白酶活力为16u/ml，用sif进行配制)；加入0.123ml cacl2溶液；在37℃下加热一个小时。
93.(4)实验结束后，马上对实验样品进行益生菌活菌总数测定实验。实验结果如表1和图1-7所示。
94.1.4数据分析：
95.所有数据均以均数
±
标准差(sd)表示，分析均基于三次生物学重复。统计分析采用单因素方差分析(anova)，p 《 0.05表明有统计学意义。数据显著性水平表示为*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001，****p《0.0001。
96.表1实施例1益生菌活菌量测定结果记录表
97.[0098][0099]
[0100]
从表1和图1中可得，不加opn，瑞士乳杆菌r0052在经过消化后，菌量为8.35e+09cfu/g，而加入0.6mg opn、6mg opn和60mg opn一起消化后，消化后菌量显著提高，分别增加了0.2个log值，0.59个log值和0.86个log值，从而可以得出，骨桥蛋白和瑞士乳杆菌r0052的组合一起经过消化后，能够显著提高瑞士乳杆菌r0052经过胃肠消化之后的活菌量，提高了进入肠道的益生菌菌量。
[0101]
从表1和图2中可得，加入6mg和60mg opn与未加入opn组对比，能显著提高动物双歧杆菌乳亚种bb12经过消化之后的总菌量，p＜0.05。
[0102]
从表1和图3中可得，加入6mg和60mg opn与未加入opn组对比，能显著提高r0071经过消化之后的总菌量，p＜0.05，说明opn能提高两歧双歧杆菌r0071经过消化后的菌量。
[0103]
从表1和图4中可得，加入6mg opn和60mg opn与未加入opn组对比，均能显著提高长双歧杆菌婴儿亚种m63经过消化之后的总菌量，p＜0.05，说明opn可以提高婴儿双歧杆菌m63经过消化之后的菌量。
[0104]
由表1和图5可得，加入6mg opn和60mg opn与未加入opn组对比，均能显著提高长双歧杆菌婴儿亚种r0033经过消化之后的总菌量，p＜0.05，说明opn可以提高长双歧杆菌婴儿亚种r0033经过消化之后的菌量。
[0105]
由表1和图6可得，加入0.6mg opn、6mg opn和60mg opn与未加入opn组对比，均能显著提高动物双歧杆菌乳亚种hn019经过消化之后的总菌量，p＜0.05，说明opn可以提高动物双歧杆菌乳亚种hn019经过消化之后的菌量。
[0106]
由表1和图7可得，加入0.6mg opn、6mg opn和60mg opn与未加入opn组对比，均能显著提高短双岐杆菌m16v经过消化之后的总菌量，p＜0.05，说明opn可以提高短双岐杆菌m16v经过消化之后的菌量。
[0107]
上述研究结果表明，在模拟的体外胃肠消化实验中，与不加骨桥蛋白组相比，骨桥蛋白与益生菌(瑞士乳杆菌r0052、两歧双歧杆菌r0071、动物双歧杆菌乳亚种bb12、长双歧杆菌婴儿亚种m63、长双歧杆菌婴儿亚种r0033、动物双歧杆菌乳亚种hn019、短双岐杆菌m16v)的组合可以提高消化后益生菌的活菌量，提高了进入消化道的菌量，有利于婴幼儿肠道健康。
[0108]
根据实施例1的研究结果，推测将骨桥蛋白应用于益生菌保护剂中，可以提高益生菌经胃肠消化后益生菌的存活率。采用骨桥蛋白的益生菌保护剂，其对益生菌的保护机理并不同于常规的益生菌保护剂，常规的益生菌保护剂如菌体冻干保护剂是为了减轻或避免冷到干燥对细胞带来的损伤，或者减少益生菌存储或运输过程中的损伤。而本发明所指代的益生菌保护剂不限于常规的益生菌保护剂，且其更加倾向于为了避免胃肠环境对益生菌损伤而研发的保护剂，包含骨桥蛋白的保护剂与益生菌混合、或包裹在益生菌外。当益生菌采用含骨桥蛋白的益生菌保护剂进行组合时，益生菌经过胃肠消化依然能够保持较高的存活率，有利于构建婴幼儿肠道健康。
[0109]
实施例2
[0110]
利用体外模拟胃肠道消化模型，研究乳铁蛋白(lf)、骨桥蛋白(opn)分别或共同与瑞士乳杆菌r0052、两歧双歧杆菌r0071、动物双歧杆菌乳亚种bb12、长双歧杆菌婴儿亚种m63、长双歧杆菌婴儿亚种r0033、动物双歧杆菌乳亚种hn019和短双岐杆菌m16v一起经过消化后菌量的变化情况。
[0111]
1.实验方法如下
[0112]
1.1实验组设置
[0113]
对照组：菌粉60mg
[0114]
实验组1：菌粉60mg+骨桥蛋白60mg(opn最终浓度为4762.0mg/l)
[0115]
实验组2：菌粉60mg+乳铁蛋白60mg(lf最终浓度为4762.0mg/l)
[0116]
实验组3：菌粉60mg+骨桥蛋白60mg+乳铁蛋白60mg(opn和lf的最终浓度均为4762.0mg/l)
[0117]
1.2实验材料
[0118]
(1)菌粉：
[0119]
瑞士乳杆菌r0052：拉曼，8.40e+10cfu/g
[0120]
两歧双歧杆菌r0071：拉曼，6.90e+10cfu/g
[0121]
动物双歧杆菌乳亚种bb12：科汉森，2.37e+10cfu/g
[0122]
长双歧杆菌婴儿亚种m63：森永，3.16e+10cfu/g
[0123]
长双歧杆菌婴儿亚种r0033：拉曼，3.26e+10cfu/g
[0124]
动物双歧杆菌乳亚种hn019：丹尼斯克，7.00e+11cfu/g
[0125]
短双岐杆菌m16v：森永，5.52e+10cfu/g
[0126]
(2)骨桥蛋白：opn-10，85％
[0127]
(3)乳铁蛋白：warrnambool，95％高纯度
[0128]
(4)胃蛋白酶：sigma，p6887
[0129]
(5)胰酶：sigma，p7545
[0130]
(6)胆盐：sigma，b3883
[0131]
1.3实验过程
[0132]
实施例2的实验过程与实施例1的实验过程相同，实验结果如下表2所示。
[0133]
表2实施例2益生菌活菌量测定结果记录表
[0134]
[0135][0136]
从表2中的记录可得，在模拟消化模型中，乳铁蛋白会降低益生菌的存活率。而加入骨桥蛋白后，可以减轻乳铁蛋白对益生菌存活率的抑制作用，可以提高模拟消化模型中益生菌的存活率。骨桥蛋白可以提高益生菌的耐胃酸能力、耐胃蛋白酶能力、耐胰蛋白酶能力和耐胆碱盐类物质能力。
[0137]
本发明的研究为实现益生菌与乳铁蛋白的组合用于促进婴幼儿肠道健康提供了新方向，骨桥蛋白的加入能够进一步提高益生菌与乳铁蛋白组合对肠道的有益作用。
[0138]
上述实施方式仅为本发明的优选实施方式，不能以此来限定本发明保护的范围，本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本发明所要求保护的范围。

技术特征：

1.一种用于提高胃肠道中益生菌存活率的包含骨桥蛋白的组合物，其特征在于：所述组合物包含益生菌和骨桥蛋白，其中所述骨桥蛋白用于提高胃肠道中益生菌存活率以及减轻胃肠道中乳铁蛋白对益生菌存活的抑制作用，所述益生菌选自双歧杆菌和/或乳杆菌。2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于：所述骨桥蛋白和所述益生菌的重量比为1：0.01-1，在所述组合物中，益生菌的含量范围为106cfu/100g-10
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cfu/100g。3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于：所述益生菌选自以下一种或多种：动物双歧杆菌乳亚种(bifidobacterium animalis subsp.lactis bb-12)、长双歧杆菌婴儿亚种(bifidobacterium longum subsp.infantis r0033)、两歧双歧杆菌(bifidobacterium bifidum r0071)、动物双歧杆菌乳亚种(bifidobacterium animalis subsp.lactis hn019)、动物双歧杆菌乳亚种(bifidobacterium animalis subsp.lactis bi-07)、短双歧杆菌(bifidobacterium breve m-16v)，瑞士乳杆菌(lactobacillus helveticus r0052)、鼠李糖乳酪杆菌(lactobacillus rhamnosus lgg)、鼠李糖乳酪杆菌(lactobacillus rhamnosus hn001)或长双歧杆菌婴儿亚种(bifidobacterium longum subsp.infantis m63)。4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于：所述益生菌选自以下一种或多种：瑞士乳杆菌(lactobacillus helveticus r0052)、两歧双歧杆菌(bifidobacterium bifidum r0071)、动物双歧杆菌乳亚种(bifidobacterium animalis subsp.lactis bb-12)、长双歧杆菌婴儿亚种(bifidobacterium longum subsp.infantis m63)、长双歧杆菌婴儿亚种(bifidobacterium longum subsp.infantis r0033)、动物双歧杆菌乳亚种(bifidobacterium animalis subsp.lactis hn019)或短双歧杆菌(bifidobacterium breve m-16v)。5.根据权利要求1至4中任一项所述的组合物，其特征在于：所述组合物为配方奶粉、调制乳粉、蛋白粉和营养补充剂中的一种或多种，优选地，所述组合物为溶液形式，所述骨桥蛋白在所述组合物中的浓度为47.6mg/l-4762.0mg/l。6.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于：所述组合物为益生菌保护剂，所述益生菌保护剂包含骨桥蛋白。7.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于：所述组合物为包埋型益生菌，所述包埋型益生菌包括保护壳体和内容物，所述保护壳体的制备原料包含骨桥蛋白，所述内容物包含乳杆菌和/或双歧杆菌。8.根据权利要求1至7中任一项所述的组合物，其特征在于：所述组合物用于提高婴幼儿胃肠道中益生菌的存活率。9.骨桥蛋白在制备提高胃肠道中益生菌存活率的产品中的应用。10.骨桥蛋白在制备减轻胃肠道中乳铁蛋白对益生菌存活的抑制作用的产品中的应用。

技术总结

本发明属于益生菌技术领域，具体涉及一种包含骨桥蛋白的组合物，所述骨桥蛋白用于提高胃肠道中益生菌存活率以及减轻胃肠道中乳铁蛋白对益生菌存活的抑制作用。本发明还涉及骨桥蛋白在制备提高胃肠道中益生菌存活率产品中的应用，以及骨桥蛋白在制备减轻胃肠道中乳铁蛋白对益生菌存活的抑制作用的产品中的应用。本发明发现骨桥蛋白可以提高经过消化后的益生菌的活菌量，提高进入肠道的益生菌数量，这为研发更多促进婴幼儿肠道健康的新产品提供了可能，是非常重要的发现，具有很好地应用价值和商业前景。价值和商业前景。价值和商业前景。