常用鉴定试剂的配制和应用

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常用鉴定试剂的配制和应用
一、通用试剂
1、碘试剂
检查一般有机化合物。
(1)碘蒸气 预先将盛有碘结晶的小杯置于密闭的玻璃容器内,使容器空间被碘蒸气饱和,将薄层置于容器内数分钟即显棕斑点。有时,于容器中加放一小杯水,增加容器内的湿度,可提高显的灵敏度。
(2)0.5%碘的氯仿溶液 喷洒试剂,置空气中待过量的碘挥发后,喷1%淀粉溶液,斑点由棕转为蓝。
2、硫酸试剂
检查一般有机化合物。
5%硫酸乙醇溶液作为谱显剂用。喷洒后,置空气中干燥15min,100烤至斑点呈(不同化合物呈不同颜)。
3、重铬酸钾—硫酸试剂
检查一般有机化合物。
5g重铬酸钾溶于l00ml40%硫酸中。喷该试剂后,150加热至斑点出现(不同化合物呈不同颜)。
4、磷钼酸试剂
检查还原性成分。
5%磷钼酸乙醇溶液。喷洒后,120加热至呈蓝斑点。
5、磷钨酸试剂
检查还原性成分
20%磷钨酸乙醇溶液。喷洒后,120烘烤,还原性物质呈蓝斑点。
6、硝酸银—氢氧化铵试剂
检查还原性成分。
溶液I:0.1mol/L硝酸银溶液。溶液:10%氢氧化铵溶液。临用前溶液I和
1︰5混合。喷洒后105加热5~l0min,至深黑斑点出现。
7、中性高锰酸钾试剂
检查易还原性成分。
0.05%高锰酸钾溶液。喷洒后粉红背景上显黄斑点。
8、碱性高锰酸钾试剂
检查还原性成分。
溶液I:1%高锰酸钾溶液。溶液:5%碳酸钠溶液。溶液I和等量混合使用,喷洒后,粉红背景上显黄斑点。
9、四唑蓝试剂
检查还原性成分。
溶液I:0.5%四唑蓝甲醇溶液。溶液:25%氢氧化钠溶液。临用前两液等量混合。喷洒后,微热或室温放置显紫斑点。
10、荧光素—溴试剂
检查不饱和化合物。
溶液I:0.1g荧光素溶于l00ml乙醇中。溶液:5g溴溶于l00ml四氯化碳中。先喷洒溶液I,然后将薄层板放入盛有溶液的缸内,黄斑点出现后,于紫外光灯下检视,红底板上显黄荧光斑点。
11.荧光显试剂
检查一般有机化合物。
条形码标签
(1)0.2%2,7--'氯荧光素乙醇溶液。业务流程重组
(2)0.01%荧光素乙醇溶液。
(3)0.1%桑素乙醇溶液。
(4)0.05%罗丹明B乙醇溶液。
喷洒任一溶液,不同的化合物在荧光背景上可显黑或其它荧光斑点。
二、苷类鉴定试剂
1、糖鉴定试剂
(1) -萘酚-硫酸试剂
检查还原糖。
溶液I:10% —萘酚乙醇溶液。溶液:硫酸。取lml样品的稀乙醇溶液或水溶液,加入溶液I 2~3滴,混匀,沿试管壁缓缓加入少量溶液,二液面交界处产生紫红环为阳性反应。
15% —萘酚乙醇溶液21m1、硫酸13ml、乙醇87ml及水8ml混匀后使用。喷洒于薄层板上,100烤3~6min,多数糖显蓝,鼠李糖显橙,所显颜于室温可稳定2天~3天。
(2)斐林试剂
检查还原糖。 ‘
南京邮电大学张代远溶液I:6.93g结晶硫酸铜溶于l00ml水中。溶液:34.6g酒石酸钾钠、10g氢氧化钠溶于l00ml水中。取lml样品热水提取液,加入4~5滴用时配制的溶液等量混合液,在沸水浴中加热数分钟,产生砖红沉淀为阳性反应。如检查多糖和甙,取lml样品水提液,加入lmll0%盐酸溶液,在沸水浴上加热l0min,过滤,再用10%氢氧化钠溶液调至中性,按上述方法检查还原糖。
(3)氨性硝酸银试剂
检查还原糖。
硝酸银1g,加水20ml溶解,小心滴加适量氨水,边加边搅拌,至开始产生的沉淀将近全部溶解为止,过滤。取lml样品的水溶液,加入lml试剂,混匀后,40微热数分钟,管壁析出银镜或产生黑沉淀为阳性反应。本试剂也可作为谱显剂,喷洒后于110加热数分钟,显棕黑斑点为阳性反应。还原性物质如醛类、邻二酚类等有干扰。
(4)茴香醛-硫酸试剂
检查糖类化合物。
硫酸lml加到含茴香醛0.5ml的乙酸溶液50ml中,需临用前配制。喷洒于薄层板上,105加热至显示斑,不同糖显不同颜。
(5)苯胺-邻苯二甲酸试剂
检查糖类化合物。
苯胺0.93g和邻苯二甲酸1.66g溶于100ml水饱和的正丁醇中。作谱显剂用。喷后105
烤5min,显红棕斑点。
(6)l,3-二'羟基萘酚-磷酸试剂
检查酮糖、醛糖。
0.2%1,3--'二羟基萘酚乙醇溶液50ml与85%磷酸50ml混合均匀后使用。喷后105烤5min~10min,酮糖呈红,醛糖显淡蓝。
(7)苯胺-二苯胺-磷酸试剂
检查糖类化合物。
苯胺4ml、二苯胺4g及85%磷酸20ml溶于丙酮200ml中。喷洒于薄层板上,85加热10min,不同糖显不同颜。
(8)2,3,5-三苯基氯化四氮唑(T.T.C)试剂
检查还原糖。
溶液:4%T.T.C甲醇溶液。溶液:4%氢氧化钠溶液。临用时将溶液等体积混合。喷洒后,100加热5~10min,显红斑点为阳性反应(醛类无干扰)。
(9)三氯化铁-冰醋酸(K.K)试剂
检查 -去氧糖,常用于强心甙。
溶液I:1%三氯化铁溶液0.5ml,加冰醋酸至l00ml。溶液:硫酸。取样品乙醇提取液lml,置试管中,水浴上蒸去乙醇,残渣用0.5ml溶液I溶解,沿试管壁缓缓加入溶液lml,静置分层,上层渐显蓝,下层显红或棕为阳性反应(其颜随苷元羟基和双键的位置和个数不同而不同)。
(10)占吨氢醇试剂
检查 -去氧糖(常用于强心甙)。
10mg占吨氢醇溶于100ml冰醋酸中,再加入lml硫酸混合。取lml样品,加入试剂lml,置水浴上加热30min,显红为阳性反应。
(11)Gregg-Gisvold试剂
检查2.6-去氧糖。
溶液I:10%三氯化铁溶液。溶液:1%盐酸甲醇溶液(97.2ml甲醇中含2.8ml盐酸)。0.5ml溶液I与100ml溶液混合。将样品的乙醇溶液点于滤纸片上,晾干后,喷洒上述混合试剂,110加热5min,显蓝为阳性反应。
(12)3,5-二氨基苯甲酸-磷酸试剂
检查2-去氧糖。
3,5-二氨基苯甲酸1g溶于80%磷酸25ml,加水稀释至60ml。喷洒后,100加热15min,2-去氧糖在日光下显棕,在紫外光下显黄绿荧光。
(13)对硝基苯胺-过碘酸试剂
检查去氧糖。
溶液I:饱和偏高碘酸溶液1份加水2份混匀。溶液:1%对硝基苯胺乙醇溶液4份与盐酸1份混合。先喷溶液I,放置10min,再喷溶液,去氧糖显黄,紫外光下显强荧光,再喷5%氢氧化钠甲醇溶液,颜转绿,乙二醇同样显。
2、酚类鉴定试剂
(1)三氯化铁试剂
检查酚类化合物、鞣质。
1~5%三氯化铁水溶液或乙醇溶液,加盐酸酸化。取1m1样品的乙醇溶液,加入试剂1~2滴,显绿、蓝绿或暗紫为阳性反应。作谱显剂用,喷洒后,显绿或蓝斑点为阳性反应。 ·
(2)4-氨基安替匹林-铁(Emerson)试剂
检查酚羟基对位无取代基的化合物。
溶液I:2%4-氨基安替匹林乙醇溶液。溶液:8%铁溶液。作谱显剂用,先喷
洒溶液I,再喷洒溶液,用氨气熏,显橙红或深红斑点为阳性反应。
(3)Gibbs试剂
检查酚羟基对位无取代基的化合物。
溶液I:0.5%2,6-溴(氯)苯醌氯亚胺的乙醇溶液。溶液:1%氢氧化钾乙醇溶液。取lml样品的乙醇溶液,滴加溶液,使pH9~10,再加入1滴~2滴溶液I,显深蓝为阳性反应。
(4)铁-三氯化铁试剂
检查酚类、芳香胺类及还原性物质。
溶液I:1%铁溶液。溶液:2%三氯化铁溶液。临用前等体积混合。喷洒后酚性成分呈蓝斑点,再喷20%盐酸,能使颜加深。纸谱可用稀盐酸洗去喷洒液。
(5)重氮化(Pauly)试剂
检查酚羟基对位无取代基化合物。
溶液I:0.35g对硝基苯胺溶于5ml盐酸中,加水稀释至50ml。溶液iso18000:5g亚硝酸钠溶于70ml水中。取1m1样品的乙醇溶液,加入1m13%碳酸钠溶液,在沸水浴中加热3min,再在冰水浴中冷却后,加入1~2滴溶液的混合液(临用时,在冰水浴中等量混合),显红为阳性反应。作谱显剂用,将溶液I与各l0ml混合,再加20ml 1%碳酸钠溶液(均临用时在冰水浴中混合),喷洒后,显黄、红、紫等斑点为阳性反应。
(6)牢固蓝B盐试剂
刀豆蛋白检查酚类化合物。
溶液I:新配的0.5%牢固蓝B盐的溶液。溶液:0.5%氢氧化钠溶液。先喷溶液I,再喷溶液,呈棕、紫、或绿者为阳性反应。能偶合的芳香胺类有干扰。
3.黄酮类鉴定试剂
(1)盐酸-镁粉试剂
基因敲除检查黄酮(醇)、二氢黄酮(醇)类化合物。
取lml样品的乙醇溶液,加入数毫克镁粉,滴加数滴盐酸,必要时水浴上微热,显红-紫为阳性反应。
(2)Shinoda试剂
采用含2%锌粉(W/W)-硅胶薄层板,展层后喷20%盐酸溶液,黄酮(醇)类呈红紫。
(3)三氯化铝试剂
检查具有邻二酚羟基或3-羟基、4-酮基或5-羟基、4-酮基的黄酮类化合物。
1%三氯化铝乙醇溶液或5%三氯化铝乙醇溶液。喷洒前、后将薄层板置日光下和紫外光灯下观察,呈黄或黄绿荧光为阳性反应。也可在滤纸上和试管中进行。
(4)中性醋酸铅或碱式醋酸铅试剂
检查具邻二酚羟基或酚羟基的黄酮化合物。
饱和中性醋酸铅或碱式醋酸铅溶液。取1ml样品的乙醇溶液,加1~2滴试剂,产生黄沉淀。
(5)锆-柠檬酸试剂
检查具3-羟基或5-羟基的黄酮类化合物。
溶液I:2%二氯氧锆甲醇溶液。溶液:2%柠檬酸甲醇溶液。取1mg样品,用甲醇溶解,加入溶液I lml,呈鲜黄示有3-羟基或5-羟基;再加入溶液1m1,黄不褪,示有3-羟基;黄褪去,加水稀释后变为无,示无3-羟基,但有5-羟基。也可在滤纸上进行,得到的锆盐络合物多呈黄绿,并具荧光。
(6)氨性氯化锶试剂
检查具有邻二酚羟基结构的黄酮类化合物。
溶液I:1%氯化锶甲醇溶液。溶液:氨蒸气饱和的甲醇溶液。取1mg样品的甲醇溶液,加入3滴溶液I,再加3滴溶液,产生绿-棕-黑沉淀为阳性反应。
(7)醋酸镁试剂
检查黄酮类、二氢黄酮类化合物,及羟基蒽醌类衍生物。
1%醋酸镁甲醇溶液。在滤纸或薄层板上,点1滴样品醇溶液,挥去醇后,点l滴试剂于样品斑点边缘,加热干燥,于紫外灯下观察,黄酮类显黄荧光,二氢黄酮类呈天蓝荧光。显橙红为大黄素型蒽醌,显紫为茜草型蒽醌。

本文发布于:2023-08-16 18:19:02,感谢您对本站的认可!

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