gfp-lc3质粒转染细胞步骤

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gfp-lc3质粒转染细胞步骤
一、实验步骤:
实验步骤分为四个环节,依次是:接种细胞,准备gfp-lc3 DNA,脂质体复合物,共培养,检测转染效率。
高温密封材料1、接种细胞:
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(1 )细胞悬液浓度调整为1-2 x 105备用,取六孔板置于超净台面上,每孔接种细胞悬液2ml ,培养过夜。
(2 )观察细胞状态:细胞形态均一, 边界清晰,密度达到80%左右的汇合度为最适转染状态。
(3 )将细胞培养板放回培养箱待用。
2、准备gfp-lc3复合物;
1 参照脂质体使用说明书: 6孔板选择转染体系为每孔加入4ugDNA和10ul转染脂质体,分别溶解在250ul体系当中。然后分别加入12ul质粒DNA和30ul脂质体,做好标记。
2  2min后,待溶液均一,将脂质体溶液全部吸出,滴加到质粒DNA溶液中,吹打混匀。
静置,室温下孵育20min ,以待gfp-lc3复合物的形成。
3、gfp-lc3 复合物与细胞共培养:(1 )取出细胞培养板,吸弃培养孔内培养液。
(2 )吸取制备好的DNA-lipid混合液,每孔加入500ul转染体系。
(3)轻轻摇晃混匀,然后补充1mlopti-MEM,盖好盖子放入培养箱培养。
中国军人核心价值观4、检测转染效率。
(1 ) CO2培养箱里取出培养板,进行荧光显微镜观察,观察细胞状态。巫咸族
徐阶(2 )切换到激光光源观察绿荧光,拍照。

本文发布于:2023-08-16 16:12:22,感谢您对本站的认可!

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标签:细胞   转染   观察   脂质体
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