地方财政收入Fractalkine inhibits lipopolysaccharide-induced M1polarization of macrophages by activating Wnt/β-catenin signaling pathway
GONG Qiming 1,JIANG Yan 2,LU Junling 1,YOU Yanwu 1理性经济人
雪铁龙c3 picasso1Department of Nephrology,Affiliated Hospital,Youjiang Medical University for Nationalities,Baise 533000,China;2Science Laboratory Center,Youjiang Medical University for Nationalities,Baise 533000,China
小平十章>杜勒斯
摘要：目的研究Fractalkine （CX3CL1，FKN ）对脂多糖（LPS ）诱导的RAW264.7巨噬细胞免疫应答的作用机制。方法体外培养RAW264.7细胞，使用慢病毒技术构建过表达FKN 的稳定细胞珠。细胞分为8组：（1）空白对照组；（2）LPS 组，细胞给予脂多糖（1μg/mL ，12h ）；（3）ICG-001组，细胞给与Wnt/β-catenin 信号通路抑制剂ICG-001（10μmol/mL ，48h ）；（4）过表达FKN 组；（5）ICG-001+LPS 组，细胞给与ICG-001（10μmol/mL 预处理36h ）后，加入脂多糖（1μg/mL ，12h ）；（6）过表达FKN+LPS 组，过表达FKN 细胞给与脂多糖（1μg/mL ，12h ）；（7）过表达FKN+ICG-001组，过表达FKN 细胞给予ICG-001（10μmol/mL ，48h ）；（8）过表达FKN+ICG-001+LPS 组，过表达FKN 细胞给与ICG-001（10μmol/mL 预处理36h ）后，加入脂多糖（1μg/mL ，12h ）；应用CCK-8细胞增殖实验检测ICG-001作用于巨噬细胞中的安全浓度；应用酶联免疫吸附（ELISA ）实验检测巨噬细玛坤丝胞上清液中M1型极化因子TNF-α和IL-6的含量；应用蛋白质免疫印记（WB ）实验检测巨噬细胞中FKN 、Wnt/β-catenin 通路关键因子Wnt-4和β-catenin 、M1型极化因子iNOS 、TNF-α和IL-6的蛋白表达水平；应用免疫荧光（IF ）实验检测巨噬细胞中M1型极化因子IL-6蛋白的定位。结果过表达FKN 的RAW264.7细胞中FKN 的蛋白水平较空白对照组明显升高（P <0.01）。CCK-8实验显示ICG-001作用于RAW264.7细胞48h 的IC 50为10μmol/mL 。与LPS 组相比，ICG-001+LPS 组上清液中TNF-α和IL-6的分泌量以及细胞内TNF-α、IL-6和iNOS 蛋白含量均升高（P <0.05），而细胞内FKN 、Wnt-4和β-catenin 蛋白含量均显著降低（P <0.01）；EX-FKN+LPS 组上清液中TNF-α和IL-6的分泌量以及细胞内TNF-α、IL-6和iNOS 蛋白含量均显著降低（P <0.01），而细胞内FKN 、Wnt-4和β-catenin 蛋白含量均显著升高（P <0.01）。与LPS 组相比，ICG-001+LPS 组中IL-6在细胞质中的定位增强，而EX-FKN+LPS 组中IL-6在细胞质中的定位受到抑制。结论过表达FKN 通过激活Wnt/β-catenin 信号通路抑制脂多糖诱导的巨噬细胞M1型极化。 关键词：巨噬细胞；极化；Fractalkine ；Wnt/β-catenin 信号通路
doi 10.12122/j.issn.1673-4254.2020.12.05J South Med Univ,2020,40(12):1726-1731··1726
