►嘌呤霉素杀灭曲线的确定（shRNA稳定转染细胞株，仅作参考） 为了筛选到稳定表达待研究shRNA的细胞株，确定杀死未转染/转导细胞的最低浓度嘌呤霉素至关重要。所以初次做实验的客户一定要建立适合自己体系的杀死曲线（kill curve麦博m520
） 。 （1）24孔板内以5~8 x 104 cells/孔的密度铺板，铺足够量的孔以进行后续的梯度实验。细胞孵育过夜；
（2）准备筛选培养基-含不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基（如0-15μg/mL，至少台湾921地震5个梯度）； （3）细胞孵育过夜后加入筛选培养基，孵育细胞；
（4）约2-3天更换新鲜的筛选培养基；
（5）每日监测细胞观察存活细胞比例。嘌呤霉素的最佳作用时间一般在1-4天之间。
（6）最小的抗生素使用浓度就是指从抗生素筛选开始1-4天内杀死所用细胞的最低筛选浓度。
►嘌呤霉素筛选稳定转染细胞
（1）day 0：24孔板内以paa5~8 x 104 cells/孔的密度铺板，孵育过夜；
（2）制备筛选培养基：含有最佳筛选浓度嘌呤霉素（由杀灭曲线确定）的新鲜培养基；
（3）day 1：筛选第一天，去除旧的培养基，加入一定量MOI的病毒颗粒；（加入无血清培养基的总量必须充分覆盖住细胞。）
（4）病毒转导后约6-8h，再添加1ml完全培养基（血清和双抗，如果已经使用双抗。）到细胞内，然后孵育过夜；
（5）病毒转导后48h，使用嘌呤霉素筛选培养基替换旧的完全培养基。孵育。
（6）约每2-3天替换新鲜配制的筛选培养基；
（7）每天检测细胞并观察活细胞生长比例，以及turboGFP表达的水平及所占比例。在某一个时间点几乎所用存活细胞都可以表达TurboGFP。嘌呤霉素最佳的作用时间在3-10天之间。
注：病毒的MOI越高，每个细胞含有的shRNA拷贝和嘌呤霉素耐性基因越多。在做嘌呤霉素筛选时，需记住越高MOI,含越多pac拷贝的细胞能耐受更高的嘌呤霉素浓度。调整嘌呤霉素的浓度去筛选预定量的转导细胞，但是嘌呤霉素的量不能低于杀死曲线建立的最低浓度。
储存方法和稳定性：
嘌呤霉素稳定性高，可以常温运输，收到产品后4℃存放；
嘌呤霉素在室温条件下可存放3个月，4℃条件下保质期一年。为了达到最理想的稳定状态和最长的保质期，最好存放于-20°C，保质期为2年。
Puromycin（嘌呤霉素）——pac基因筛选抗生素
2013-11-26 17:21 来源： 深圳欣博盛生物科技有限公司 点击次数：170 关键词： Puromycin invivogen
Puromycin是由Streptomyces alboniger（白黑链霉菌）产生的一种肽基核苷抗生素，可抑
制原核细胞和真核细胞的肽基转移。Puromycin可抑制革兰氏阳性菌和多种动物细胞和昆虫细胞的增殖，但是真菌和革兰氏阴性菌对Puromycin具有抗性，在一些特殊的情况下，Puromycin也可用于大肠杆菌。目前，Puromycin最重要的应用是用于选择携带pac抗性基因的转染细胞。
Blasticidin化学特性
CAS号：58-58-2
分子式：C22H29N7O5, 2HCl
手数王
分子量：471.51
pKa值：6.8 和7.2
分子结构：
推荐使用浓度
大肠杆菌
大肠杆菌对Puromycin不敏感。
哺乳动物细胞
细胞系 种属 组织 培养基 Puromycin(ug/ml)
Hela human uterus DMEM 3
293 human kidney DMEM 3
B16 mouse melanoma RPMI 1-3
PC1.0 hamster adenocarcinoma RPMI 10
质量控制：
纯度>95%(HPLC)
经细菌和哺乳动物细胞系鉴定活性
保存
4°C或-20°C保存2年，避免反复冻融。
产品信息:
产品名称 产品编号 规格 品牌 报价 折扣
Puromycin ant-pr-1 100 mg (10 x 1 ml) invivogen ¥1,582 请询
Puromycin ant-pr-5 500 mg (50 x 1 ml) invivogen ¥5,292 请询
文献引用
•2011 - Mol. Endocrinol., 25: 1416 - 1430
惯性力矩
The extreme C-terminal region of Gαs differentially couples to theluteinizing hormone and beta2-adrenergic receptors.
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麦博fc330•2011 - J. Cell Sci., 124: 2349 - 2356
Real-time monitoring of redox changes in the mammalian endoplasmic reticulum.
van Lith M, Tiwari S, Pediani J, Milligan G, Bulleid NJ
•2011 - J. Cell Biol., 193: 307 - 318
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Dantas TJ, Wang Y, Lalor P, Dockery P, Morrison CG
