miRNA mimics(模拟物)
1、单链的RNA也是可以转染细胞的，比如我们用的inhibitor就是单链的RNA；罗恩老师的奇迹教育2、还有mimics是双链的RNA，同什么DNA、分子克隆、转基因技术完全无关！3、miRNA mimics进入细胞后直接进入miRISC发挥作用，不存在什么转录成发夹结构的RNA。人员定位系统
合成miRNA mimics用双链的原因是：双链RNA有利于增加稳定性，利于保存和实验；其次双链的mimics有利于进入细胞后结合细胞中的相关酶和蛋白，形成miRISC。 miRNA mimics的序列并不存在设计的问题，mimics是模拟成熟体miRNA，其碱基序列与成熟体是一样的，而这个序列在miRbase上都可以很容易的查到。我们翻译成，模拟物的原因，是这个是双链，体内成熟体miRNA是单链，另外，其他结构上也有所不同，mimics在合成的时候，会有个悬垂，应该是你讲的多的那2个BP的东西，但这个不会影响mimics的功能。inhibitor就是合成的对应的成熟体miRNA的反向序列。 以hsa-miR-145为例设计引物，其成熟体序列为：GUCCAGUUUUCCCAGGAAUCCCU
一 设计引物
1 反转录之后扩增所需引物设计
反向引物（反转之后跑PCR所需的引物）：每个反向引物的都带有一段固定的序列，可以形成一个茎环，
固定的序列为：5，-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAG-3，
在这个序列后加上八个碱基，这八个碱基是hsa-miR-145从后面数八个碱基的反向互补序列，就是GAAUCCCU的反向互补：AGGGATTC，最后得到的反向引物的序列为
5，-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAG AGGGATTC -3，
2定量引物设计
正向引物：每个正向引物也带有一段固定的序列，固定的序列为：ACACTCCAGCTGGG
在这个序列后加上于成熟体除后面六个外剩下的碱基序列，成熟体除掉后面六个碱基后序列为：GUCCAGUUUUCCCAGGA，把U变成T即可，最后的序列为：
第二条线索5，-ACACTCCAGCTGGGGTCCAGTTTTCCCAGGA -3，
URP(unified reverse primer)：统一反向引物，也是一段固定的序列，TGGTGTCGTGGAGTCG
U6引物 日内瓦会议
冯顺桥上游引物CTCGCTTCGGCAGCACA 下游引物AACGCTTCACGAATTTGCGT
二 使用方法：
1反转录之后跑PCR的引物：所有要做的miRNA反向引物的混合，每个10微升
2 RT-PCR的引物：50微升的体系，30微升的水，10微升的正向引物，10微升的URP（内参50微升的体系，30微升的水，10微升U6的正向引物，10微升U6的下游引物）
