构建载体的步骤：
一江春水向东流 任正非NCBI数据库中到目的基因的序列刚构
根据序列用软件Primer5设计引物，让公司合成（需要几天时间） 注意：设计引物有几条注意事项：
1、 从质粒上扩增目的基因，引物只需要简单设计，并加上两端的酶切位点即可。
2、 从基因组上或者从cDNA上扩增基因，需要仔细考虑引物的长度及引物二聚体、错配等的可能性（软件设计的时候均会显示）
3、 另外，酶切位点的设计需要综合考虑：首先，目的基因序列上应该没有，载体上应该有，但是只能有一个而不是多个~
br16从细胞中提取RNA，反转录成cDNA，作为PCR的模板
利用合成的引物，模板进行PCR，小规模（20ul体系）扩增目的基因
利用琼脂糖凝胶电泳检测目的基因的大小是否正确
若正确，则大规模（50ul体系）扩增目的基因，然后电泳后切胶回收
将回收后的产物和骨架载体进行酶切
根据酶切产生的多余片段的大小进行溶液回收或者切胶回收
将回收后的产物进行连接
将连接产物转化涂板
从LB平板上挑几个单克隆进行培养
提质粒
送测序（需要几天时间）
新华月报
防火墙技术的应用将测序结果与所到的目的基因的序列进行比对，看是否有突变
人文主义的内涵
若有突变，则比对氨基酸序列，只要氨基酸序列一致，载体即构建成功。
