我们要求所提交的序列长度至少为目标位点上下游各50bp。请注意序列来源，尽量保证序列准确，多态性位点BLAST结果证明为单拷贝也就是要特异。标注出不确定的序列及引物设计时需要跳过的碱基和序列，目标位点周围其他多态性位点（最多可以有2个）用IUPAC码标注。 2.PCR反应体系是怎样的？
浙江省天台中学
96孔板，10μL体系，其中5μLDNA，5μLmix，0.14μL引物。
384孔板，5μL体系，其中2.5μLDNA，2.5μLmix，0.07μL引物。
384ArrayTape，1.6μL体系，其中0.8μLDNA，0.8μLmix，0.022μL引物。
1536孔板，1ul体系，其中1.5μLDNA（烘干），1μLmix，0.014μL引物。
3.KASP技术对DNA有什么要求？瘘口
建议最小的DNA浓度为2.5ng每μL。根据基因组大小，所需的DNA的量为：待测样品基因组每3000Mb5ng。建议设置DNA浓度梯度实验，来确定最合适的DNA浓度。KASP对DNA纯度的要求不高，一般粗提的DNA即可满足，但请尽量保证DNA浓度的一致性，提取及溶解过程中尽量不要用到EDTA，因为EDTA会阻止KASP酶的作用。如有EDTA，建议将DNA稀释一下，做一下浓度梯度实验或加MgCl2优化。 批批吉4.多个引物可以同时跑在同一块板子上吗？
可以，但KASP技术要求每个引物至少跑22个样品加两个NTC，否则可能影响分判读，造成较大的误差。
5.NTC信号值很高，怎么办？
钠长石
NTC跑很高可能有三个原因，一是NTC被DNA样品污染，二是循环数太多，引物自身扩增。建议多加几个NTC，注意污染问题，再看看。三是，引物设计问题，扩增产物中有引物二聚体存在，建议重新设计引物。
刘茂才杜润生逝世
