与常规PCR引物设计不同，circRNA引物设计应满足以下原则：
1、对于外显子环化circRNA，引物跨剪切位点（backsplice）设计； 2、对于内含子环化circRNA，可跨剪切位点设计，也可围绕内含子区域设计引物；
3、扩增产物长度建议不超过100 bp。
环状已获取的序列： 环序列从剪切位点处打开后的线性序列 因此，为复原 序列成环时的位置关系，应先对序列位置变换后再进行引物设计ccbot
虚拟博物馆1. CircRNA 序列的获取
Circbase
2. 序列转换
截取3‘ 端100-300bp 长度序列置于5’端前面，形成一个新的序列，再使用新序列进行引物设计，引物的产物要包含剪切位点。
ncs如果提供的circRNA全长序列小于300 nt，可通过首尾拼接构建包含剪接位点的线性序列用于定量引物设计
3. 引物设计完毕后到NCBI Primer-Blast 上进行比对，确保其特异性（比对不到任何产物）
circRNA定量验证的关键在于反向引物的设计，其核心是构建包含反向剪切位点的引物设计序列。获得引物设计序列后，即可按mRNA的引物设计原则进行引物设计，上下游引物因设计在剪切位点的两侧，确保扩增序列包含剪切位点支护
报表系统
>chr5:150850432|150865550 circ-Eya3TATGCACACATCCTCTCGGTTCCTGTTTCGGAAACCACTTATCCTGGGCAGACTCAGTACCAGACACTGCAGCAGTCTCAACCCTACGCTGTCTACCCTCAGGCAACCCAAACTTATGGACTACCTCCTTTCGACAGTTTGTGAAGACCGCAGAGACTTGCAGTCCAGTCACATAAGTGTGTGTAAAGAGACAGCGGTCCTCATGGAAGAAGAGCAAGACCTACCAGAGCGACCGGTGAAAAAGGCCAAGATGCAGGAACCAGGAGAACAAACTTTAAGTCAAGTAAACAACCCAGACACCAGTGATCAGAAGCCTGAGACCGCCAGCCTTGCGTCAAACCTTAGCATGTCAGAGGAAATTATGACATGCACCGATTACATCCCTCGCTCATCCAATGATTATACCTCACAAATGTATTCTGCAAAACCT
