南水北调西线工程
CRISPR基因敲除sgRNA引物设计⼤佬说，我只说⼀次，你⾃⼰要记住
以最⽕热的p53为例
1. NCBI--输⼊p53并选择物种human：tumor protein p53 [Homo sapiens (human)]
bi.v/gene
工业企业设计卫生标准
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2. Ctrl+F，输⼊sequence，快速定位（当然其实拉下去就是了），点击Genebank
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3. 下载p53基因序列
4. ⽤SnapGene软件打开序列，并简单了解每个元件
最好是可以学⼀下SnapGene这个软件的使⽤⽅法（有视频），个⼈认为，⾃⾏查资料理解每⼀个元件的含义和作⽤，可以帮助更快的补充背景知识。通过将散落的知识点集合起来，最后拼凑成⾃⼰的知识地图。 image.png
那么，为什么看起来好像这些mRNA都⼀样，怎么不只放⼀条完事了？不是滴。。。还有不⼀样
的mRNA。
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在学⽣信的时候，听到过⼀个词，“可变剪接”，有了初步印象之后，在这⾥才算是实实在在看到
了，我认真的数了数，mRNA画了15条，TP53蛋⽩也画了15条。那么我们可以理解为，TP53有15个亚型，当然，每个亚型都有⾃⼰的mRNA。 Step 2 分析敲除位点（到合适的敲除位置）
怎么样才能通过尽量少的sgNRA数量，去敲除尽量多的TP53蛋⽩。既然是做knockout，那⼀定是要所有的亚型都不能表达。那么既然如此，就是要敲除掉这些亚型共有的区域，⽽且越前⾯越好（如果只敲除尾巴，TP53合成了半个⾝⼦，半个⾝⼦的TP53说不定也能起作⽤），另外，也不能敲除掉内含⼦再障
（说是，如果敲掉了，可能会形成进的剪接，就有新的蛋⽩出现）----知识点好伐~
1. 发现所有亚型共有区域
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2. 查看详细信息，得知第⼀个segment（⽚段）是从12417-12498，⼀共82 bp image.png
3. 在Sequence中查看，复制⼀整个segment的碱基序列如下
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segment碱基序列
atggccatctacaagcagtcacagcacatgacggaggttgtgaggcgctgcccccaccatgagcgctgctcagatagcgatg Step 3
设计sgRNA
长女的婚事第二部⾸先，先附上⿍⿍⼤名的张峰实验室提供的⽹页zlab.bio/guide-design-resources 1. 打开⽹页，选择⽹页⼯具--博德研究所
有袋目
热传导方程image.png
2. 粘贴序列，⼀步到位
3. 查看结果
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我没有写结果怎么查看，或者分析结果耶，因为。。。因为做到这⾥，真正想学的⼈，感兴趣的⼈早就去看了。
4. 选择⽬的序列
略略略，哈哈哈哈哈~~
感谢师兄DZ
