随着基因科学的发展，基因敲除逐渐得到人们的认识和重视。基因敲除，即利用基因工程技术在细胞或生物体中人为地删除某个基因。基因敲除不仅能够帮助人们更深入地了解基因的作用机制，而且还能够应用于人类医学和农业等领域。以下是基因敲除的步骤。张伟宏近况
1. 设计寡核苷酸序列
首先，要针对目标基因的开放阅读框架(ORF)的特定区域设计两条反义oligo寡核苷酸序列，确保在目标基因由两条寡核苷酸序列促进的酵素产生的双链断裂后，在RNA聚合酶II作用下形成一个突变点。
将两条寡核苷酸序列插入必要的质粒，以利于基因敲除的进行。质粒应当具有可催化两条寡核苷酸序列合成双链断裂的特殊酵素。 蓓舒宁
3. 通过转染将质粒导入到细胞中
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在细胞培养液中，通过化学或生物学反应将质粒导入被敲除的细胞中。在此过程中，需要注意细胞的健康状况和达到某种压力和梯度，以保证质粒可以充分导入细胞内。
4. 培养细胞
通过对细胞进行培养，使其稳定地维持细胞增殖情况，同时降低敲除效率的不利影响，为敲除基因进行准备。第六届cctv模特大赛
5. 筛选细胞
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在基因敲除之后，筛选出其中的变异体，具体方法是种植在培养皿里，观察哪些组织发生了变化，将发生变化的组织提取出来，进行分离与分析。
6. 对敲除效率进行检验
用一些常见的实验手段验证细胞中基因的确为敲除状态，如PCR技术和Southern blot等方法。也可以观察敲除基因是否影响了细胞的生长、分化和其他活动，以判断基因敲除对生物体的影响。
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总之，基因敲除是一种有力的实验手段，通过人为的方法有助于更好地了解基因的作用机制。虽然基因敲除技术还面临着许多困难和挑战，但随着技术的不断进步，它也将逐渐发挥更大的作用。
