闽江大学多聚酶链式反应(polymerasechain reaction.PCR)基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性、退火、延伸三个基本反应步骤构成。 1.模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;
2.模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;
凌家滩3引物的延伸:DNA模板一引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链重复循环变性、退火、延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2~4分钟,2~3小时就能将待扩增的目的基因扩增放大几百万倍。SSR真核生物的基因组中散布着大量的串联重复序列,其中,2-4个bp的微卫星
序列Microsatellite或叫简单序列重复SSR:SimpleSequence Repeats)具有高度多态性。微卫星在结构上的最大特点是两端序列较保守,SSR引物根据与微卫星重复序两端的特定短序列设计,用来扩增重复序列本身,从而揭示微卫星的多态性。SSR是检测多态性的一种有效方法。微卫星(SSR)是广泛分布于真核生物基因组中的短串联重复序列(1-7bp),SSR实验一般检测到的是一个单一的多等位基因位点;是共显性遗传,可鉴别杂合子和纯合子;结果重复性很高。通常使用聚丙烯酰胺凝胶电泳,分辨率高,可检测出单拷贝差异。SSR广泛应用于生物遗传作图、体遗传研究、个体间亲缘关系鉴定等方面。
metropolis算法
典型的PCR反应体系由如下组分组成:
DNA模板、1ul:5*反应缓冲液2u]
两个合成的DNA引物(10um)1.5ul
耐热Taq聚合酶(5ul/ul)0lul;Water 37ul王永炎简介
农户办酒席发生食物中毒 多人身亡PCR反应程序为:95℃变性2min,94℃变性45s、57℃退火45s、72℃延伸
60s,共30个循环:72℃延伸8min。