CTAB法抽提真菌DNA（五篇）
第一篇：CTAB法抽提真菌DNA
提取液：
1M Tris.HCl
pH8.0
10ml 0.5M EDTA
pH8.0
4ml CTAB
2g NaCl
8.176g 巯基乙醇
2ml（使用时加入）加70ml ddH2O溶解定容至98ml 长恨歌赏析步骤：
1.在液氮中研磨菌丝体，直到菌丝体研磨成解决白细粉
2.将菌丝体装入1.5ml离心管中，加入600μlCTAB提取液，于62-65℃水浴中加热1h，间或振荡数次 3.加入600μlTris饱和酚：氯仿：异戊醇（25:24：1），【现用现配，按比例混匀后再加入管中】，温和振荡几次，然后在12000rpm下离心15分钟
4.取上清至新的离心管中，然后加入1/10体积的3M/L NaAc，1倍体积的异丙醇，轻柔混匀，在-20℃下静置30-60分钟，在12000rpm下离心5分钟 5.离心后去上清，沉淀用70％乙醇润洗2次 6.加入适量的TE缓冲液溶解沉淀，7.加入1μl RNase（10mg/ml）37℃水浴1小时 8.加入1倍体积的饱和酚：氯仿：异戊醇（25:24：1），【现用现配，按比例混匀后再加入管中】，温和振荡几次，然后在12000rpm下离心15分钟，取上清至新的离心管
9.加入1倍体积的氯仿，温和振荡几次，在12000rpm下离心15分钟，取上清至新的离心管中
10.加入2倍体积无水乙醇，-20℃静置30分钟以上，8000rpm离心12分钟
11.去除上清，沉淀用70％乙醇润洗2次，加入100μl TE缓冲液溶解沉淀，放入-20℃存放，待电泳检测
第二篇：血液标本抽提DNA
抗凝全血中提取DNA
准备： 配制80%异丙醇和70%乙醇各1ml备用。选择2ml的 离心管。血液的体积为2ml。先向2ml的离心管中加入1ml的血液。后加入1ml的buffer MG-A，剧烈摇晃20次；10000xg 离心30s，缓慢倒掉上清。再加入1ml的血液，再加入1ml的buffer MG-A，剧烈摇晃20次；10000xg 离心30s，缓慢倒掉上清。注意： 使用底部带有棱角的离心管，以防倒上清时，沉淀滑出离心管。
如果血液体积超过1/2离心管的体积，可分两次进行处理。目的：buffer MG-A的作用是快速裂解细胞，并且促使DNA形成容易沉淀的凝聚物。加入1ml的buffer MG-A。Vortex充分震荡，10000xg 离心 30s，缓慢倒掉上清。加入1ml的buffer MGS, Vortex充分震荡，10000xg 离心30s，缓慢倒掉上清。将离心管倒扣在吸水上2min；或者简短离心，仔细吸除残留的上清。
目的： 洗涤去除DNA凝聚物中的蛋白。加入1ml buffer MGL和10ul Proteinase K，Vortex震荡悬浮沉淀。6 65℃水浴30min（或者更长时间，可过夜），间断摇晃混合。目的：降解蛋白，释放DNA 10000xg 离心 30s，将上清缓慢倒入一个干净的2ml的离心管，加入800ul 80%异丙醇；缓慢翻转离心管20次（出现丝状或簇装DNA凝聚物）,再剧烈摇晃20次使DNA凝聚物变得更紧密。10000xg 30s，缓慢倒掉上清。
注意： 在出现丝状或簇状DNA凝聚物后，需剧烈摇晃去除可能包裹在DNA凝胶中的溶液，不然最后DNA溶解困难，或DNA中有盐残留。
在出现DNA凝聚物之前，DNA为溶解状态，需要缓慢翻转离心管。目的：异丙醇能够沉淀DNA 加入1000ul 70% 乙醇，剧烈摇晃20次；10000xg 离心 30s，缓慢倒掉上清。
目的：洗涤去除盐成分。将离心管倒置在干净的吸水纸上至少5min，或者简短离心，仔细吸除残留的乙醇（勿吸除沉淀）。室温放置10min或者37℃ 放置5min挥发乙醇，干燥至DNA沉淀为半湿润状态，无酒精味，效果最佳。目的：干燥挥发乙醇。加入至少200ulTE，提速Vortex 震荡5s或者剧烈摇晃10次，65℃水浴10-60min 溶解DNA，水浴5min后轻弹离心管底部打散DNA凝聚物（一般继续水浴10min 后即可完全溶解）；或者65℃水浴过夜。连结方式
注意：水浴后，DNA为溶解状态，应避免剧烈操作。目的：溶解DNA。
第三篇：质粒DNA抽提实验报告
质粒DNA抽提实验报告
一．实验目的：
1.掌握碱裂解法小量快速提取质粒DNA的方法，提取的质粒DNA可直接用于酶切，PCR扩增等。
2.学习利用水平式琼脂糖凝脉电泳初步检测DNA的纯度，构型，含量和分子量大小。
二．实验原理：碱变性抽提质粒DNA是基于染体DNA与质粒DN结果A的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH值高达12.6的碱性条件下，染体DNA的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离，当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH值至中性时，变性的质粒DNA又恢复原来的构型，保存在溶液中，而染体DNA不能复性而形成缠连的网状结构，通过离心，染体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。三．实验仪器及试剂：
1.5mlEP管、高速离心机、移液
溶液I： 50 mmol/L 葡萄糖、10 mmol/L EDTA、25 mmol/L Tris-HCl（pH 8.0）2毫克/毫升 溶菌酶
溶液II： 200 mmol/L NaOH、1% SDS 溶液III： 3 mol/L NaAc（pH4.8）溶液、TE缓冲液：10 mmol/L Tris-HCl、pH 7.51 mmol/L EDTA 四．实验步骤:
1、取1.5ml细胞培养物于1.5mlEP管中，12000rpm/min离心1min，去上清液（重复一次）
2、加200μl溶液Ⅰ重悬浮细胞
3、加200μl溶液Ⅱ，轻轻摇匀，放置5min
4、加150μl溶液，轻轻摇匀，冰浴5min，12000rpm/min离心5min
征服者f3135、取上清，加入等体积氯仿，摇匀，12000rpm/min离心10min
放弃是成功的第一步>3g安全网6、去上清，加入等体积异丙醇，室温放置5min，12000rpm/min离心10min 7、70%乙醇洗涤沉淀2次，风干
8、加20ddH2O溶解沉淀，-20℃下保存备用
五．实验结果：得到大肠杆菌质粒DNA
PCR以及电泳实验报告
一．实验原理：
PCR：该技术是在模板DNA、引物和四种脱氧核糖核苷酸存在下，依赖于DNA聚合酶的酶
促合成反应。DNA聚合酶以单链DNA为模板，借助一小段双链DNA来启动合成，通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链DNA模板中的一段互补序列结合，形成部分双链。在适宜的温度和环境下，DNA聚合酶将脱氧单核苷酸加到引物3´-OH末端，并以此为起始点，沿模板5´→3´方向延伸，合成一条新的DNA互补链。
电泳：琼脂糖凝胶可以用于蛋白质和核酸的电泳支持介质，尤其适合于核酸的提纯、分析。如浓度为1%的琼脂糖凝胶的孔径对于蛋白质来说是比较大的，对蛋白质的阻碍作用较小，这时蛋白质分子大小对电泳迁移率的影响相对较小，所以适用于一些忽略蛋白质大小而只根据蛋白质天然电荷来进行分离的电泳技术，如免疫电泳、平板等电聚焦电泳等。琼脂糖也适合于DNA、RNA分子的分离、分析，由于DNA、RNA分子通常较大，所以在分离过程中会存在一定的摩擦阻碍作用，这时分子的大小会对电泳迁移率产生明显影响。
二．实验仪器及试剂：
EP管、离心机、PCR仪、电泳槽、电泳仪、移液、紫外透射检测仪等 DNA模板、与特定DNA模板结合的引物、去离子水、商业化的DNA聚合酶以及缓冲液、dNTP、DNA荧光染料溴化乙锭、琼脂糖凝胶
三．PCR反应体系（25μl）2× PCRmix 12.5μl 引物1 1μl 引物2 1μl 20ddH2O 10.5μl
四．操作步骤 1、94℃预变性5min，然后94℃，30s-64℃，45s-72℃，1min循环7次 2、94℃，30s-55℃，45s-72℃，1min循环23次 3、72℃，10s
4、电泳检测blc
五．实验结果分析
分离不同大小的DNA片段所用的最适凝胶浓度是不同的，数据见下表：
如右图所示：实验所用的琼脂糖凝胶浓度为1.3%，实验的DNA条带位置在500bp-750bp之间，接近500bp，证明实验是成功的
