医院检验科免疫室 | 乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法）标准操作规程 | 文件编号： 生效日期： 年 月 日 版本：第1版 第 页，共 页 |
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1、检验申请
单独检验项目申请：乙型肝炎病毒表面抗原（缩写HBsAg）测定；组合项目申请：肝炎标志物检查组合。临床医生根据需要提出检验申请。
2.1标本采集
dm368
2.1.1常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中，或采用含分离胶的真空采血管。也可采集血浆，用肝素、EDTA或枸橼酸盐抗凝。
2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。
2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。
2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。
2.1.5下列标本为不合格标本
2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。
2.1.5.2对检测结果可能有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。 2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。
2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。
2.2标本保存
2.2.1接收标本后在置1-2h后将标本离心分离出血清或血浆，避免溶血。离心必须达到3000rpm 15min，离心后的血清中不能含有颗粒物和微量纤维蛋白。
2.2.2标本保存时间：室温（15-25℃）下可稳定48h，普通冰箱中（2-8℃）稳定7d，在-20℃最多可保存4周。避免反复冻融。不可使用热灭活的标本。
2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4-8℃冰箱内保存7d。
2.3标本采集的注意事项
采血前使受检者保持平静、松弛，避免剧烈活动。
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3．方法原理
采用单克隆抗-HBs包被反应板，加入待测标本，同时加入抗-HBs-HRP，当标本中存在HBsAg时，该HBsAg与包被抗-HBs结合并与抗-HBs-HRP结合形成抗-HBs-HBsAg-抗-HBs- HRP复合物，加入TMB底物产生显反应，反之则无显反应。
4．试剂及其他用品
4.1试剂：乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒，由上海科华生物技术有限公司出品，试剂盒药品批准文号：国药准字S10910114(48人份)；国药准字S10910113(96人份)。未打开的试剂盒保存于2-8℃，不可冻存。开启的包被反应板放入干燥剂密封后在2-8℃保存并尽快使用。
4.2试剂盒组分
微孔反应板 HBsAg阴性对照
HBsAg阳性对照 酶结合物
显剂A 显剂 B
终止液 洗涤液 （ 蒸馏水1：25稀释）
封片 说明书
4.3其他试剂及用品
加液器： 型号。
离心机： 型号。
温箱（或水浴箱）： 型号。
洗板机： 型号。
酶标仪： 型号。
5．室内质控与室内质控规则
5.1质控品：采用卫生部临床检验中心临床免疫室免疫质控血清，浓度
IU/ml。
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5.2质控品重建方法：采购来的质控品按每周用量分装-20℃冻存，复融后充分颠倒混匀。
5.3质控品测定：在每一次（板）标本中测定质控血清。
5.4质控规则：绘制质控图，求出SD和CV值。
6．标本检测步骤
（1） 洗涤液配制： 将浓缩洗涤液用蒸馏水（或去离子水）作1：25稀释。
（2） 加样：
加入75μl待测样本和阴、阳性对照于反应孔中（共预留阴性对照3孔、阳性对照1孔、建议预留空白对照1孔。），用封片纸覆盖反应板后，将反应板置37℃孵育60分钟。
（3） 取出反应板，撕去封片，在已加入待测样本和阴、阳性对照的孔中加入50μl酶结合物;在微孔震荡器上震荡10秒钟，或手工轻轻震荡10秒钟; 用封片纸覆盖反应板后，将反应板置37℃孵育30分钟。
（4） 洗板
手工洗板：弃去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置30-60秒，甩干，重复5次后，在干净的吸水纸是上拍干。
洗板机洗板：采用 洗板机洗板，选择洗涤5次程序，用配置的工作浓度洗涤液注满每孔，每次工作浓度洗涤液在反应微孔中的停留时间为30-60秒，并确保每次吸净无残留，洗完后在干净的吸水纸上拍干。
（5） 显：
每孔加显剂A液、B液各50μl，充分混匀后封板，置37℃
孵育30分钟。
（6） 终止：
每孔加入50μl终止液，振荡反应板5秒钟，使之充分混匀。
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（7） 比：奇瑞农机
使用 酶标仪，波长450nm。（建议使用双波长的酶标仪比，参考波长630nm或630相近的波长。）若需扣除显剂空白，则先用显剂空白对照孔校零，然后读取各孔OD值。
7．结果判断：
Cutoff值计算：COV=阴性对照平均OD值 +0.100
当S/COV≥1.0，说明该待测样本HBsAg结果为阳性。
当S/COV＜1.0，说明该待测样本HBsAg结果为阴性。
8．检验结果的报告及范围
8.1结果的报告
8.1.1结果经审核后，确认准确无误后发出报告。
8内部错误.1.2报告单上标明结果的参考区间、报告日期、时间、操作者和审核者签名，并有与申
请单相同的信息。
8.1.3如收到标本的质量可能对测定结果有影响的也在报告单上指出。
8.2临界值：对临界值标本或阳性标本再以双孔重复试验确定它的结果。如果重复检测都是临界性结果的标本建议对其进行跟踪检测。
9．操作性能
9.1从冷藏环境中取出的试剂盒需平衡至室温后方可使用，余者应按前述方法保存和使用。在平衡试剂的同时，待测样本需平衡至室温后再行测试。
9.2 使用前试剂应摇匀。
9.3 显过程必须封片。所有封片纸不能重复使用。
9.4 结果判断须在反应终止后10分钟内完成。
9.5 不同批号的试剂不可混用。肉鸭网
9.6洗板机洗板时应时常检查加液头，确保其畅通无堵塞；洗板时所用的吸水纸请勿反复使用。洗板机的管路用纯化水冲洗，以防堵塞和腐蚀。
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9.7 待测样本不可用NaN3防腐。
9.8 本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程处理。
10．参考范围及医学决定水平
阴性结果：提示没有检测到与乙型肝炎病毒感染相关的HBsAg浓度水平。
11．临床意义
11.1乙型病毒性肝炎是一种重要的公众危害性疾病，据估计全球范围内目前大约有3亿乙型肝炎病毒携带者。感染乙型病毒性肝炎可引起广泛的急、慢性肝脏疾病，流行病学研究已经清楚地表明乙肝病毒与肝细胞癌的发生有联系。
11.2感染乙型肝炎病毒后，机体会产生各种不同模式的抗原、抗体血清学免疫应答反应。通过监测这些标志物，不仅可以诊断感染，而且还可以判断疾病的进程和预后。HBsAg是HBV感染后第一个出现的标志物，是提示血清有潜在传染性的最好的间接指标。
12．结果审核以及分析与相关项目的联系
12.1由资深专业人员负责检验结果的审核。
12.2审核者认真审核每一个测定结果，对发出报告结果的可靠性负责，并在报告单的审核者处签字。
12网剧中披露他人手机号码构成侵权.3相关项目：审核与其他肝炎标志物等的关系，如出现与临床不符甚至相悖的情况，应分析与查原因。
13．参考文献
13.1 体外诊断试剂说明书编写指导原则（国食药监械[2007]240号）。
13.2《中华人民共和国药典》2010年版三部。
