Waters Xevo TQ-S液相谱/质谱联用仪 (三重串连四级杆质谱)操作指南
1.适用范围：
本使用规范适用于有机室所备有的Waters Xevo TQ-S液相谱/质谱联用仪(三重串连四级杆质谱)。 2.仪器设备的主要技术指标：
1) 梯度性能：保留时间标准偏差（SD）≤0.047min。
2) ESI正离子灵敏度和精密度：
测试样品：磺胺二甲基哒嗪(Sulfadimethoxine)，浓度：0.1pg/μl
指标要求：平均信噪比（S/N）≥3000:1；平均峰面积≥60000；峰面积相对标准偏差（%RSD）≤3.0%；保留时间标准偏差（SD）≤0.047min中国电梯网
测试结果：信噪比（S/N）:4500psi；峰面积：120000；峰面积相对标准偏差（%RSD）：2.5%；保留时间标准偏差（SD）：0.00min，均符合指标要求。
3) ESI负离子灵敏度和精密度：
测试样品：氯霉素(chloramphenicol)，浓度：0.05pg/μl
指标要求：平均信噪比（S/N）≥400:1；平均峰面积≥1000；峰面积相对标准偏差（%RSD）≤3.0%；保留时间标准偏差（SD）≤0.047min
测试结果：信噪比（S/N）:520psi；峰面积：1500；峰面积相对标准偏差（%RSD）：2.8%；保留时间标准偏差（SD）：0.00min，均符合指标要求。4) 系统精密度（TUV/PDA）：峰面积相对标准偏差（%RSD）≤0.5%；峰高相对标准偏差（%RSD）≤0.9%。 5) NanoFlow正离子灵敏度
指标要求：峰强（m/z =785.8）≥1×107，
测试样品：Glu-Fibrinopeptide B，浓度：100fmol/μl
测试结果：峰强度（m/z =785.8）：1.48×107；符合指标要求。
6) T RIZAIC正离子模式MS说明：
测试样品：ADH T19, PHO T33, ENL T4, BSA T59, ENL T43, ADH T17, BSA T10, PHO T88
指标要求：保留时间标准偏差：≤0.25%
测试结果：ADH T19：标准偏差为0.02% (23.77min)；PHO T33：标准偏差为0.03% (25.12min)；ENL T4：标准偏差为0.02% (21.83min)；BSA T59：标准偏差为0.01% (21.58min)；ENL T43：标准偏差为0.04% (22.33min)；ADH T17：标准偏差为0.03% (23.31min)；BSA T10：标准偏差为0.02% (24.41min)；PHO T88：标准偏差为0.03% (24.81min)
7) 系统性能测试
一维系统精密度测试：测试样品17α-OHP。一维保留时间重复性(PDA)指标：保留时间标准偏差(SD): ≤1.0s；一维峰面积重复性(PDA)指标：峰面积相对标准偏差(%RSD): ≤0.5%；一维峰高重复性(PDA)指标：峰高相对标准偏差(%RSD): ≤0.9%；
二维系统精密度测试：测试样品17α-OHP。二维保留时间重复性(PDA)指标：保留时间标准偏差(SD): ≤1.0s；二维峰面积重复性(PDA)指标：峰面积相对标准偏差(%RSD): ≤0.5%；二维峰高重复性(PDA)指标：峰高相对标准偏差(%RSD): ≤0.9%；所有检测方式的回收率指标：≥90.0%
3. 仪器设备的使用环境要求：
1) 电力要求：仪器室电源要求相对稳定，电压变化要小，最好配备不间断稳压电源，防止意外停电。
2) 工作温度：19-22度，不要超过25℃，保持恒温。
3) 相对湿度：50%-70%
4. 操作程序：
4.1 开机
堆云堆雪4.1.1 打开电脑，首先打开自动进样器电源，再逐一打开质谱电源和UPLC各电源，各部件通过自检后，双击工作站图标进入Masslynx工作站。
4.1.2 选择Instrument＞MS Tune进入调谐界面。从调谐界面选择
Vacuun＞pump，打开真空泵，开始抽真空。机械泵和涡轮分子泵开始工作。 4.1.3 质谱上的真空灯开始闪烁，当系统达到真空状态，灯变为绿，不再闪烁，同时观察调谐界面Diagnostics→Turbo Speed 泵转速达到100%即可，达
到实验状态大约要抽真空4小时（注意：真空规，测量工具，无异常状况通常无
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需打开，尤其在刚开始抽真空时不要打开。）
4.1.4 气源压力设置：氮气：90-100psi。氩气：0.05Mpa，不超过
0.1Mpa（实验前确认氩气瓶压力，低于1Mpa时需更换氩气。）
4.2 准备UPLC系统
4.2.1准备流动相：用0.22μm的膜过滤缓冲液，所有的缓冲液和超纯水都要新配制，超纯水和缓冲液使用不得超过二天。缓冲盐一定要可挥发的，而且浓度在2mM-5mM之间，不要超过10mM（注：若流动相含有缓冲盐，用完需使用大比例水相长时间冲洗系统和谱柱，若流动相含有酸，必须为挥发性酸，浓度范围为0.01%-0.1%，进样器高压密封垫要求PH≥2，不能使用三氟乙酸、七氟丁酸等离子对试剂）。有机相要使用原装进口的谱纯。（2）SW+Purge（弱洗：10%ACN+90%纯水或者与流动相梯度初始比例相同）用于清洗泵头和密封清洗；Wash（强洗：90%ACN+10%纯水）；（3）准备样品：所有样品最好都要用流动相初始梯度比例的溶剂来溶解，并用0.22μm的膜过滤。
4.2.2初始化UPLC泵：在Masslynx主页面上点击MS Console，进入系统控制界面，点击左边Quaternary Solvent Manager选择CONTROL＞Prime A/B/C/D solvent，选择A/B/C/D输入1min，如果更换了流动相则输入3min，按start。
4.2.3初始化UPLC自动进样器：UPLC控制台上选择Sample Manager，选择Control＞Prime syrings，灌注进样器和洗针系统。选择Sample syringe and syringes，Number of cycles 一般选1，但在更换洗针溶液后选3。完成后，UPLC自动进样器准备好。
4.2.4灌注完泵和自动进样器后UPLC准备好。
4.3 建立一个Project
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日期2009.1
如果在已有的Project下进行试验，此步可以不做。
从Masslynx主窗口选择File＞Project Wizard，出现对话窗口，点击Yes，输入Project Name，选择Create using existing project as template.点击Browse选择project的模板。
4.4 准备质谱
如果在已有的Project下进行试验，此步可以不做。
4.4.1MS Tune，首先打开氮气，再开高压（红表示高压已关，绿表示高压已开）。（注：一定要打开氮气和高压才能开流动相，关闭流动相后才能关
高压和氮气）。
4.4.2点击ES+ Source. 输入以下各参数: Capillary (kV): 3；Cone (V): 30；DesolvationTemp (℃): 550；Desolvation(L/hr): 800；Cone (L/Hr): 50；以下参数最好直接使用intellistart自动校正仪器质量数时自动生的参数：LM Resolution 1: 3；HM Resolution 1: 15；Ion Energy 1: 0.5；LM Resolution 2: 3；HM Resolution 2: 15；Ion Energy 2: 0.5；Collision: 2。
4.5 ESI调谐
调出目标化合物的最佳质谱参数。
4.5.1把调谐液放入A/B/C号位（注：浓度在0.1-1ppm之间，根据实际的
灵敏度调整样品浓度）。
4.5.2把流动相的流速设为0.2ml/min，有机相和水相比例为1:1。点击Tune
界面下的Fluidics，点击Purge syringe 灌注注射器。设置Infusion 流速
5uL/min，根据灵敏度可适当调整。设置Flow State模式（Infusion：直接进样；Combined：液相和样品混合进样；LC：液相进样；Waste：废液）。
4.5.3选择Xevo TQ-S MS Detector下面的IntelliStart：Sample Tune and Develop Method 点击Start，调出界面，输入各参数，系统开始自动优化目标化合物的质谱参数。
选择Instrument＞MS Method进入质谱方法编辑界面。打开新建质谱方法窗口，再点击MRM，按调谐结果输入下列参数：离子模式、化合物名称、母离子质
量数、子离子质量数、离子驻留时间、锥孔电压、碰撞能量和MRM运行时间
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等。
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4.7建立UPLC方法。
选择Instrument＞Inlet Method进入UPLC方法编辑界面。逐一编辑泵的方法、自动进样器的方法和紫外检测器的方法等。最后把UPLC的方法命名保存。
4.8建立样品运行序列表，运行采集数据。
在Masslynx主界面上点击File＞New，新建序列表，输入文件名、注释、质谱方法、液相方法、瓶号、进样体积等参数，最后把编辑好的序列表命名保存。
4.9处理数据。
4.10 关机
一般质谱仪部分不需要关机，不用时只要保持在Standby状态下即可。但如果长时间不用，或是对仪器进行清洗和维修时需要关机。
4.10.1 首先停止液相谱流速，如果还需要冲洗谱柱，可以将液相谱管路从质谱移开到废液瓶。
4.10.2 点击MS Tune进入调谐窗口，点击Standby，关闭高压，让MS进入待机状态时，指示灯会由绿变成红。
4.10.3 等脱溶剂气温度降到常温，关闭氮气。
钢骨混凝土4.10.4 选择Option＞Vent，这时质谱开始泄真空，待机械泵停止运行，同时
观察调谐界面Diagnostics→Turbo Speed 泵转速为0时即可关闭质谱电源。
5. 仪器基本维护与使用注意事项：
5.1仪器室要保持整洁、干净、无尘；配套设施布局合理。
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5.2 开高压之前一定要先开氮气，关氮气之前一定要先关高压。
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