卢先雷 喻华
[摘要] 目的 从文献报道的几种血培养基基础中选择最佳者作为基础，并对血培养基补充剂进行改进以提高血培养阳性率。方法 通过对比研究：研究三种不同基础培养基（哥伦比亚肉汤、脑心浸液、胰大豆肉汤）与两种补充剂（文献补充剂A与改进补充剂B）交叉搭配下各种细菌生长情况，确定最佳配方后进行临床验证，并统计出临床试验阳性率。 结果 采用哥伦比亚肉汤优于脑心浸液，优于胰大豆肉汤；而传统MgSO4葡萄糖肉汤效果不佳。对文献提供的补充剂配方加以改进后，增效作用显著。哥伦比亚肉汤辅以改进补充剂B配方的培养基，细菌生长最快。654份血培养阳性率12.2%。肺炎链球菌、无乳链球菌、草绿链球菌、莫拉氏菌、巴斯德氏菌、JK棒状杆菌等苛养菌，均能从血培养中检出。 结论 采用哥伦比亚肉汤辅以改进补充剂B的培养基效果最佳，能提高血培养阳性率。 [关键词] 培养基 血培养 分离率
Selection of blood culture base medium and improvement of supplement . Lu Xianlei . Clininal Microbial Laboratory,The NO.5 Hospital of Chengdu . Chengdu Wenjiang 611130
[Abstract] Objective To select the best effective base medium from some documents report, and improve quicken agent for increasing isolation rate of blood culture. Methods Three different base media and two different prescription quicken agents was compared and grouped crisscross,then selected the best effective group.and the clinical testing was being assayed ,the isolation rate was count . Results Colomcia broth was best base medium ,secondaryly brain heart infuction was better ,and tryptic sorbean infuction broth was good ,but the MgSO4 glucose broth was inferior.The improved quicken agent ,it’s effection of acceleration to bacterial growth was increaed than that of non-improved agent .And the Colombia broth with the improved quicken agent was best effective for bacterial growth .clinical testing: isolation rate is 12.2% by 654 speciments of blood culture , S.pnumoniae ,S.agalactiae ,S.salivarius ,Moraxella bacterium, Pasteurella bacterium ,C.jeckeium ,et al ,could be isolated from speciments of blood culture. Conclusions The Colombia broth with improved quicken agent was best effective to be used for blood culture,isolation rate of blood culture was increased with it.
[Key words ] medium blood culture isolation rate
败血症是感染性疾病的危重阶段，如何快速、准确地诊断，对于临床的抢救有着重要意义[1]，它将直接影响疾病的转归。这在当前细菌耐药性日趋严重的情况下显得尤为重要。
目前，败血症的诊断、主要依赖于血液（骨髓）的细菌学诊断——血培养，而血培养基效果的优劣是能否获得阳性结果的前提之一，是诸多因素中影响血培养阳性率的最重要的一环。而培养基配方、应用形式的设计直接决定了培养基的性能和效果的优劣[2][3]。而现在市场上商品血培养基因厂家不同而配方也不统一，其品质良莠不齐。为了能从中选择最佳者，作者对文献报道的各商品血培养基普遍采用的几种基础培养基及其补充剂进行了研究，取得了一些的结果，现介绍如下：
材料与方法
一、材料
1、试剂：脑心浸液干粉购自生物梅里埃公司、哥伦比亚肉汤为DIFCO公司产品；胰大豆胨、示胨、酵母粉等购自英国OXOID公司；胰蛋白胨、蛋白胨、血红素、及各种成品培养
基、生化管购自杭州天和微生物试剂厂；辅酶Ⅰ、糖类、氨基酸、维生素、嘌呤、嘧啶等生物化学试剂为国产或进口分装。聚茴香脑磺酸钠（S.P.S.）为杭州天和微生物试剂厂蕙赠。
2、试验菌株：ATCC25922大肠艾希菌（E.coli ）、ATCC25923金黄葡萄球菌（S.aureus）、ATCC27853铜绿假单胞菌（P.aeruginosa）、AATCC49247流感嗜血杆菌（H.influenzae）骑脖子，购自卫生部临检中心；肺炎链球菌（S.pneumoniae）、草绿链球菌（S.salivarius）为本实验室保存菌株。
3、培养基：（1）血培养双相瓶：共七组配方，先按基础液配方配制，将1/3体积的基础液作固相，加入10g/L纯化琼脂，加热溶解分装20ml/瓶；剩余2/3体积的基础液作液相，加入SPS 0.3g/L, 溶解, 分装输液瓶，500ml/瓶。121℃高压灭菌15min后，趁热将固相瓶放入60℃水浴中，用无菌注射器无菌操作穿刺加入过滤除菌的补充物0.1ml，混匀后放平待凝；在500ml液相瓶中加入过滤除菌的补充物2.5ml/瓶，混匀后用无菌注射器将液体分装入已凝固的固相瓶内，40ml/瓶，如此制成双相瓶。48h无菌试验后备用：
（2）[双相瓶配方]：由基础配方+补充物组成：
①基础配方：脑心浸液、胰大豆肉汤、哥伦比亚肉汤，以传统MgSO4葡萄糖肉汤作对照；
②补充剂 (所注含量为培养基内最终浓度)：
补充剂A：[略].[1][2][3]；
补充剂B：［略］。
（3）配方组合：
配方一：脑心浸液+补充物A
配方二：胰大豆肉汤+补充物A
配方三：哥伦比亚肉汤+补充物A
配方四：脑心浸液+补充物B
配方五：胰大豆肉汤+补充物B
配方六：哥伦比亚肉汤+补充物B
（4）血琼脂、巧克力血琼脂、麦康凯琼脂等为本实验室制备。
4、标本来源：654份血培养标本中639份来自我院住院病人，15份来自门诊。体温均>39℃，有近期抗生素应用史，其中我院住院病人均已使用了多种抗生素。所有测试者均是抗生素经验无效而自愿进行者。
二、方法
1、配方筛选：
（1）按七种配方分别制作双相瓶各18瓶，无菌试验后备用。
（2）菌液制备：草绿链球菌（S.salivarius）、肺炎链球菌（S.pneumoniae）采用15%兔血清脑心浸液增菌后，4000r/min离心,取细菌沉淀用无菌盐水调整浊度为0.5麦氏浊度，再稀释107，各取0.1ml接种双相瓶及血平皿（作菌落计数）各三个；计数结果取平均值，结果为20 CFU/ml，即双相瓶内细菌浓度：2 CFU/瓶；其余各菌采用16h琼脂培养物作直接盐水悬浮，按上法稀释并测定出浊度：金黄葡萄球菌（S.aureus）18 CFU/ml、大肠艾希菌（E.coli ）32 CFU/ml、铜绿假单胞菌（P.aeruginosa）10 CFU/ml、流感嗜血杆菌
（H.influenzae）44 CFU/ml。
（3）菌液用量：0.1ml/瓶；
（4）人血用量：采用血库过期存血，经无菌试验后应用，3.9ml/瓶；
（5）接种方法：将菌液和人血先后分别用无菌空针注入瓶内，每种菌接种3瓶，放入35℃，5%CO2孵箱培养，每4h观察一次，并在8h时摇动倾斜培养瓶一次。
（6）用肉眼观察并记录各瓶生长情况：上层液体浑浊时间及固相菌落出现时间。
（7）经以上测试后，对七组配方所得数据采用多样本秩和检验，比较差异。
2、临床试验：将验证合格的配方六培养瓶发放临床各科，对发热病人志愿者进行血培养。成人5ml/瓶，小儿2-3ml/瓶。对于阳性瓶及时转种血琼脂、巧克力琼脂、麦康凯琼脂，并作药敏试验，按三级报告制度执行，并记录阳性出现时间。最后统计阳性率并制作细菌分布表。
结果
1、七种配方培养瓶中各种细菌的生长情况比较：见表1，
该表反映出配方六培养基在受试菌的检出方面优于其它六种，经秩和检验，差异具有显著性P<0.05 。并显示传统MgSO4葡萄糖肉汤（对照）效果不佳。另外，当采用同一补充剂时，哥伦比亚肉汤优于脑心浸液、脑心浸液优于胰大豆肉汤；采用同一基础培养基时，改进补充剂B优于补充剂A。
2、654份血培养共检出阳性菌80株，阳性菌分布及阳性出现时间见表2
表1 七种配方培养瓶中各种细菌生长情况（n=3）
菌种（浓度） | 平均阳性出现时间（h） |
配方一 配方二 配方三 配方四 配方五 配方六 配方七 |
浑浊 菌落 浑浊 菌落 浑浊 菌落 浑浊 菌落 浑浊 菌落 浑浊 菌落 浑浊 菌落 |
S.aureus(1.8 cfu/ml) E.coli(3.2 cfu/ml) P.aeruginosa(1.0 cfu/ml) H.influenzae(4.4cfu/ml) S.pneumoniae(2.0 cfu/ml) S.salivarius(2.0 cfu/ml) | 8 12 8 16 8 12 8 12 8 16 8 12 24 24 4 12 8 12 4 12 4 12 8 12 4 12 16 24 8 12 12 16 8 12 膨胀反应8 12 8 12 8 12 24 24 36 细 48 细 48 001ttt48 24 细 36 细 24 24 72 - 24 24 24 - 24 36 16 24 24 - 16 16 48 - 12 16 16 - 24 36 12 16 16 - 12 16 48 - |
| tvd ni Ti | 11 9 12 11 9 12 9 354.5 330.5 478.5 330.5 295 373 539 |
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经多样本秩和检验：H=13.72 > H0.05（6）=12.59，P<0.05.
表2 80份阳性标本中各种细菌的分布及阳性出现时间
菌种 株数 平均阳性时间（h） | 菌种 株数 平均阳性时间（h） |
革兰阴性杆菌：（28） 肠杆菌科： 大肠艾希菌 11 12 肺炎克雷伯氏菌 5 12 产酸克雷伯氏菌 1 16 甲型副伤寒沙门菌 2 12 伤寒沙门菌 1 24 都柏林沙门菌 1 12 假单胞菌属： 非液化莫拉菌 1 24 产碱假单胞菌 2 24 醋酸钙不动杆菌 1 16 其他G-b： 支气管鲍特氏菌 1 24 产酸巴斯德菌 1 16 碳酸噬胞菌 1 48 革兰阳性球菌： （36） 葡萄球菌属： 中间葡萄球菌 3 19 施氏葡萄球菌 2 20 腐生葡萄球菌 2 15 金黄葡萄球菌 3 15 头状葡萄球菌 1 18 里昂葡萄球菌 2 20 | 表皮葡萄球菌 1 24 模仿葡萄球菌 1 48 耳葡萄球菌 2 52 人葡萄球菌 1 48 链球菌属 牛链球菌 1 24 无乳链球菌 1 16 肺炎链球菌 6 16 草绿链球菌 3 16 肠球菌 空肠肠球菌 1 16 屎肠球菌 2（1例15h,1例4d） 微球菌属 西宫微球菌 2 72 藤黄微球菌 2 48 克氏微球菌 1 48 革兰阳性杆菌： （16） 产单核细胞李斯特菌 2 18 蜡样芽胞杆菌 2 12 干燥棒状杆菌 1 72 牛棒状杆菌 2 2011福建高考理综 24 库氏棒状杆菌 2 12 JK棒状杆菌 1 72 马红球菌 6 15（有1例72h） |
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高校化学工程学报
