支原体检测protocol +注意事项

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一、      支原体检测引物：

P2-1 TCGTAACAAGGTATCCCTAC

P2-2 GCATCCACCAAAAACTCT

INTER-P1 GTTCTTTGAAAACTGAAT

INTER-P2 GCATCCACCAAAAACTCT

P6-1 CACCATCTGTCACTCTGTTAAC

P6-2 GGAGCAAACAGGATTAGATAC

二、    支原体样品处理

1. 采集 200拉曼光谱分析ul 样品于 PCR 管中  (建议大家均使用 1.5ml 离心管采集样品)

2. 12000g 离心 5mins

3. 去上清，  30ulPBS 或者纯水重悬

4. 95°C 加热 10mins，冷却到 12°C

5. 8000g 离心 2mins

6. 上清作为样品备用

三、    体系设置

		10ul	50ul
Mix		5	25
引物	(上游)	0,3	1.5中国眼镜杂志
引物	(下游)	0.3	1.5
样品		1	5

3.4

17

ddH2O

四、      PCR 程序设置

P6电气石粉 引物：

95°C 预变性 5mins；

95°C 变性 30s；

多功能写字台55°C 退火 30s；

72 °C 延伸 30s；

72°C 充分延伸 10mins；

共 30 个循环。

体系相关：

1.  提前分装水，每管 400ul；用完即扔，勿用第二次

2.  提前分装前向+后向引物，每管30ul；尽量用完即扔，勿用第二次

1.  操作人员务必带口罩

2. 若多次大批量检测，应更换台子操作

3.  加样时，  远离空调或者关空调，减少人员流动

4.  加样时，手不要在体系上方来回经过

5.  加样时，每加完一排八连排，  及时扣上盖子

格宾加筋挡墙6.  Mix+水+引物混合物，勿暴露于空气中过久

7.  PCR 产物取出时，开盖轻柔，防止气溶胶产生。最好可以于上样前，将管盖上的液体稍 微离心下去。

8.   点样时，  应快速点样现代农业科技，防止气溶胶产生

9.  配制 PCR 混合液和处理样品、加样区分开  (加样旁边点酒精灯)。若有条件，则在照过 紫外的超净工作台上进行加样，避免上一次的支原体的污染。

本文发布于:2023-07-11 09:45:56，感谢您对本站的认可！

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