[我心中的那片绿地
摘 要]随着基因及基因疫苗的不断发展，质粒的需求量迅速增加。通过以pcDNA3为目的产物，考察了在其提取过程中硫酸铵和氯化钙的加入对pcDNA3收率的影响和对杂质的去除效果。实验发现：硫酸铵和氯化钙的加入都可以明显降低质粒提取液中蛋白质、RNA杂质的含量；但是氯化钙在降低蛋白质和RNA含量的同时也降低了质粒DNA的收率。硫酸铵是去除蛋白质、RNA杂质的良好试剂，同时能够保持较高的质粒DNA收率。当质粒提取液中硫酸铵浓度加入到2.5 M时，质粒的纯化因子可达到10.2，而收率在90% 以上。 [关键词]理论月刊基因 基因疫苗 质粒 纯化 硫酸铵 氯化钙
近些年来，随着基因工程、基因和基因疫苗的不断发展，质粒的需求量迅速增加。从菌体中得到质粒粗品的方法有煮沸法、碱裂解法、SDS裂解法等，其中碱裂解法是提取质粒最常用的方法。为了达到药用标准，要对质粒粗品进行进一步纯化，其中谱分离是纯化质粒的最有效方法。为了降低谱操作的负荷,，提高谱分离的效率，在谱操作之前往往要先 对质粒提取液进行初步的纯化，降低杂质的含量。原子核物理RNA 和蛋白质是质粒提取液中的两种主要的杂质。在常规的分子生物学实验中RNA 的去除，一般先用RNA l870酶对其进行降解，然后再采用一些方法去除降解后得到的核酸片段和核苷酸；而蛋白质的去除多采用酚和氯仿抽提的方法。但是，RNA 酶一般都来自动物体，而且价格较高，而酚和氯仿都是有毒的试剂。为了安全，在药用质粒的生产过程中上述试剂都是禁止使用的。另外，在质粒的提取过程中还经常用到其它的一些试剂，如聚乙二醇、硫酸铵、氯化钙等来降低RNA 和蛋白质等杂质的含量。由于本研究的后期工作拟采用疏水谱对质粒进行纯化，因此为了方便，本文中只考察硫酸铵、氯化钙两种试剂的对质粒提取液的除杂效果。
一、实验器材与方法
（一）菌种与质粒
实验菌种为含有pcDNA3质粒的E.coli DH5俄亥俄州菌株。pcDNA3为高拷贝质粒，其片段大小为推他网5.4 kb。
