(完整)辛酸硫酸铵纯化方法
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所需溶液配制:
1. 0。06mol/L pH=4.8醋酸盐缓冲液:无水醋酸钠0。29g,冰醋酸0.141mL,纯水定容至
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100mL。间硝基苯胺
2. 2mol/L氢氧化钠溶液:16g氢氧化钠固体用于200ml纯水中。
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3. 2mol/L盐酸溶液:取33m L36。4%的浓盐酸定容至200mL纯水中。
汤姆叔叔视频18以上观看4. 0.1mol/L PBS缓冲液:80.0 NaCl,KCl 2.0g,Na2HPO4· 12H2O 29。0g,KH2PO4 2。0g,
加超纯水定容至1L。
单克隆抗体采用辛酸-硫酸铵方法纯化,具体步骤如下:
(1)将腹水从-20°C冰箱拿出室温解冻。腹水用双层滤纸过滤,初步除去杂质、脂肪及细胞碎片。4°C,12000r/min,离心15min,收集上清,弃沉淀。精确定量腹水体积。 (2)一份体积的腹水与2—4份体积的醋酸盐缓冲液磁力搅拌混匀,用2mol/L HCL 调PH 至4.5—4。8。
(3)磁力搅拌下缓慢加入正辛酸,33μL/mL腹水,加完后室温磁力搅拌半小时,后置4°C静置2h以上。
(4)4°C ,12000r/min,离心5min,收集上清,双层滤纸过滤,收集滤液。梅山降糖神茶
(5)量取滤液体积,加入1/10体积的0.1M pH=7。4 的PBS,用2mol/L NaOH(记录NaOH 体积)调pH至7.4.
(6)将上清冰浴预冷,加硫酸铵固体至0.277g/mL,边加边搅拌,并于30min内加完,置4°C过夜。
石家庄焦化厂(7)12000r/min,离心15min,弃上清。用一定体积的0.01mol/LPBS溶解沉淀。用PB透析两天后换0。01mol/LPBS 透析两天。收集透析液,12000r/min,离心15min,取上清,置-20°C预冻后真空冻干成粉保存。
张道宏师版本:用1/10原腹水体积的0。01mol/L pH值7。4 PBS溶解沉淀;对0。01mol/L pH值7。4的PBS透析一天,离心去掉不溶杂质,用纯水进行透析,优球蛋白析出后离心收集澄清抗体溶液,置于-20°C预冻;冻干保存。