lgkg70IgM的纯化
大多数IgM类抗体是优球蛋白不溶于水，故可用双蒸水透析纯化IgM。对那些溶于水的IgM类抗体可用饱和硫酸铵沉淀。沉淀后可以采用颗粒排斥层析法(凝胶过滤)进一步纯化。 颗粒排斥层析(size-exclusion chromatography)法又称分子筛层析或凝胶过滤，是利用微孔凝胶分离不同大小分子的抗体，可用于样品中IgG和IgM的分离，常用于对硫酸铵粗提物的进一步纯化。通过该法纯化所得抗体可用于Ig分子片段的制备、FITC、生物素或同位素标记。
IgM类抗体最好用硼酸缓冲液进行透析并保存，有些IgM类抗体易从溶液中析出，实验中应密切观察。IgM为五聚体，反复冻溶可能会使五聚体打开成单体，影响抗体的功能，因此-70蓝田瑶族风情园℃保存时，加适量甘油，有助于保持抗体稳定。 湖南省校讯通PH4.2~4.5有利于非IgG成分沉淀(接近杂蛋白的等电点），如PH大于4.8，则白蛋白和AB球蛋白沉淀不完全。
一、材料和试剂
1. 抗血清，杂交瘤腹水或其上清，硫酸铵沉淀粗提γ球蛋白。
2. 含0.02%NaN3 的硼酸缓冲液，PBS。
3. 透析袋；26mm×900mm层析柱。
4. 适当筛孔的颗粒排斥(SE)凝胶(AcA Ultragel-或Sephacryl S-200(Pharmacia LKB)。
5. 蛋白透析、SE层析和SDS-PAGE所需的其他试剂和器材。
二、操作步骤角蜡蚧
贯彻落实会议精神汇报
1. 待提取样品11，000～13，000r/min(15，000～20，000×g)，4℃或室温离心，除沉淀。
2. 上清液对双蒸水透析4℃24h。
3. 11，000～15，000r/min 4℃ 或室温离心1h，留沉淀。
4. 制备SE凝胶层析柱，以硼酸缓冲液平衡。
5. 将步骤3沉淀或饱和硫酸铵粗提γ球蛋白以3～5ml硼酸缓冲液溶解，缓慢加样。
6. 以硼酸缓冲液洗脱蛋白质，并收集100管(每管为柱床体积的1%)，IgM在洗脱液的第一个蛋白峰。
特戊酰氯7. 收集Ig蛋白峰，分别合并，透析浓缩，紫外分光光度计OD 280nm测定Ig含量，SDS-PAGE鉴定IgM纯度。
8. 以1～20mg Ig/ml硼酸缓冲液置4℃或-70℃保存。
凝胶以硼酸缓冲液反复冲洗后，加入0.02%NaN3 置4℃保存可再次使用。
