硫酸铵沉淀法纯化蛋白的原理和操作及配比用表

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硫酸铵沉淀法纯化蛋⽩的原理和操作及配⽐⽤表
今天作的实验是利⽤硫酸铵沉淀蛋⽩质,从之前作过的经验知道,这⼀个步骤是有名的
烦,要慢慢⽤敲的把硫酸铵缓缓的加⼊蛋⽩质溶液中。
相关的原理可以在庄荣辉学习⽹站中到,与盐溶刚好相反,在蛋⽩质溶液中加⼊硫酸
铵,会使得蛋⽩质的溶解度下降,因⽽沉淀出来。因为硫酸铵所解离的离⼦容很⼤,所带的电
⼦数也多(NH4+, SO42-),因此当其溶⼊⽔中时,会吸引⼤量⽔分⼦与这些离⼦⽔合。
蛋⽩质分⼦表⾯多少有⼀些较不具极性的区域,⽔分⼦会在这些⾮极性区的表⾯聚集,形
她是我的朋友教学设计成类似『⽔笼』的构造(请见下图),以便把蛋⽩质溶⼊⽔中。⼀旦蛋⽩质溶液加⼊硫酸铵,后者
吸引了⼤量⽔分⼦,使⽔笼⽆法有效隔离蛋⽩质的⾮极性区,造成这些⾮极性区之间的吸引,
因⽽沉淀下来。因此,分⼦表⾯上若有越多的⾮极性区域,就越容易⽤硫酸铵沉淀下来。
在计算所添加的硫酸铵的重量⽅⾯,到了⼀个不错的⽹站——硫酸铵计算机
这个⽹页上可以靠着输⼊实验温度、溶液体积、想要到达的百分浓度以及初始的百分浓度
这四个数值,就可以得到需要添加的硫酸铵克数,以及在加⼊固体硫酸铵后所增加的体积,算段静莉
是⼀个很不错的⽹站。
此外另⼀个⽐较值得提的,是我有⽤两种⽅式加⼊硫酸铵,第⼀种是固体的硫酸铵模碎加
⼊,另⼀种是将硫酸铵溶成饱和溶液再加⼊,各有各的优缺点,⽐较如下:
1.造成蛋⽩质变质的程度:固体的硫酸铵>硫酸铵饱和溶液
利⽤硫酸铵饱和溶液真的超棒,滴⼊的速度可以很快⽽不造成变质(没试过⽤倒⼊的)。不像
固体的硫酸铵只能磨碎慢慢加⼊,速度⼀快蛋⽩质就坏了(溶液有致密的⽩⾊⽓泡产⽣)。
2.操作的容易度:硫酸铵饱和溶液>>固体的硫酸铵
固体硫酸铵最⼤的缺点就是操作不容易,要⼀直敲敲敲⼜不能太快,所以当你要溶解的蛋
⽩质很多时,这是很累的步骤。然⽽硫酸铵饱和溶液⽐较⿇烦只有在配制部分,要先加热让它
x抗体饱合后,回到操作温度让它过饱和,最后⽤滤纸把硫酸铵结晶去掉。
江南命案
3.蛋⽩质溶液的体积放⼤程度硫酸铵饱和溶液>>固体的硫酸铵
这是使⽤硫酸铵饱和溶液最头痛的部分,举例来说,要让100 ml的硫酸铵百分⽐从0%到
25%,如果是加⼊固体的硫酸铵,只会让溶液从100 ml变成107 ml左右,但若是加⼊硫酸铵饱
和溶液,会让溶液变成125 ml!⽽且若是要提⾼到50%,须加等量的硫酸铵饱和溶液,所以会
不用洗衣粉的洗衣机让蛋⽩质溶液从100 ml变成200 ml。
因此在加⼊硫酸铵时,若是低百分浓度可以利⽤硫酸铵饱和溶液,然⽽如果是⾼百分浓度
的,除⾮不在意蛋⽩质溶液体积的放⼤(反正都要离⼼离下来),否则还是⽤固体硫酸铵来的好。
所以今天从0%拉到25%及从25%拉到50%时,都是利⽤硫酸铵饱和溶液,但是当要从50%
拉到75%时,我选择利⽤固体硫酸铵,因为如果⽤硫酸铵饱和溶液,离⼼机⽆法离那么多的溶
液体积。
硫酸铵沉淀法纯化蛋⽩的原理和操作及配⽐⽤表 - Ox Liu - Ox Liu的博客
黄如论中学

本文发布于:2023-07-08 23:05:15,感谢您对本站的认可!

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