实验八 可乐、咖啡、茶叶中的高效液相谱分析
一、实验目的：
1 解反相谱的原理和应用
二、实验原理：
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又称，属黄嘌呤衍生物，化学名称1,3,7-三甲基黄嘌呤，可由茶叶或咖啡中提取而得的一种生物碱。它能兴奋大脑皮层，使人精神兴奋。咖啡中含1.2%－1.8％，茶叶约含2.0%－4.7％。可乐、APC药片中均含有。其分子式为C8H10O2N4咏箸，结构式：
样品在碱性条件下，用氯仿定量提取，采用反相液相谱柱进行分离，以紫外检测器进行检测，以标准系列溶液的谱峰面积对其浓度作工作曲线，再根据样品中的面积，由工作曲线算出浓度。 三、 实验仪器与药品
⑴仪器
LC-10A液相谱仪 C-R6A数据处理机 谱柱（EconosphereC18） 平头微量进样器
⑵药品
1 甲醇（谱纯） 双蒸水 氯仿（A.R） 1mol/LNaOH;NaCl(A.R.) Na2SO4(A.R.)
（A.R.） 可口可乐（1.25L瓶装） 雀巢咖啡 茶叶
②1000mg/L储备液 将在110℃下烘干1小时，准确称取0.1000g，用氯仿溶解，转移至100mL容量瓶中，定容至刻度。
四、实验步骤：
⑴ 谱条件：
柱温：室温
卡曼奇4流动相：甲醇／水＝60：40
流量：1.0mL/min
检测波长：275nm
⑵ 标准系列溶液配制：分别用吸量管吸取0.40、0.60、0.80、1.00、1.20、1.40mL储备液于六只容量瓶中，用氯仿定容至刻度，浓度分别为40、60、80、100、120、140mg/L
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⑶ 样品处理：
①将100mL可口可乐置于250mL烧杯中，剧烈搅拌30min或用超声波脱气5min，以赶净二氧化碳。
②准确称取咖啡0.25g，用水溶解定容至100mL。
③准确称取茶叶0.3g,加蒸馏水30mL煮沸10min，冷却后将清液转移至100mL容量瓶，并按此操作重复两次，定容至刻度。将3份样品溶液分别进行干过滤，弃去前过滤液，取后面的过滤液。
④分别取上述三份样品溶液25.0mL于125mL分液漏斗中，加饱和氯化钠溶液，溶液，然后用氯仿分三次萃取。将氯仿提取液分离后经装有无水硫酸钠小漏斗，过滤至容量瓶中，最后用少量氯仿多次洗涤小漏斗，定容至刻度。
⑷绘制工作曲线：待液相谱仪基线平直后，分别注入标准系列溶液10μl，重复两次，要求两次所得的谱峰面积基本一致，记下峰面积与保留时间。
⑸样品测定：分别注入样品溶液10μl，根据保留时间确定样品中谱峰的位置，重复两次，记下谱峰峰面积。
五、结果处理：
⑴根据标准系列溶液的谱图，绘制峰面积与其浓度的关系曲线。
⑵根据样品中谱峰的峰面积，由工作曲线计算可口可乐、咖啡、茶叶中含量（分别用mg/L、mg/g和mg/g表示）
六、注意事项：
⑴液体样品必须经过萃取处理，不能直接进样，虽然操作简单，但会影响谱柱的寿命。
⑵不同牌号的茶叶、咖啡中含量不大相同，称取样品可酌量增减。
⑶若样品和标准溶液需要保存，应置于冰箱。
⑷样品和标准的进样量要严格保持一致。
七、思考题：
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⑴用标准曲线法的优点是什么？
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⑵根据结构式，能用离子交换谱法分析吗？
⑶若标准曲线用浓度对峰高作图，能给出准确结果吗？与本实验的标准曲线相比何
者优越？为什么？
⑷在样品干过滤时、为什么要弃去前过滤液？这样做会不会影响实验结果？为什么？
