低剂量氢化可的松感染性休克时对外周血T淋巴细胞凋亡的影响及机制 梁周;叶迎民;田佳
【摘 要】目的 分析低剂量氢化可的松感染性休克时对外周血T淋巴细胞凋亡的影响及机制.方法 依据随机数字方法 将60例感染性休克患者分成组30例和对照组30例,其中,组给予低剂量氢化可的松;同时,另外选择同期30例脓毒血症患者作为脓毒血症组和30例健康体检者作为健康体检组.采集每组研究对象的外周血,选择流式细胞仪和Annexin V法对研究对象的T淋巴细胞亚凋亡情况进行检测,选择酶增敏免疫测定法对研究对象的白细胞介素-10(IL-10)进行测定,观察分析检测结果 .结果 组患者后的外周血CD4+亚淋巴细胞的凋亡显著高于对照组(P<0.05),组与对照组的CD8+亚凋亡比较差异无统计学意义.组、对照组、脓毒血症组的IL-10浓度显著高于健康体检组(P<0.05),组后的IL-10水平显著高于对照组(P<0.05).结论 低剂量氢化可的松感染性休克会显著增加血IL-10浓度水平和外周血CD4+T淋巴细胞凋亡,而IL-10水平上升则是诱导外周血CD4+T淋巴细胞凋亡增多的主要原因之一. 卡车司机的自述
【期刊名称】《当代医学》
【年(卷),期】2018(024)009
【总页数】4页(P40-43)
【关键词】低剂量;氢化可的松;感染性休克;外周血T淋巴细胞;凋亡
【作 者】梁周;叶迎民;田佳
【作者单位】昌江黎族自治县人民医院重症医学科,海南 昌江 572700;昌江黎族自治县人民医院重症医学科,海南 昌江 572700;海南省人民医院重症医学科,海南 海口 570311
【正文语种】中 文
感染性休克是临床中发病率较高且严重影响人类健康的危重疾病，其发病机制主要为致病因素激活炎症细胞，炎症细胞释放大量炎症因子而引起全身炎症反应，进而导致一系列继发性改变[1-2]。现阶段，临床应用低剂量氢化可的松感染性休克已经取得一定的疗效，该药物能抑制炎症因子的释放，有效减轻炎症反应[3-4]。临床研究发现感染性休克和脓毒血症均存在免疫细胞凋亡的现象，尤其是淋巴细胞的凋亡，研究结果显示淋巴细胞在
分化过程中有糖皮质激素的参与，糖皮质激素会诱导淋巴细胞凋亡，淋巴细胞凋亡和患者预后有直接关系。然而，现阶段有关低剂量氢化可的松感染性休克时对外周血淋巴细胞凋亡影响的研究报道却比较缺乏[5]。本研究主要分析低剂量氢化可的松感染性休克时对外周血T淋巴细胞凋亡的影响及机制，现做如下汇报。
1 资料与方法
1.1 临床资料 将海南省昌江黎族自治县人民医院重症医学科2015年1月～2017年1月住院的60例感染性休克患者按随机数字方法分成组30例和对照组30例，其中，组给予低剂量氢化可的松。组男16例，女14例，患者年龄27～90岁，平均年龄（71.1±2.1）岁；对照组男17例，女13例，患者年龄25～91岁，平均年龄（71.4±2.5）岁。同时，另外选择同期30例脓毒血症患者作为脓毒血症组和30例健康体检者作为健康体检组。其中，脓毒血症组男18例，女12例，平均年龄（68.1±2.4）岁；健康体检组男15例，女15例，平均年龄（66.4±2.5）岁。4组研究对象年龄、性别等临床资料比较差异无统计学意义。感染性休克和脓毒血症患者均满足相关诊断标准，并排除肿瘤患者、免疫系统疾病患者等。本研究遵循医学伦理原则开展临床研究，并经本院医学伦理相关部门的批准同意。
1.2 方法 感染性休克患者均给予常规抗感染和液体复苏等；组患者则在此基础上采用低剂量氢化可的松，用法如下：静脉推注氢化可的松，给药剂量为100 mg，每8小时1次；直至血流动力学保持稳定后适当减少给药剂量，直到停药，时间一般为5～7 d。
监测外周血T淋巴细胞凋亡：组患者、对照组患者、脓毒血症组患者，分别在确诊时、发病第1天、第2天、第3天和第7天时，分别采集患者3 ml外周血，并在采集后2小时内上机进行检测，具体步骤为：选择人淋巴细胞分离液对淋巴细胞进行分离，选择PBS对淋巴细胞进行洗涤，然后将其分别装在2个流式专用试管中，细胞数量调整为1×106个/ml，分别在两个流式专用试管中加入20 ml CD3PECY5/CD4PE和CD3PE-CY5/CD8PE。在室温下放置20 min进行避光孵育，选择PBS进行1次洗涤，弃上清，在沉淀中加入500 μl Annexin-V结合缓冲液，并加入5 μl Annexin-V，在室温下进行5 min的避光孵育，然后上机检测，应用BD CellQuest软件进行检测，分析结果。健康体检组同样在相同的时段，选择以上方法检测外周血T淋巴细胞凋亡情况。
测定细胞因子：组患者、对照组患者、脓毒血症组患者，分别在确诊时、发病第1天、
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第2天、第3天和第7天时采集血液样本，应用酶增敏免疫测定法进行血清白细胞介素-10（IL-10）的水平测定，选择美国Biosource公司的试剂盒，严格按照试剂盒说明书进行操作。对于健康体检组来讲，只对其基础状态下的细胞因子水平进行测定。
1.3 统计学方法 本次实验数据采用SPSS 17.0软件进行统计学分析，其中组间数据资料对比采用t检验，计数资料对比采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 低剂量氢化可的松对外周血T淋巴细胞凋亡的影响 组患者后的外周血CD4+T淋巴细胞亚的凋亡显著高于对照组（P＜0.05），组与对照组的CD8+T淋巴细胞亚凋亡比较差异无统计学意义，见表1。
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2.2 IL-10变化情况 组、对照组、脓毒血症组的IL-10浓度显著高于健康体检组（P＜0.05），组后的IL-10浓度水平显著高于对照组（P＜0.05），见表2。
3 讨论
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当发生感染性休克时，机体免疫系统会出现显著改变；当机体受到比较严重的打击后可引起免疫系统出现应激反应，大量释放炎性介质，以增强抗炎效果。除此之外，机体为了避免受到进一步的打击，会出现代偿性抗炎反应，促使机体释放抗炎因子，从而降低机体的免疫功能[6-7]。有临床研究结果显示[8]，脓毒血症可导致免疫细胞出现凋亡，且严重影响患者的预后康复效果。现阶段，关于脓毒血症引起淋巴细胞凋亡的具体原因尚未明确，但推测认为细胞因子可能在炎症反应中发挥了重要的作用。有学者[9]通过利用内毒素诱导动物制作的模型分析探讨内毒素在淋巴细胞凋亡中的作用，结果显示存在淋巴细胞凋亡，体外实验的研究结果也显示[10]，内毒素会诱导淋巴细胞凋亡，而且CD4+T淋巴细胞亚的反应更加显著。也有临床研究发现，部分细胞因子参与淋巴细胞的凋亡。本研究通过测定感染性休克患者的部分细胞因子，结果显示，组、对照组、脓毒血症组的IL-10浓度显著高于健康体检组（P＜0.05）。分析认为：IL-10的生物学活性主要是免疫抑制，能抑制TH1细胞的增殖和抑制细胞因子的合成。当机体发生感染时，IL-10呈现出高表达，从而降低机体的防御功能。
表1 低剂量氢化可的松对外周血T淋巴细胞凋亡情况（）Table 1 Low-dose hydrocortisone treatment of peripheral blood T lymphocyte apoptosis()注：与对照组相比，龚曲此里
aP＜0.05时间0 h 24 h 48 h 72 h 168 h组别对照组（n=30）组（n=30）对照组（n=30）组（n=30）对照组（n=30）组（n=30）对照组（n=30）组（n=30）对照组（n=30）组（n=30）CD4+T淋巴细胞（%）110.32±4.48 13.84±8.05 13.53±6.83 17.36±7.15a 19.37±6.61 22.63±5.62a 15.31±6.17 25.71±6.87a 5.62±4.56 6.82±6.77 CD8+T淋巴细胞（%）12.06±19.64 12.22±20.58 13.26±16.57 13.47±11.86 14.72±10.37 15.34±18.15 13.47±11.71 13.66±16.82 13.34±19.67 13.86±13.26
表2 IL-10变化情况（,pg/ml）Table 2 The Change of IL-10(,pg/ml）注：与健康体检组相比，aP＜0.05；与对照组相比，bP＜0.05组别健康体检组（n=30）脓毒血症组（n=30）对照组（n=30）组（n=30）0 h 6.36±2.47 7.65±4.86a 15.03±5.33a 15.46±10.02a 24 h 6.39±2.51 13.61±6.06a 20.45±6.22a 29.43±22.64ab 48 h 6.42±2.45 18.62±13.03a 30.16±16.64a 40.64±24.21ab 72 h 6.41±2.48 17.71±5.06a 23.34±15.06a 42.36±29.64ab 168 h 6.37±2.43 9.92±4.75a 11.26±9.83a 15.03±6.36ab
