(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201611072956.8
(22)申请日 2016.11.29
地址 321017 浙江省金华市婺城区宾虹路
二段298号308室
(72)发明人 沈建军 张秀文 李阳
(74)专利代理机构 杭州浙科专利事务所(普通
合伙) 33213
代理人 沈渊琪
(51)Int.Cl.
A61K 39/39(2006.01)
A61K 39/12(2006.01)
A61K 47/36(2006.01)
A61K 47/26(2006.01)
A61K 47/18(2006.01)
A61K 47/22(2006.01)A61K 9/08(2006.01)A61P 31/22(2006.01)
(54)发明名称
(57)摘要
本发明属于兽用生物制品技术领域，具体涉
及一种猪伪狂犬活疫苗用稀释液，每1000ml PH=
毛小平近况多糖60-80mg、芍药苷20-40mg、L-谷氨酸钠0.5-
1g和酚红5-10mg。本发明所提供的稀释液可有效
增强猪伪狂犬活疫苗的免疫效果，延长疫苗保护
期。权利要求书1页 说明书4页CN 106729699 A 2017.05.31
C N 106729699
A
1.一种猪伪狂犬活疫苗用稀释液，其特征在于每1000ml PH=7的磷酸盐缓冲液中包含：肉苁蓉多糖1-5g、香菇多糖60-80mg、芍药苷20-40mg、L-谷氨酸钠0.5-1g和酚红5-10mg。
2.根据权利要求1所述的一种猪伪狂犬活疫苗用稀释液，其特征在于每1000ml PH=7的磷酸盐缓冲液中包含：肉苁蓉多糖2-4g、香菇多糖65-75mg、芍药苷25-35mg、L-谷氨酸钠0.6-8g和酚红6-8mg。
3.根据权利要求1所述的一种猪伪狂犬活疫苗用稀释液，其特征在于每1000ml PH=7的磷酸盐缓冲液中包含：肉苁蓉多糖3g、香菇多糖70mg、芍药苷30mg、L-谷氨酸钠0.75g和酚红
7.5mg。
4.根据权利要求1或2或3所述的一种猪伪狂犬活疫苗用稀释液，其特征在于所述肉苁蓉多糖的制备包括以下步骤：将肉苁蓉粉末按1：20-30料液比，加入至0.5%吐温水溶液，在超声功率400-600W、温度40-60℃条件下超声处理25-40min，抽滤，将所得滤液进行真空浓缩，经乙醇沉淀法处理后即可得肉苁蓉多糖。
5.根据权利要求1或2或3所述的一种猪伪狂犬活疫苗用稀释液，其特征在于所述香菇多糖的制备包括以下步骤：
（1）将新鲜香菇子实体除杂后于60℃条件下烘干至恒重，以24000r/min粉碎1-2min后过40目筛，得香菇粉末；
（2）称取步骤（1）中所得香菇粉末并按30-45：1的液料比加入注射用水，混合均匀，在800-950W功率下微波提取7-10min，抽滤，收集滤液；
（3）重复步骤（2）2-3次，收集滤液；
（4）将步骤（2）和（3）中所得滤液混合，真空浓缩，经乙醇沉淀法处理后即得香菇多糖。
6.根据权利要求1或2或3所述的一种猪伪狂犬活疫苗用稀释液，其特征在于所述pH=7的磷酸盐缓冲液的制备方法如下：
a．称取下列原料组分：氯化钠6-10g、氯化钾0.05-0.5g、磷酸氢二钠1-1.2g、磷酸二氢钾0.05-0.5g、氯化钙0.05-0.2g和六水氯化镁0.05-0.2g，混合均匀备用；
b．向步骤a中所得原料组分的混合物中加入1000mL的双蒸水，充分溶解后，在116℃条件下高压灭菌30min，即得pH=7的磷酸盐缓冲液。
权 利 要 求 书1/1页CN 106729699 A
一种猪伪狂犬活疫苗用稀释液
技术领域
[0001]本发明属于兽用生物制品技术领域，具体涉及一种猪伪狂犬活疫苗用稀释液。
背景技术
[0002]伪狂犬病毒（Pseudorabies virus, PRV）属于疱疹病毒（Herpesviridae）α疱疹病毒亚科（Alphaher-pesririnae）水痘病毒属（Varicello virus）的疱疹病毒亚科Ⅰ型（Porcine herpesvirus Typel）。猪既是伪狂犬病毒的贮存者，也是伪狂犬病毒的传染源，控制猪伪狂犬病不仅对养猪事业本身，而且对其它动物养殖的顺利发展也有着十分重要的意义。在欧美等发达国家，得利于PRV基因缺失活苗和相应鉴别方法的应用，该病得到控制或根除，但在发展中国家，该病仍频繁发生，严重制约了这些国家和地区养猪业的健康发展。
[0003]目前为预防和控制猪伪狂犬病，我国已开发出了多种猪伪狂犬病疫苗，但针对疫苗稀释液研究甚少，现有的疫苗稀释液免疫效果不够理想，且疫苗保护期较短。
发明内容
[0004]为了弥补现有技术的不足，本发明所要解决的技术问题是提供一种猪伪狂犬活疫苗用稀释液，该稀释液可有效增强疫苗的免疫效果，延长疫苗保护期。
[0005]为解决上述技术问题，本发明每1000ml PH=7的磷酸盐缓冲液中包含：肉苁蓉多糖1-5g、香菇多糖60-80mg、芍药苷20-40mg、L-谷氨酸钠0.5-1g和酚红5-10mg。
[0006]进一步的，本发明每1000ml PH=7的磷酸盐缓冲液中包含：肉苁蓉多糖2-4g、香菇多糖65-75mg、芍药苷25-35mg、L-谷氨酸钠0.6-8g和酚红6-8mg。
[0007]进一步的，本发明每1000ml PH=7的磷酸盐缓冲液中包含：肉苁蓉多糖3g、香菇多糖70mg、芍药苷30mg、L-谷氨酸钠0.75g和酚红7.5mg。
[0008]其中，本发明所述肉苁蓉多糖的制备包括以下步骤：将肉苁蓉粉末按1：20-30料液比，加入至0.5%吐温水溶液，在超声功率400-600W、温度40-60℃条件下超声处理25-40min，抽滤，将所得滤液进行真空浓缩，经乙醇沉淀法处理后即可得肉苁蓉多糖。
[0009]其中，本发明所述香菇多糖的制备包括以下步骤：
（1）将新鲜香菇子实体除杂后于60℃条件下烘干至恒重，以24000r/min粉碎1-2min后过40目筛，得香菇粉末；
（2）称取步骤（1）中所得香菇粉末并按30-45:1的液料比加入注射用水，混合均匀，在800-950W功率下微波提取7-10min，抽滤，收集滤液；
（3）重复步骤（2）2-3次，收集滤液；
（4）将步骤（2）和（3）中所得滤液混合，真空浓缩，经乙醇沉淀法处理后即得香菇多糖。[0010]其中，本发明所述pH=7的磷酸盐缓冲液的制备方法如下：
a．称取下列原料组分：氯化钠6-10g、氯化钾0.05-0.5g、磷酸氢二钠1-1.2g、磷酸二氢钾0.05-0.5g、氯化钙0.05-0.2g和六水氯化镁0.05-0.2g，混合均匀备用；
b．向步骤a中所得原料组分的混合物中加入1000mL的双蒸水，充分溶解后，在116℃条件下高压灭菌30min，即得pH=7的磷酸盐缓冲液。
[0011]本发明中芍药苷购买于百灵威科技有限公司。
电子商城[0012]本发明的有益效果：
1、本发明所制备的一种猪伪狂犬活疫苗用稀释液可以提前产生抗体，降低免疫空白期，还能延长疫苗保护期，进而提高猪的免疫效果。
[0013]2、本发明所制备的一种猪伪狂犬活疫苗用稀释液具有易生产、成本低廉、使用方便等特点。
具体实施方式
[0014]下面结合具体实施例对本发明作进一步具体说明。本发明中所述实施例仅用于说明解释本发明而不对本发明的范围构成限制。
[0015]实施例1:
1、制备肉苁蓉多糖，包括以下步骤：
将肉苁蓉粉末按1：20料液比，加入至0.5%吐温水溶液，在超声功率400W、温度40℃条件下超声处理25min，抽滤，将所得滤液进行真空浓缩，经乙醇沉淀法处理后即可得肉苁蓉多糖。
[0016]2、制备香菇多糖，包括以下步骤：
（1）将新鲜香菇子实体除杂后于60℃条件下烘干至恒重，以24000r/min粉碎1-2min后过40目筛，得香菇粉末；
（2）称取步骤（1）中所得香菇粉末并按30：1的液料比加入注射用水，混合均匀，在800W 功率下微波提取7-10min，抽滤，收集滤液；
（3）重复步骤（2）2-3次，收集滤液；
（4）将步骤（2）和（3）中所得滤液混合，真空浓缩，经乙醇沉淀法处理后即得香菇多糖。[0017]3、配制pH=7的磷酸盐缓冲液：
a．称取下列原料组分：氯化钠6g、氯化钾0.05g、磷酸氢二钠1g、磷酸二氢钾0.05g、氯化钙0.05g和六水氯化镁0.05g，混合均匀备用；
b．向步骤a中所得原料组分的混合物中加入1000mL的双蒸水，充分溶解后，在116℃条件下高压灭菌30min，即得pH=7的磷酸盐缓冲液。
[0018]4、制备稀释液
A．称取原料组分：肉苁蓉多糖1g、香菇多糖60mg、芍药苷40mg、L-谷氨酸钠0.5g和酚红5mg。
美国法国[0019]B．将步骤A中所称取的中药多糖组分依次加入1000ml pH=7的磷酸盐缓冲液中，振荡水化，过滤除菌，即得猪伪狂犬活疫苗用稀释液。
[0020]实施例2：
1、制备肉苁蓉多糖，包括以下步骤：
将肉苁蓉粉末按1：25料液比，加入至0.5%吐温水溶液，在超声功率500W、温度50℃条件下超声处理30min，抽滤，将所得滤液进行真空浓缩，经乙醇沉淀法处理后即可得肉苁蓉多糖。
[0021]2、制备香菇多糖，包括以下步骤：
（1）将新鲜香菇子实体除杂后于60℃条件下烘干至恒重，以24000r/min粉碎1-2min后过40目筛，得香菇粉末；
（2）称取步骤（1）中所得香菇粉末并按38：1的液料比加入注射用水，混合均匀，在880W 功率下微波提取7-10min，抽滤，收集滤液；
（3）重复步骤（2）2-3次，收集滤液；
（4）将步骤（2）和（3）中所得滤液混合，真空浓缩，经乙醇沉淀法处理后即得香菇多糖。[0022]3、配制pH=7的磷酸盐缓冲液：
a．称取下列原料组分：氯化钠10g、氯化钾0.5g、磷酸氢二钠1.2g、磷酸二氢钾0.5g、氯化钙0.2g和六水氯化镁0.2g，混合均匀备用；
b．向步骤a中所得原料组分的混合物中加入1000mL的双蒸水，充分溶解后，在116℃条件下高压灭菌30min，即得pH=7的磷酸盐缓冲液。
聚氨酯薄膜[0023]4、制备稀释液
A．称取原料组分：肉苁蓉多糖3g、香菇多糖70mg、芍药苷30mg、L-谷氨酸钠0.75g和酚红7.5mg。
[0024]B．将步骤A中所称取的原料组分依次加入1000ml pH=7的磷酸盐缓冲液中，振荡水化，过滤除菌，即得猪伪狂犬活疫苗用稀释液。
[0025]实施例3：
1、制备肉苁蓉多糖，包括以下步骤：
将肉苁蓉粉末按1： 30料液比，加入至0.5%吐温水溶液，在超声功率600W、温度60℃条件下超声处理40min，抽滤，将所得滤液进行真空浓缩，经乙醇沉淀法处理后即可得肉苁蓉多糖。
[0026]2、制备香菇多糖，包括以下步骤：
（1）将新鲜香菇子实体除杂后于60℃条件下烘干至恒重，以24000r/min粉碎1-2min后过40目筛，得香菇粉末；
（2）称取步骤（1）中所得香菇粉末并按45：1的液料比加入注射用水，混合均匀，在950W 功率下微波提取7-10min，抽滤，收集滤液；
（3）重复步骤（2）2-3次，收集滤液；
（4）将步骤（2）和（3）中所得滤液混合，真空浓缩，经乙醇沉淀法处理后即得香菇多糖。[0027]3、配制pH=7的磷酸盐缓冲液：
a．称取下列原料组分：氯化钠8g、氯化钾0.35g、磷酸氢二钠1.1g、磷酸二氢钾0.25g、氯化钙0.12g和六水氯化镁0.15g，混合均匀备用；
b．向步骤a中所得原料组分的混合物中加入1000mL的双蒸水，充分溶解后，在116℃条件下高压灭菌30min，即得pH=7的磷酸盐缓冲液。寒潮的预防
[0028]4、制备稀释液灰度图
A．称取原料组分：肉苁蓉多糖5g、香菇多糖80mg、芍药苷20mg、L-谷氨酸钠1g和酚红10mg。
[0029]B．将步骤A中所称取的原料组分依次加入1000ml pH=7的磷酸盐缓冲液中，振荡水化，过滤除菌，即得猪伪狂犬活疫苗用稀释液。
