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2020.01·化利用的技术模式、经验做法，切实增强畜禽养殖场的主体责任意识和绿发展意识。3.2 强化技术支撑，促进畜禽粪污资源化利用
按照源头减量化、过程无害化控制、末端资源化利用等原则，应用节约用水、固液分离、雨污分离、浓稀分离、堆肥发酵、生物菌种快速发酵等手段对畜禽粪污进行资源化利用。畜禽粪污通过好氧和厌氧的微生物处理方法，最终以还田利用（粪便堆肥还田和污水无害化处理后还田）、循环利用（粪便处理后用作牛床垫料、污水处理后回冲圈舍）等主要方式[2] ，做为畜禽粪污资源化利用最终途径，切实解决全县以规模奶牛养殖场为主的畜禽粪污资源化利用技术。
EJ-2003.3 强化技术指导，确保技术措施落实到位
根据不同资源条件、畜种、规模，推广粪污全量收集还田利用、专业化能源利用、固体粪便肥料化利用、粪便垫料回用、污水肥料化利用、污水达标排放等经济实用技术模式[3]。多次开展畜禽粪污资源化利用培训及观摩，为全县规模养殖场粪污资源化利用工作开展打下坚实的基础。
3.4 完善畜禽养殖污染线上线下长效机制
不断加强畜禽养殖污染在线监控体系建设，从目前的养殖情况分析，仍有规模养殖场设备监控不在线的情况。各乡镇（街道）要进一步完善线上监控、线下巡查制度，夯实主体责任，及时排查监控设备运行情况，确保监控设备运行正常。对监控设备不在线、维修不及时的情况要及时督查养殖场主进行整改。对省、市、县抽查监控设备不
在线的，将予以通报。
3.5 加强农牧对接指导，推进粪污高水平资源化利用
依照《柳河县畜禽养殖废弃物高水平资源化利用工作方案》，健全排泄物资源化利用档案，进一步建立完善配套生态消纳土地和沼液配送体系建设，积极引导畜牧业主体与种植业主体“点、量、时”有效对接，切实落实畜禽粪污生态消纳地，加快推进农牧对接的绿循环体建设，把畜禽养殖废弃物高水平资源化利用做深做实。
4 结束语
不合理的集约化规模化畜禽养殖产业发展中，对周围生态环境造成严重破坏和严重污染。畜禽粪便作为一种放错了位置的资源，通过采取有效方式将其妥善利用，能让其发挥出更大的价值。因此，需要
我国的农业部门、科研部门及畜禽养殖户采取有效措施对畜禽粪便进行综合的利用，以更好地解决畜禽粪便对环境造成的污染，同时也能发挥畜禽粪便的利用价值，更好地推动畜牧养殖产业和农业生产有效对接，提高资源循环利用效率。
参考文献
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业，2018，14（7）：12-13．
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[3] 杨素红．畜牧养殖环境污染的原因及有效对策分析[J]．吉林
畜牧兽医，2019，40（9）：133，135．
0 引言
随着我国生物研究领域不断深入推进，通过应用一系列的生物技术手段，已设计和研制出多种生物制
品。在兽用疫苗研制中主要包括上游和下游研制生产2个阶段。上游生产主要是应用微生物技术手段研制目标产物。下游生产主要是对目标产物的液料进行进一步的处理、浓缩和纯 化，保证生产的兽用疫苗达到国家要求。近年随着我国生物研究领域的不断加快，各项先进技术和设备的成熟推广应用，生物制品上游技术已经趋于成熟和完善，而下游兽用疫苗的抗原分离纯化技术还有待进一步加强，发展相对比较滞后。由于兽用疫苗的上游生产和下游生产不能很好的衔接，很多生物制品在实验室阶段已取得成功，却不能实现规模化推广应用。为确保兽用疫苗质量和免疫效果，需要重点加强兽用疫苗抗原分离纯化技术研究。 1 兽用疫苗生产存在的问题
虽然国内很多大型的疫苗生产企业，企业间国内外先
作者简介：张秀锋（1979-），女，山东菏泽人，大专，研究方向：生物制品研发。
兽用疫苗抗原分离纯化技术
张秀锋
（广东永顺生物制药股份有限公司，广州 511356）
摘要：疫苗免疫接种是防范多种动物疫苗传播流行的最经济节约的手段和方法。为更好地防范动物疫病传播流行，需要不断加强兽用疫苗的研究，结合不同类型的抗原剂，生产出不同类型的疫苗，保障疫苗免疫的针对性，降低动物疫病的发病率。但由于疫苗生产是一项技术要求很高且系统性的工作，需要重点做好疫苗生产的各个环节把控，尤其是应严格控制兽用疫苗抗原质量。通过选择合理的抗原分离纯化技术，能保障生产的疫苗质量过硬，起到应有的免疫效果。该文首先分析了我国兽用疫苗生产存在的问题，然后分析了几种兽用疫苗抗原分离纯化技术。关键词：兽用疫苗；抗原分离；纯化技术
中图分类号：S852.4 文献标识码：B doi：10.3969/j.issn.2096-3637.2020.01.016
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·2020.01
进的生产技术和生产经验，使我国兽用疫苗产业得到不同程度的发展，但仍然存在生产技术落后、管理模式落后、基础生产较为薄弱、生产条件不高的现象。虽然国内生产的疫苗产品种类有所增加，但普遍存在疫苗质量不高，种类结构不合理，同质化严重，科技创新能力不足的问题，疫苗生产企业一
直停滞不前。不注重对新工艺新方法的研究和开发，导致企业生产的生物制品不能很好地满足畜牧养殖对高品质疫苗的需求，生产的产品整体稳定性较差，质量较低，其他蛋白质的含量较高，抗原性较差，接种到动物体内后，不能诱导机体产生充足的抗体，疫苗保护能力不强。需要我国企业不断加强疫苗产业结构调整，对下游疫苗生产技术和工艺进行有效的优化，以保证兽用疫苗的抗原含量，降低各种杂蛋白的含量。 2 抗原分离纯化技术
兽用疫苗通常是一种特异性的免疫蛋白，不同的兽用疫苗在蛋白质组成成分、物理性状、化学性质、生物性状等方面存在很大差异性，在下游纯化生产中需要的分离纯化方法也存在很大差异。在分离纯化方法选择前，应对目标蛋白的性状进行全面的掌握，并以此为基础构建合理的的分离方法、纯化步骤，并按照相关步骤稳定推进。2.1 前期处理
在兽用疫苗生产制中，分离纯化蛋白的前提是应该将其从原组织细胞当中充分释放出来，并保证特异性蛋白应有的活性。根据目标原料的性质不同，采用的处理工艺存在很大差异性。经常使用到的前期处理方法包括机械破损法、渗透破碎法、反复溶洞法、超声波震荡法、研磨高压挤压和酶处理等方法。通过选择适宜的方法，能获取相应的目标蛋白。2.2 分离纯化技术
2.2.1 根据目标带分子大小不同选择不同的分离纯化技术
蛋白质是由多种氨基酸组成的一类重要的生物大分子，在目标蛋白分离纯化中，蛋白质的分子大小与所使用的分离纯化技术有很大联系。在分离纯化中经常应用到的技术主要包括透析分离技术、超滤分离密技术、密度梯度离心和凝胶过滤等。
首先，透析过滤分离是目标蛋白分离纯化中最常用的方法。它主要是将相应的混合液体放入半透膜中，透过透析作用分离得到目标蛋白，将其他的杂物隔离出去；其次，超滤分离技术。超滤分离技术是一种压膜分离技术，通过在外部压力的作用之下，使混合物中的小分子溶质和溶剂通过一定的孔径被分离出去，使大分子蛋白不容易出去，最终剩下大分子蛋白，实现目标蛋白的纯化。在进行猪口蹄疫二价灭活疫苗制备中，该种方法应用最为常见，它能有效降低疫苗所产生的副反应。另外，在伪狂犬疫苗目标蛋白分离中也可应用该项技术，他能极大去除混合物当中的杂蛋白，提高目标蛋白纯度[1]；其次，密度梯度离心分离技术。它主要是利用离心处理技术，在离心管内能形成一个连续或不连续的密度梯度，将相应的蛋白混合液进行离心处理，使其更好的分层分离[2]；最后，凝胶过滤分离技术，又被称为分子排阻层析。它主要是利用某些凝胶，对不同分子大小的蛋白质具有一定的阻滞作用，实现对目标蛋白的有效分离和纯化。该项技术在兽用疫苗生产过程中应用不是很多，主要应用在人类疫苗目标蛋白分离纯化。
2.2.2 根据目标蛋白溶解度不同选择分离纯化方法
北大院长面试学霸
在目标蛋白分离纯化中，影响蛋白溶解度的因素多种多样，如混合溶液pH 值、混合溶液各个离子的强度、介电强数和温度等。在同一个条件下，不同抗原蛋白结构的溶解度存在很大差异性，结合不同抗原蛋白的结构差异，适当改变某些条件能加速特定蛋白的分离和纯化。常用的方法主要包括等电沉淀法、调节pH 值、蛋白质盐溶和盐稀、有机溶剂沉淀法等。其中第1种方法和第2种方法是兽用疫苗抗原分离纯化中经常使用到的方法。第3种方法在应用中，还需要另外采用透析或者凝胶过滤的方法将目标蛋白中的中性盐去除。在常温条件下，最后一种方法很容易造成有机溶剂变质，因此对生产条件要求较高，需要将有机溶剂进行冷却处理，并且要在不断加入中搅拌溶剂，防止出现变性。
2.2.3 根据目标蛋白特异性亲和力进行分离纯化
诺贝尔生理医学奖目标蛋白具有专一性特征，它能识别某些特异性分子。通过利用目标蛋白的这一特异性特征，可以构建一种分离生物大分子的层析方法。该种方法只需要进行一步处理就能得到纯度相对较高的目标蛋白。近年亲和力层析技术在靶标蛋白生产中应用较为广泛，特别是在融合蛋白的分离纯化方面，因为融合蛋白具有特异性强的能力，应用更加方便[3]。
2.2.4 根据目标蛋白吸附性进行分离纯化
疏水层析利用固定相载体上偶联的疏水性培基与流动相中的一些疏水分子发生可逆性结合，实现对目标蛋白的有效分离。该种分离纯化方法往往适用于蛋白质的初步分离，分离出来的目标蛋白还需要进
行进一步的提纯处理。
3 结束语
在兽用疫苗抗原分离纯化中，很难使用单一的技术实现对目标蛋白的有效分离和纯化，需要将几种方法进行有效的综合应用，才能分离出相应的目标蛋白。因此在实际生产中，仍然需要不断加强研究和总结。通过将多种技术进行妥善的匹配和组合，进一步提高疫苗产品的纯度和回收率。在充分考虑提纯条件和使用方法的基础上，在疫苗纯度和回收率2方面进行适当的选择，保证生产的疫苗质量过硬，符合免疫接种要求。
参考文献
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