露煎盥。
刘剑
(广东肇庆星湖生物科技股份有限公司，广东肇庆526070)
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睛要】论述了PH值对鸟苷发酵的影响。采用摇瓶和Fus50全自动控帝l发酵罐，以枯草芽孢杆菌B aciⅡl l s subdl i sA066为供试茵株，在不同pH条件下研究鸟苷发酵工艺，经过优化pH控制可使鸟苷产率由原来生产最高水平20卯左右提高到30∥l，比原来提高了109／l，过程稳定并能够重复多批次。从而大幅度降低生产成本和提高了设备使罔效率。 布谷鸟2012
瞎；键词】pH值；鸟苷；发酵
鸟苷作为一个多用途的核苷，是无环鸟苷(A c yc l ovi r】、三氨唑核苷(A T C)、三磷酸乌苷钠(G T P)和食品增鲜剂5’一鸟苷酸二钠(G M P)的合成原料，也可以用于合成一些核苷类抗病毒药物如利巴韦林、阿昔洛韦等，在食品和医药工业中起着不可估量的作用。目前，国内仅有三氨唑核苷具有规模性生产能力，而无环乌苷和5’一鸟苷酸主要依赖进口。随着更多的企业进入生产三氦唑核苷、无环鸟苷、5’一鸟苷酸和呈味核苷酸二钠(I加G)的行列，国内鸟苷的市场需求开始逐年增长。在已具有的鸟苷生产菌株和提
取工艺技术基础上，进一步选育菌种，提高发酵产鸟苷能力，完善生产工艺，提高后提取收率，刚氏生产成本，并推广使用，必将产生巨大的经济效益。．在鸟苷发酵研究中，环境pH对鸟苷发酵有较大影响。为了弄请pH与产苷之间的关系，对其进行了较详细的研究o
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1材料及方法
1．1茵种
星湖生燃股份有限公司鸟苷生产菌株BaciIIussubtilisA066
1)种子培养基。葡萄糖05％；氯化钠o．5％i酵母膏1％；蛋白胨1％；腺嘌呤25m g／m l o
小叶黑柴胡2)发酵培养基。A生产培养基：葡萄糖10％：酵母粉1％；酵母膏0．50／0；泡敌02％：硫酸镁0．50／0；磷酸二氢钾o-5％i硫酸锰o．02鲫：氯化钾02％；硫酸铵1％。B．改良培养基：酵母粉2％：葡萄糖14％；泡敌i02％：硫酸镁05％；磷酸二氢钾0．5％；硫酸锰0029，I；氯化钾02％；确酸铵1％。
1．3培黼
1)摇瓶培养。在500m l三角瓶中进行摇瓶试验，装量为30m l，温度37a C，发酵时间50hro
2)发酵罐培养。采用上海国佳生化工程研究中心FU S50L自控发酵罐进行发酵培养，培养温度37℃，发酵时间52—60小时。
1．4测定方法
1)鸟苷含量的测定。纸层析法；a样液处理：将待测样品摇匀后，按一定比例稀释，取约10m l样到试管内，于沸水中水浴10分钟。b．离心：台式离心机3500转／分，离心5分钟，取上清液于沸水中水浴5分钟i c点样：取建好的滤纸平放于干净的台面上，迅速吸取水浴好的上清液20u l，点于滤纸下发的，用风筒吹干：d．展层：点样的滤纸条与做空白对照的滤纸条一起放^展开剂(浓氨水：水--1：4)，纸条下端的2-3c m浸没在展层剂中，到展层剂上行到力滤纸上端1c m处，取出，吹干后放入6d℃烘箱烘干；e．观察斑点：用浓盐酸的烟雾熏经过展层烘干的纸层，然后在紫外分析仪254nm下观察，用铅笔划出蓝紫斑点：f．洗脱：剪下划出含有鸟苷的滤纸，并剪下空白对照中的同样大小的一块，分别剪碎后，置于18×180m m规格的试管中，各加入10m l O．1N的N aO H溶液做空白，于紫外分光计上260n m处测得A 值：g含量计算：鸟苷含量(g，1)=A X l2．5327X稀释倍数。2)葡萄糖的测定甲乙液法。3)pH测定梅特勒精密p H电极。
2结果及讨论人均国民收入
2．1摇搬发酵试验
1)国内—般采用枯草杆菌生产鸟苷，比如广东肇庆星湖生物科技股份有限公司的菌种Bac i l l uss ubt i l i sA066，pH还是首次进行专项研究。摇瓶因为不能自控pH，因此采用不同的初始口H进行摇瓶发酵，在37℃恒温培养，7cm冲程摇床转速设定为120r pm，m．n，装量为50m l／500m l瓶，摇瓶发酵结果如下：
试验编号123456
初始pH7．87．57．26．96．66．3
放瓶时间hr505050505050放瓶pH6．135．995．775．55．5l5．49
初葡萄糖％14中国同学录5460
残葡萄糖％3．22．7O．953．96．27．1
产苷率g／l18．1l19．4321．4616．379．106．27
2)pH对产苷的影响。广东肇庆星湖生物科技股份有限公司是国内首家乌苷生产企业，引进其鸟苷生产
菌种时用pH7．5进行鸟苷发酵合成，培养过程中也没有刻意区分pH范围。通过研究，依据上述摇瓶试验数据：在摇瓶pH72条件下，该鸟苷生产菌可以发挥较高的产苷能力，比原工艺最高水平要高出60％，应用于生产将使成本得到大幅降低，大幅提高设备利用率。虽然pH6．9有利于鸟苷酶系的合成及维持活性，但实际试验中产苷不高。
22全自控发酵罐试验
1)采用上海国佳生化工程研究中心F U S50L自控发酵罐进行发酵培养，全过程培养温度37℃，根据搅拌速率和进气量控制溶氧20％以上，全过程用复水调节pH，结果汇总见表二
表二
试验条件结果
产率
序号过程中pH的控制培养基条件周期hr
g／l
l7．8改良培养基19．8844
27．5改良培养基21．7552
37．2改囊培养基26．6763
46．9改良培养基23．4867
2)pH值对发酵的影响由以上数据可知，pH值显著影响鸟苷发酵的产苷率，H+作用于鸟苷酶系，发酵过程需要一定N H。+的积累，维持pH恒定。在较高pH环境下易出现菌体的二次生长，导致产鸟苷酶系活力下降：而在较低pH环境下，菌体生长不够，使得发酵周期较长，转化率低下。
3结论
过高pH(7B、7．5)发酵时，环境提供N H。+过量，导致发酵周期偏短，发酵后期产苷能力严重下降，菌体易出现二次生长，不利于提高发酵转化率，相应会增加生产成本。
而过低pH(6．9)发酵时，环境提供N H4+限量，导致发酵周期长，发酵产乌苷的菌体生长少，菌体量不够，产苷缓慢，也不利于转化率的提高。而且周期长增大了发酵污染的危险性。
流加N H s'H20提供无机氮源利于生长生产：但用量太大和太少都不能使产苷达到最高：适宜pH应在72左右。
【参考文献】
[11i历生荣等发酵法生产鸟苷的生产性试验工业微生物．1998年
【21尹光琳等．发酵工业全书．北京：中国医药科技出版车土．1992．
