2021年1月第42卷第1期
基础研究
55 ----
D01：10.12161/j.issn.l005-6521.2021.01.010
锻树蜜纯度鉴定及其抗+化活性研究
张孟历1，张宏武2，贾红梅2，于猛2，王宝龙#，邹忠梅2$
作者简介：张孟历(1995—)，女(汉)，硕士在读，研究方向：中药分析及质量控制研究。
*通信作者：邹忠梅(1964—)，女(汉)，研究员，博士生导师，研究方向：天然产物化学及药效物质基础研究
(1.天津中医药大学，天津301617；2.中国医学科学院药用植物研究所，北京100193;
3.中国质量万里行促进会生态蜂业专业委员会，北京100031)
摘 要：测定东北地区收集的16批+树蜜中+树花粉占总花粉比例；并采用福林酚法测定各批次+树蜜中的总酚含 量；采用DPPH 自由基清除法、ABTS +自由基清除法与铁离子还原能力(ferric reducing antioxidant power ,FRAP )法测定
各批次+树蜜的总抗氧化能力。结果表明：16批+树蜜中+树花粉占总花粉含量分别在7.14%〜76.73%之间，+树花 粉含量可用于+树蜜纯度鉴定，其中7个批次的+树蜜判定为+树单花蜜，9个批次+树蜜为+树杂花蜜；+树单花 蜜的总酚含量以没食子酸计在174.64 !gg 〜22282 !：g ，杂花蜜为223.73 !：g 〜329.18 !g/g ;DPPH 法测得+树单花蜜的
IC 50值为(46.61 ±10.91 )g/L 〜(107.76±34.17)g/L ，杂花蜜 Ig 值为(24.72±6.89)g/L -(76.75±8.09)g/L ；测得+树单花蜜
ABTS +自由基清除能力以Trolox 计为(0.14±0.07)mmol/kg 〜(0.43±0.10)mmol/kg ,+树杂花蜜ABTS +自由基清除能力
为(0.25±0.01)mmol/kg 〜(0.56±0.04)mmol/kg ；测得+树单花蜜铁离子还原能力以 FeSO d 计为(1.96
±0.08)mmol/kg 〜
(2.82±0.08)mmol/kg ,+树杂花蜜铁离子还原能力以 FeSO d 计为(2.08±0.07) mmol/kg 〜(3.81±0.11) mmol/kg 。结果显示，
+树蜜有一定的抗氧化活性，抗氧化活性与总酚含量呈正相关，但与+树蜜纯度相关性不强。
关键词：蜂蜜；+树蜜；单花蜜；抗氧化活性；总酚含量
Purity Identification of Linden Honeys and Their Antioxidant Activity
ZHANG Meng-li 1, ZHANG Hong —wu 2, JIA Hong-mei 2, YU Meng 2, WANG Bao-long 3, ZOU Zhong —mei 2* * (1. Tianjin University of Trad i t ional Chinese Medicine , Tianjin 301617, China ; 2. The Inst i t ute of Medicinal Plant Development , Beijing 100193, China ;3. China Association for Quality Promotion Ecological Apiculture
Committee , Beijing 100031, China )
Abstract : The linden pollen to total pollen ratio in 16 batches of linden honey collected in Northeast China was
determined. The total phenolic content in each batch of linden honey was determined by Folin -Ciocalteu method. The total antioxidant capacity of each batch of linden honey was determined by DPPH method , ABTS + method and FRAP method. The results showed that the content of linden pollen in linden honey ranged from 7.14% to 76.73% , which could be used for purity identification of linden honey. Among them , 7 batches of
linden honey could be judged as linden monofloral honey , and 9 batches were linden polyfloral honey. The total phenolic content of linden monofloral honey was between 174.64 |xg/g to 222.82 |xg/g in gallic acid , and linden
polyfloral honey was between 223.73 !g/g to 329.18 !g/g in gallic acid. The IC 50 value of linden monofloral honey was between (46.61 ±10.91 * g/L to(107.76±34.17)g/L , and the IC 50value of linden polyfloral honey was between (24.72±6.89)g/L to (76.75±8.09 )g/L. The ABTS + free radical clearance ability of linden monofloral
honey was between (0.14 ± 0.07) mmol/kg to (0.43 ± 0.10)mmol/kg in Trolox , the ABTS + free radical
clearance ability of linden polyfloral honey was between (0.25 ± 0.01) mmol/kg to (0.56 ± 0.04)
mmol/kg in
Trolox. The ferric ion reduction ability of linden monofloral honey was between (1.96 ± 0.08)mmol/kg to (2.82 ± 0.08)mmol/kg in FeSO 4, and the ferric ion reducing ability of linden polyfloral honey was between 2.08 ± 0.07 to 3.81±0.11 mmol/kg in FeSO 4. The results showed that all batches of linden honeys showed antioxidant activity , and their antioxidant activity strongly correlated with the total phenol content , but not with the purity.
2021年1月
第42卷第1期基础研究—56
Key words:honey;linden honey;monofloral honey;antioxidant activity;total phenolic content
引文格式：
operators张孟历，张宏武，贾红梅，等.0树蜜纯度鉴定及其抗氧化活性研究[几食品研究与开发,2021,42(1):55-59.
BHANG Mengli,BHANG Hongwu,JIA Hongmei,et al.Purity Identification of Linden Honeys and their Antioxidant Activity [J].Food Research and Development,2021,42(1):55-59.
蜂蜜是由蜜蜂科昆虫意大利蜜蜂（Apis mellifera Ligustica.）及中华蜜蜂（+pis cerana cerana Fabricius）吸收植物花粉，与自身分泌物结合后，在蜂巢中存放酿造而形成的天然甜物质［1-2］，是公认的具有多种生物活性的天然食品。蜂蜜作为药用历史悠久，始载于《神农本草经》，称蜂蜜为药中之上品，其中记载“蜂蜜味甘、平，无毒，主心腹邪气，诸惊痫痉，诸，气中，毒，药。久轻身，不饥不老，延年”［汽
蜂蜜的品种常常由蜂人蜂巢及其
厚板冲裁用的花主，蜂蜜品种
不多［［-9］。蜂蜜的蜂蜜的、及生物活性。用分、
蜜植物的，花粉种作为蜜植物的［10-12］然是的蜜蜂花蜜的，蜜植物的花粉，而种植物花粉有自有的形，蜂蜜中的花粉种蜂蜜的种质常认为“某种花的花粉率大于50%为该蜜源植物的单花蜜，于50%为杂花蜜花蜜”问。
蜜是蜜蜂植物［紫mTiliaa-murensis Rupr.）、糠檢（ilia Max-im）等］花蜜酿造而成的蜜，主产于、大兴安岭、、长白山脉及俄罗斯远东地区，作为我国东北地区的蜜种，且营价值正槪蜜白偏黄，细腻，具有便秘、失眠、血压、支气管炎多种疾的作用，是肝疾神经衰弱症的良好辅助剂叫目前，蜜的研究不多，主要集中在成分与活性报道，有报道显示，檢
蜜中含有黄酮酚成分，并显示其有抗氧化活性吟切酚性成分含量、抗氧化活性是否与蜜纯度具有性尚未见研究报道，本文首先测定了来自东北地区且蜂农认的蜜中花粉含，蜜的，区分花蜜与花蜜；通过福林酚法测了花蜜与花蜜总酚含；并测了花蜜与花蜜的抗氧化活性，为槪树蜜质量评价及生物活性研究提供参考。
1材料与方法
1.1材料与试剂
蜜,2018年从我国东北地区8位蜂农处收集，16批，详细资料见表1。
表1'树蜜样品来源信息表
Table1Source information of linden honey
编号品批号地
12018102501林林区
22018121001林林区
32018102502区
42018121002区
52018102503黑龙江哈尔滨市宾县
62018121003黑龙江哈尔滨市宾县
芬尼根的守灵夜
72018102504斯
82018121004斯
92018102505黑龙江省伊春市
102018121005黑龙江省伊春市
112018102506黑龙江省伊春市
122018121006黑龙江省伊春市
132018102507林林区
142018121007林林区
152018102508林白区
162018121008林白区
1,1-苯基-2-苦~基自由基（DPPH）、总抗氧化能
力检测试剂盒（2,2，---3-基苯并-6-
自由基,ABTS）Sigma公；蒸徭水：屈
臣氏；谱甲醇（批L-14834）：美国Fisher公；甘
油明胶（规格10mL，批号20180925）：Solarbio公司；没
食子酸（批号030002710001，纯度！98%）：南京泽朗生
物科有限公司；无水+批201801⑻：北
细化工公司；福林酚试剂（批号SL28211620）：Coolaber公司；总抗氧化能试剂盒（铁离子
能,FRAP）天生物公
1.2与
MSA125P-100-DU电子分析天平：德国SARTORIUS公司；KQ-500E昆有限公司；Axio Observer D1显微镜：德国ZEISS公司；
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基础研究
食品硏究与&'
SUNRISE 型酶标光度计：美国Tecan 公司;UV-3100 紫外一可见分光光度计：上海MAPADA 公司°1.3方法1.3.1
7树蜜花粉含量的测定
7树蜜花粉含量的测定参考张金振等问文献里的
方法稍作改变。提取方法：将蜂蜜样品混匀后称取2g
7树蜜，加水4 mL ，混匀° 2 000 r/min 离心10 min ，弃
去上清液，再加4 mL 水,2 000 r/min 离心10 min 。小心
倾出上清液后，沉淀加200 水混匀备用，待制片用。
制片：在40 !的水浴中液化甘油明胶，同时将载玻片 和盖玻片放置于40 !加热板上预热，分别吸取100
液于 热的载玻片上，将载玻片于40 !加
热板上加热， 载玻片的沉淀 ；于 热
的 玻片上
甘油明胶，使其在盖玻片对角形成
一个的十，将玻片
盖在沉淀上，
形成 。 玻片后稍稍加热， 甘油明
胶均匀 分布并使花粉 分 ，在甘油明胶冷却凝
后 分。
1.3.2
7树蜜 含量的测定
采用 法测定7树蜜中的总酚含量71B-209。准
确吸取没食子酸标准品贮备液（1.0 g/L ） 0、80、160、 240、320、400、480、560応分别置于2 mL 容量瓶中，
用 定容，混匀后待测。取 度 上清液
0.5 mL 与2.5 mL 0.2 mol/L 福林酚溶液混合，5 min 后
加入100 g/L 的碳酸钠溶液2 mL ，加水定容至10 mL ，
2 h 后
， 水 对，在760 nm
测定 度 的量（!g
，吸
光度 制
取样品上清液0.5 mL
与2.5 mL 的0.2 mol/L 福林酚溶液混合,5 min 后加入
100 g/L 的碳酸钠溶液2 mL ，用10 mL 容量瓶定容，反
应2 h 后（避光），在760 nm
测定吸光度1.3.3
7树蜜DPPH 自由基清
的测定
分别取100 !L 的10、25、40、55、70 g/L 的蜂蜜样
品水溶液各加100 ^L 的0.05 g/L DPPH 液（避
光，用
于96孔板中， 25 !
30 min ，在517nm 下测定吸光度记为！2；100 pXDPPH
甲醇溶液K100応蒸憎水与100 !L 液K100 !L
蜜样品水 液在上 测 的 度 分
!1、！3。计
样品对DPP H 自由基的清 。：据
7树蜜 液度清 ，通过GraphPad Prism 5软
，计出ICM DPPH 自由基清除率/%二［1 - （^2-!3）/!i ］"
100
1.3.4陈大启
7树蜜ABTS +
清 的测定（ABTS 法）
按试剂盒内说明书提供的方法测定7树蜜
57------
抗氧化
按说明书方法 制各工作液，在96孔板
中每孔依次加入:10 !L 各浓度Trolox 标准液（0、0.015、 0.045、0.105、0.21、0.42 mmol/L ）或样品溶液 +20 ^L 肌
红蛋白工作液+ 150 ^L ABTS 工作液,5 min 后 加 入100 !L 反应停止液，于405 nm 测定吸光度。
1.3.5
7树蜜铁离子还原能力的测定［（ferric reducing
antioxidant power , FRAP ）］
按试剂盒内说明书提供的方法测定7树蜜 抗氧化 按说明书方法 制 工作液，在96 板
中每孔加入：180 ^L FRAP 工作液+ 5応蒸憎水或各 浓度 FeS04 标准液（0.15、0.3、0.6、0.9、1.2、1.5 mmol/L ）
或样品溶液。37 !孵育5 min 后于593 nm 测定吸光度。 1.3.6数处理
速度生活有数据经excle 和Graphpad Prism 5软件进行数 据统计和图表制作，试验结果以均数土 差（x 土 s ）
表Mo
2结果与分析
2.1
7树蜜纯度测定
花粉形态，7树花粉特征明显，见
图1
图1 '树花粉显微镜下形态（x 400）
Fig.l The morphology for linden pollen under the
microscope （x 400）
从图1中可以看出7树花粉外观呈圆形至椭圆状
态，圆内可见一类三角形图案，特征明，文献［18］ 报道一致。而其余花粉或呈圆形，内部布满小点，或外
呈三角形，7树蜜花粉区 明 通过对16批7
树蜜分 测，结果见表2。
表2可知，发所有样品中
7树花
粉的存在，说明
7树蜜。但所含7树花粉占 花粉的量不同，从7.14%〜76.73%不等，表明其所含7树 蜜的纯度差异较大。依据文献［13］，其中7批次的7树 蜜中7树花粉 于50%，可判定 7树单花蜜，其 他批次7树花粉 小于50%，判定 7树杂花蜜。2.2 7树蜜 含量
试验结果
量 ，
课堂内外高中版
度
2021年"月
第42卷第1期食品#究基础研究----58
表2各批次％树蜜花粉含量测定结果(n=31 Table2Determination of pollen content of each batch of
Linden honey(n=3)
表3各批次％树蜜抗氧化能力及总酚含量测定结果Table3Determination of antioxidant capacity and total phenolic content of all selected samples of Linden honey
编号样品批号1树花粉比率/%单花蜜
1201810250134.13否
2201812100141.02否
3201810250257.72是
4201812100273.59是
5201810250340.40否
6201812100342.73否
7201810250442.86否
8201812100445.28否
9201810250555.03是
10201812100576.73是
1120181025067.14否
12201812100617.36否
13201810250751.46是
14201812100766.83是
15201810250836.99否
16201812100856.17是
为纵坐标绘制的标准曲线方程为y二0.011"+0.0239
号
DPPH自由基
清除IC50/
(g/L)
ABTS+自由基
清除/
(mmol/kg)
子还原能
(/mmol/kg)
总酚含量/
(!g/g) 124.72±6.890.56±0.04 3.12±0.00291.91 239.46±1.990.47±0.17 3.81±0.11329.18 386.13±6.9
10.15±0.02 1.96±0.08186.45 4105.10±34.500.22±0.04 2.26±0.01174.64 559.37±23.990.40±0.02 3.10±0.08261.00 676.75±8.090.43±0.06 3.48±0.14281.91 734.62±12.150.53±0.01 3.49±0.00291.00 857.76±6.620.25±0.01 2.99±0.36298.27 986.46±41.740.14±0.07 2.82±0.08195.55 1093.04±31.670.27±0.03 1.97±0.02183.73 1137.09±19.640.29±0.05 2.54±0.03223.73 1263.72±11.780.31±0.10 2.08±0.07241.91 1346.61±10.910.26±0.02 2.78±0.10215.55 1496.89±32.760.22±0.01 2.19±0.05207.36 1566.65±38.110.27±0.22 2.42±0.21271.00 16107.76±34.170.43±0.10 2.29±0.09222.82
图2没食子酸标准曲线图
曲:・2The standard curve for gallic acid
1树蜜总酚含量以相对没食子酸的量表示，详细结果见表3o表3结果显示1树蜜总酚含量以没食子酸计在174.64〜329.10总酚含量最高的为2号1树蜜，为329.18其次为0号1树蜜，总酚含量最低为4号1树蜜，为174.64其中1树单花蜜总酚含量为174.64!-/-〜222.821树杂花蜜总酚含量为223.73!-/-〜392.18憾/-。1树杂花蜜总酚含量稍低于单花蜜，但不具有显著差异。
2.31树蜜对DPPH自由基的清除作用
16批1树蜜对DPPH自由基均有不同程度的清除作用，且清除率随样品浓度的增加而增强。由表3可知，各批次1树蜜DPPH自由基清除率IC5o值在(24.72±6.89)-/L〜(107.76±34.17)-/L之间，其中1树单花蜜IC50值为(46.61±10.91)-/L〜(107.76±34.17)g/L, 1树杂花蜜IC50值为(24.72±6.89)g/L〜(76.75±8.09)g/L，没有显著区别。与文献［179报道的1树蜜DPPH清除率IC50值35.35mg/mL-87.93mg/mL基本吻合。
2.41树蜜对A<TS+自由基的清除
准曲线图见图3o
00.10.20.30.40.5
A.Trolox;
B.FeSO4。
图3标准曲线图
Fig.3The standard curve
以Trolox浓度(mmol/L)为横坐标，吸光度为纵坐标绘制的标准曲线方程为y二-1.4797"+1.0449(R2二
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基础研究
59-—
0.992 9)(® 3A )。以 Trolox 计，16 批)树蜜 ABTS 0
自由基的清除能力为(0.14±0.07)mmol/kg~(0.56土
0.04)mmol/kg ，其中)树单花蜜ABTS 0自由基的清除能
力为(0.14±0.07)mmol/kg~(0.43±0.10)mmol/kg ,)树杂
花蜜ABTS 0自由基的清除能力为(0.25±0.01) mmol/kg~
(0.56±0.04)mmol/kg ，详细结果见表 3$
2.5 )树蜜的铁离子还原能力
以FeS04浓度(mmol/L )为横坐标，吸光度为纵坐 标绘制的标准曲线方程为！ = 0.311 9" + 0.048 4(R 2 =
0.999 9)(图3B ) $以FeS04计16批)树蜜铁离子还原
能力为(1.96±0.08)mmol/kg~(3.81±0.11 ) mmol/kg ，其
中)树单花蜜铁离子还原能力为(1.96±0.08 ) mmol/kg~
(2.82±0.08 ) mmol/kg ,)树杂花蜜铁离子还原能力为 (2.08±0.07)mmol/kg~(3.81±0.11) mmol/kg ，详细结果
见表 3$3结论
收集的16批样品为蜂农认定的)树蜜，均检测到
)树花粉，但花粉测定结果显示)树花粉含量差异较
大，从7.14%到76.73%不等，因此，可根据)树花粉含 量判断)树蜜的纯度，以区分)树单花蜜与杂花蜜。
结果表明，其中7批)树蜜中)树花粉含量大于50%，
定义为)树单花蜜;9批)树花粉含量小于50%，定义 为)树杂花蜜。本文还对批)树蜜的 含量
测定， 含量以 子 计 174.64 !g/g~
329.18 !g/g ，与文献报道结果基本 ，其中)树单
花蜜 含量为174.64 !g/g~222.82 !g/g ，)树杂花蜜
总酚含量为223.73 !g/g~329.18 !g/g ，二者差异不大。 大量研究表明 含量与抗氧化活存 定的关
[21-22],
含量 ，其抗氧化活 $采用DPPH 法、ABTS 法及FRAP 法3种方法对)树蜜
的抗氧化能力 ，结果显示， 批 )树
蜜均 定抗氧化 ，抗氧化活与其 含量
，但单花蜜与杂花蜜的抗氧化能力差异不大，
表明)树蜜抗氧化活与)树蜜纯度
不强。
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加工编辑：张弘
收稿日期：2020-02-07
