作者：游见明，曹新志
来源：《湖北农业科学》 2013年第10期
游见明，曹新志
（四川理工学院生物工程系，四川 自贡 ６４３０００）
摘要：采用福林酚法对茶树不同部位多酚化合物总含量进行测定，比较不同部位中茶多酚含量的差异，探讨茶多酚在茶树体内的分布情况。结果表明，茶树中茶多酚含量随生长部位的不同而存在差异，叶片中茶多酚含量最高，根部含量最低。了解茶树不同部位茶多酚的分布将有助于为茶树茶多酚代谢的相关研究奠定基础。 关键词：茶树；茶多酚；福林酚法；分布
中图分类号：Ｏ６５７．３
文献标识码：Ａ
安徽农业科学
文章编号：0439－８114（２０13）10－2417-03
茶叶富含茶多酚，一般是茶叶中儿茶素类、酚酸类和花素类多酚化合物的总称，是茶叶中具有生物活性的主要成分，其含量一般占干重的１５％～３５％，其含量及组成与制茶类别及品质关系密切，直接影响茶汤泽、滋味，历来为茶叶科技工作者所重视［１－３］；此外，人们还发现茶多酚具有抑菌、消炎等多种功效，其抗氧化特性还可应用于肉类、蔬菜等产品保鲜及深加工保健等领域［４－６］。本研究针对同一茶树的不同部位所含茶多酚含量进行比较，分析茶多酚在茶树中分布差异，以期为茶树茶多酚的代谢及体内转运途径等研究奠定基础。
１ 材料与方法
１．１ 材料
茶树品种：早白尖５号无性系６～７年生健壮植株；采样时间：２０１１年７月１５日；采集地：四川省自贡市荣县五通农场茶园（海拔７１５ ｍ左右）。
降膜吸收塔
在不同植株上随机剪取样品，按根、茎、当年生新叶、隔年生老叶片归类，分别用塑料保鲜袋密封样品，迅速带回实验室，８０～８５ ℃热风烘干至恒重后粉碎备用。 １０ ｍｇ／１００ ｍＬ没食子酸标准溶液；１％（ｍ／Ｖ，下同）铁，现配现用。
福林酚试剂：称取Ｎａ２CＯ3·２Ｈ２Ｏ ５０ ｇ和Ｎａ２ＨＰＯ４·１２Ｈ２Ｏ １２．５ ｇ，加入３５０ ｍＬ去离子水、２５ ｍＬ浓硫酸及５０ ｍＬ浓ＨＣｌ溶液，混匀，以小火回流１０ ｈ；再加入７５ ｇ ＬｉＳＯ４，２５ ｍＬ去离子水及数滴溴，开口沸腾１５ ｍｉｎ，以除去过量溴，冷却后定容至５００ ｍＬ，过滤至棕试剂瓶中；用1 ｍｏｌ／Ｌ的ＮａＯＨ标准液滴定，酚酞为指示剂，后稀释至终浓度为1 ｍｏｌ／Ｌ。
Ｔ６型紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；ＬＧ１０－２．４Ａ型高速离心机（北京京立离心机有限公司）。
１．３ 方法
１．３．１ 没食子酸标准曲线的制作 采用福林酚法（Ｆｏｌｉｎ－Ｃｉｏｃａｌｔｅａｕｔ）［７，８］。在２０ ｍＬ具塞试管中，分别加入不同体积（０、０．４、０．８、１．２、１．６、２．０ ｍＬ）的１０ ｍｇ／１００ ｍＬ没食子酸标准溶液和３ ｍＬ福林酚试剂，７～８ ｍｉｎ后加入３ ｍＬ １０％（ｍ／Ｖ，下同）Ｎａ２ＣＯ３溶液，摇匀，于２５ ℃静置反应ｌ ｈ，用去离子水定容至２０ ｍＬ，测定ＯＤ７６０ ｎｍ。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。图书馆学会
１．３．２ 样品液中总酚的测定 取适量样品溶液于２０ ｍＬ具塞刻度试管中，按上述方法测定７６０ ｎｍ处吸光度，按照式（１）计算样品中总酚的质量分数。式中：Ｇ为标准曲线中查的总酚含量，单位μｇ；Ｗ为样品重量，单位ｇ。
总酚含量＝０．００３ ７５Ｇ／Ｗ×１００％
劳思光
（１）
１．３．３ 样品中茶多酚提取 准确称取５ ｇ干粉样品于索氏提取管中，加入一定体积的乙醇，用恒温磁力加热搅拌器加热，于８０～８５ ℃回流１ ｈ，待提取液冷却至室温，以去离子水定容至１００ ｍＬ，澄清后测定ＯＤ７６０ ｎｍ，根据式（１）计算出样品中的总酚含量。
２ 结果与分析
２．１ 福林酚法测定条件的优化
采用福林酚法测定茶多酚时，对测定结果产生影响的因素有：福林酚试剂用量、福林酚试剂与Ｎａ２ＣＯ３溶液的比例、温度、时间等，针对上述因素分析，寻各因素最佳的反应条件。
在福林酚试剂用量优化试验中，没食子酸标准溶液０．５ ｍＬ，于２０ ℃反应１．５ ｈ，研究不
同体积福林酚试剂对吸光度的影响，其中Ｎａ２ＣＯ３溶液与福林酚试剂等体积使用，结果见图１。由图１可知，当福林酚试剂加入量为３．０ ｍＬ时，吸光度最大。
在福林酚试剂和Ｎａ２ＣＯ３溶液体积比的优化试验中，没食子酸标准溶液为０．５ ｍＬ，福林酚试剂３ ｍＬ，于２０ ℃反应１．５ ｈ，研究２种试剂不同体积比例条件下对吸光度的影响，结果见图２。由图２可知，当体积比为１∶１时，吸光度最大，显反应完全。
在温度优化试验中，没食子酸标准溶液０．５ ｍＬ，福林酚试剂和Ｎａ２ＣＯ３溶液各３ ｍＬ，反应时间１．５ ｈ，研究不同温度对吸光度的影响。由图３可知，２５ ℃吸光度最高，选择２５ ℃是最佳反应温度。
在时间优化试验中，没食子酸标准溶液０．５ ｍＬ，福林酚试剂和Ｎａ２ＣＯ３溶液各为３ ｍＬ，２５ ℃反应，研究不同反应时间对吸光度的影响，结果见图４。由图４可知，反应１ ｈ后其吸光度达到最大并保持稳定，选择１ ｈ为最佳反应时间。
综合上述结果，该反应的最佳条件为，福林酚试剂用量为３．０ ｍＬ，福林酚试剂与Ｎａ２ＣＯ３溶液的比例为１∶１，于２５ ℃反应１ ｈ。
２．２ 绘制没食子酸标准曲线
按以上的优化条件，测定吸光度并绘制标准曲线（图５）。线性回归方程为ｙ＝０．１４２ ０ｘ－０．０８１ ８，Ｒ２＝０．９９９ ４。
建国方略读后感
２．3 茶树不同部位的茶多酚含量
茶树不同部位的茶多酚含量见表１。由表１可知，在茶树各不同部位中，茶多酚含量不同，其中茶叶中含量最多，当年生新叶中茶多酚含量高于老叶，茶树茎与根部含量较低，以根部为最低。
３ 结论
试验发现福林酚法检测总酚的最佳反应条件为福林酚试剂３．０ ｍＬ，１０％ Ｎａ２ＣＯ３溶液３．０ ｍＬ，２５ ℃反应１ ｈ，在此条件下线性回归方程为ｙ＝０．１４２ ０ｘ－０．０８１ ８，Ｒ２＝０．９９９ ４。茶树植株不同部位茶多酚含量存在明显差异，茶多酚主要分布于茶树叶片中，其中又以幼嫩芽叶中茶多酚含量为高。茶树植株内茶多酚的分布情况可能与茶树茶多酚代谢及转移运输有关［９，１０］，尚有待进一步研究。
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（责任编辑 周有祥）
