指标：1、品质指标
硬度、泽、褐变指数、失重率、腐烂率、可溶性固型物、呼吸强度、乙烯释放率、可滴定酸、Vc
2、抗性指标
抗氧化衰老的有：SOD CAT APX GSH MDA 原果胶（可溶性果胶）
抗病相关指标有：PPO POD CHT GUL PAL总酚 类黄酮 木质素
褐变指数
泽
失重率
腐烂率
呼吸强度
乙烯释放率
硬度
可溶性固型物
可滴定酸：
试剂：0.1mol/LNaOH(4g纯+1000ml蒸馏水，邻苯二甲酸氢钾标定) 1%酚酞试剂（1g酚酞加入到100ml50%的乙醇溶液中溶解） 中岛敦
方法：1、NaOH的标定： 准确称取105℃下烘干至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾0.6g ，加入50ml新煮沸过的冷水，振摇，使其尽量溶解，再滴加2滴1%酚酞指示剂，用配置的NaOH溶液标定，滴定至溶液呈粉红。每1mlNaOH相当于20.42mg邻苯二甲酸氢钾，计算出NaOH滴定液的浓度。
2、测定步骤：称10g苹果，研磨，转移到100ml容量瓶中，蒸馏水洗研钵3次再定容，摇匀，
静置30min后过滤。吸取20ml滤液，转入三角瓶中，加入两滴1%酚酞试剂，用已标定的氢氧化钠溶液进行标定，滴定至溶液初现粉并30秒内不退为终点（PH8.1-8.3）,重复三次，再用蒸馏水作为滤液进行滴定作为空白对照。可定丁酸含量=【样品提取液总体积*氢氧化钠滴定液浓度*（滴定滤液消耗的氢氧化钠体积—滴定蒸馏水消耗的氢氧化钠体积）】/（滴定时所取滤液体积*样品质量） Vc：
试剂：5%钼酸铵溶液（称取5g钼酸铵溶于蒸馏水中，并定容至100ml）草酸-EDTA溶液（称取6.3g草酸和0.75gEDTA-Na2溶于蒸馏水中并定容至1000ml）5%H2SO4(体积分数) 偏磷酸-乙酸溶液（取棒状偏磷酸粤海风3g加20%冰醋酸48ml，溶解后加蒸馏水稀释至100ml,必要时过滤，在冰箱中可保存3天）Vc标准溶液（称取Vc100mg，置100ml容量瓶中，加适量草酸-EDTA溶液溶解后，在用该溶液定容到100ml，即成1mg/ml标准液，此溶液随配随用（如果纯度不够应进行标定）） 提取及测定：1、制作标准曲线： 7支25ml具塞试管，按下表加入各种试剂
试剂 试管号 |
1 2 3 4 5 6 7 |
Vc标准液/ml 0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 草酸EDTA溶液/ml 5.0 4.9 4.8 4.6 4.4 4.2 4.0 偏磷酸-乙酸溶液/ml 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 1:19H2SO4/ml 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 5%钼酸铵/ml 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 Vc含量/mg 0 10 20 40 60 80 100 |
|
加完试剂摇匀后，置30℃水浴中保温15min，用蒸馏水稀释至25ml，混匀，用1号空白管调零，在760nm波长下比，记录吸光度，以Vc含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2、提取及测定：称取5g果蔬组织，加5ml草酸-EDTA溶液研磨成匀浆，并仔细转入25ml容量瓶中，再用提取介质冲洗研钵，冲洗液一并倒入容量瓶中。取一部分匀浆液经3000g离心10min后，取1ml上清液与标准管同法测定，若样品显液中出现沉淀，可过滤后进行比，不影响测定结果。
计算公式：Vc含量（mg*100g-1FW）=标准曲线上查的的Vc的量*样品提取液总体积/(测定时所用样品液体积*样品鲜重)注意：显温度和加入显剂后的时间要一致。
GSH：
试剂：50g/L三（5g三和蒸馏水溶解稀释至100ml，再加入186mgEDTA-Na2.2H2O）0.1mol/LPH7.7磷酸钠缓冲液和0.1mol/LPH6.8磷酸钠缓冲液 4mmol/L二硫代硝基苯甲酸（15.8mgDTNB，用0.1mol/L、PH6.8磷酸缓冲液溶解，定容至10ml，摇匀，4
℃保存）100umol/L还原性谷胱甘肽标准液（3g还原型谷胱甘肽加入少量无水乙醇用蒸馏水定容至100ml）
双膝之间1984实验步骤：1、标准曲线制作：
取六只试管编号，按下表加入各种试剂，混匀，于25℃保温反应10min，以0号管为参比调零，测定显液在波长412nm处的吸光度值，以吸光度值为纵坐标，还原型谷胱甘肽为横坐标，绘制标准曲线。
项目 管号 |
0 1 2 3 4 5 |
还原型谷胱甘肽标液/ml 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水/ml 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 PH7.7磷酸缓冲液/ml 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 DTNB试剂/ml 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 刘彭芝相当于还原型谷胱甘肽物质的量/umol 0 20 40 60 80 100 |
|
2、提取和测定：5g果实加入经预冷的三，在冰浴下研磨匀浆，于4℃、12000xg离心20min，收集上清液测定。取一只试管，依次加入1ml蒸馏水、1mlPH7.7磷酸缓冲液和0.5mlDTNB，混匀即为绘制标准曲线的0号管溶液，此液作为参比调零。另取两支试管，分别加入1ml上清液、1mlPH7.7磷酸缓冲液，然后向一只管中加入0.5mlDTNB，向另一支管中加入0.5mlPH6.8磷酸缓冲液。将两只管置于25℃下保温反应10min，迅速测定显液在波长412nm下的吸光度值，分别记作ODs和ODc。重复三次。
根据ODs-ODc的差值从标准曲线上查的还原型谷胱甘肽含量，计算每克果实中还原型谷胱甘肽的含量：还原型谷胱甘肽含量=（标准曲线上查得的值*样品提取液总体积）/（吸取样品液体积*样品质量）注意：先做样品本底对照。
MDA：
试剂：100g/L三（称取10g三蒸馏水溶解稀释至100ml）6.7g/L硫代酸（称取0.67g硫代酸，用100ml0.05mol/L氢氧化钠溶解）
测定步骤：称取1g果蔬样品，加入5ml三溶液，研磨匀浆于4℃10000g离心20min，
收集上清液低温保存备用。取2ml上清液，对照空白管中加入2ml三代替提取液，分别加入2ml0.67%硫代酸，混合后在沸水浴中煮沸20min，取出冷却后再离心一次，分别测定上清液在450nm、532nm、600nm波长处的吸光度值，重复三次。计算：丙二醛含量（umol/L）=6.45*(OD532-OD600)-0.56*OD450
每克果蔬中丙二醛的含量=丙二醛含量*样品提取液总体积/(测定时所取样品液体积*样品质量*1000) 注意：出现负值，表明糖的影响很大，需做预实验确定适宜的条件。
原果胶（可溶性果胶）：
试剂：1.5g/L咔唑-乙醇溶液（称取0.15g咔唑加入无水乙醇溶解并稀释至100ml） 100ug/ml半乳糖醛酸标准液（称取10mg半乳糖醛酸M=194,用蒸馏水溶解定容至100ml） 浓硫酸 95%乙醇 0.5mol/L硫酸溶液
测定步骤：1、制作标准曲线：取6支25ml具塞刻度试管，编号，按下表加入半乳糖醛酸标准液，然后小心地沿管壁加入6ml浓硫酸，在沸水浴中加热20min，取出冷却至室温后，各加入0.2ml1.5g/L咔唑-乙醇溶液，摇匀，在暗处放置30min后，测定反应液在波长530nm处
的吸光度值，并以吸光度值为纵坐标，半乳糖醛酸质量（ug）为横坐标，绘制标准曲线求出方程。
闽江大学项目 管号 |
0 1 2 3 4 5 |
半乳糖醛酸标准液/ml 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水/ml 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 相当于半乳糖醛酸的量/ug 0 20 40 60 80 100 |
|
磁单极子
2、提取测定：
（1）可溶性果胶提取：称取1g果蔬组织，研磨成匀浆转入50ml刻度离心管中，加入25ml95%乙醇，在沸水浴上加热30min，以除去样品中糖分及其他物质，注意在煮沸过程中要及时补加95%乙醇。取出冷却至室温，于8000r/min离心5min，弃去上清液，再加入95%乙醇在沸水浴上加热，如此重复3-5次。然后将沉淀放入试管中，加入20ml蒸馏水，在50℃水浴中保温30min，以溶解果胶。取出冷却至室温后，于8000r/min下离心15min，
将上清液移入100ml容量瓶中，用少量水洗涤沉淀，离心后一并将上清液移入容量瓶中，加蒸馏水至刻度，此溶液即为可溶性果胶。
（2）原果胶提取：将上述遗留的沉淀物，保留在刻度离心管仲，再向其中加入25ml0.5mol/L硫酸溶液，在沸水浴中加热1h以水解原果胶，取出冷却至室温后，于8000r/min下离心15min,将上清液移入100ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，此为原果胶测定液。
（3）测定：吸取1ml提取液，加入到25ml刻度试管中，按标准曲线的操作步骤进行测定，重复三次。计算：根据吸光度值查得半乳糖醛酸质量，计算每克果蔬中果胶含量，以半乳糖醛酸质量分数表示。
半乳糖醛酸含量=查得的半乳糖醛酸量*样品提取液总体积/(测定时所取样品液体积*样品质量) 注意：检验糖分是否除尽的方法：取0.5ml提取液置于试管中，加入2-3滴50g/Lα-萘酚的乙醇溶液，充分混合，此时溶液稍有白沉淀，然后使试管稍稍倾斜，用吸管沿管壁加入1ml浓硫酸（注意水层与硫酸层不可混合）。待试管静置后，若在两层的界面上产生紫红环，则证明提取液中含有糖分
