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Todd
M ,Schul t z
J onat han,M i l es ki W i l l i am ,D avey M el ,Leam on J ohn H ,J ohns on K i m ,
融合蛋白
M i l gr ew
M ar k J,Edw ar ds M at t hew ,H oon J er em y,Si m ons J an F,
M ar r an D avi d,M yer s J as on W ,D avi ds on J ohn F,B r ant i ng A nni ka,N obi l e J ohn R ,Puc Ber nar d P,Li ght D avi d,Cl ar k Tr avi s A ,H uber M ar t i n,Br anci f or t e J ef f r ey T,St oner I s aac B,C aw l ey Si m on E ,Lyons M i chael ,Fu Y ut ao,H om er N i l s ,Sedova M ar i na,M i ao X i n,
R eed B r i an,Sabi na J ef f r ey,Fei er s t ei n Er i ka,Schor n M i chel l e,A l anj ar y M .A n i nt egr at ed
s em i conduct or devi ce
enabl i ng
non-opt i cal genom e
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多酚类物质是指分子结构中有若干个酚性羟基的植物成分的总称，被称为“第七类营养素”，其存在于一些常见的植物性食物中，且以类黄酮、酚酸、儿茶素、花青素、槲皮素以及白藜芦醇等酚类化合物最为常见[1-3]。多酚类化合物是一类具有潜在促进健康作用的化合物，多具有抗氧化作用，还具有抗炎和促进免疫力等保健功效。 由于混合提取物及其保健制品体系中干扰性成
分多，样品基质复杂，因此，显的影响因素较多，如反应试剂福林酚、碳酸钠试剂的用量，水浴温度[4-5]，反应静置时间等影响因素。本研究旨在通过优化如上因素参数，最终开发出一种针对复杂体 系的总多酚测定方法，以为植物提取物及其制品中总多酚类物质含量的测定、快速检测及应用提供科学依据。1
仪器、材料和试剂1.1材料
植物提取物中总多酚测定方法的优化研究
黄
杰1，刘国英1,2，李安军1
(1.安徽古井贡酒股份有限公司，安徽亳州236820;2.安徽省固态发酵工程技术研究中心，安徽亳州236820)
摘要:[目的]开发一种针对多植物混合提取物体系的总多酚测定方法，能够为植物提取物及其制品中总多酚类
物质含量的测定、快速检测及应用提供科学依据，从而为富含总多酚化合物的植物应用于健康养生产业提供技术支撑。[方法]采用紫外分光光度法，通过全扫描确定最大吸收波长，并对反应试剂福林酚、碳酸钠试剂的用量、水浴温度、反应静置时间参数开展单因素优化实验，以使总多酚被准确、最 大限度地检测出来。以没食子酸为对照品制定标准曲线，并开展样品溶液的精密度实验及回收率实验等方法验证性考察。[结论]该方法线性关系良好，较准确稳定，回收率满足要求，为植物提取物及其制品中总多酚类物质含量的测定、快速检测及应用提供了一种客观、科学、准确的定量方法。
关键词：总多酚；植物提取物；最大吸收波长；精密度；回收率中图分类号:T S207.3
文献标识码:B
收稿日期:2020-11-26
作者简介：黄杰，男，酿酒师，品酒师，工程师，从事白酒固态发酵研究与储存工艺的技术创新。
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西凤
第48卷第2期2021年3月
酿酒LI Q U O R
M A K I N G
19世纪V ol .48.№.2M ar .,2021
文章编号:1002-8110(2021)02-0104-04
104
黄杰，等：植物提取物中总多酚测定方法的优化研究
第二期2021
没食子酸标准品(C7H 6O 5,CA S 号:149-91-7)，纯度≥99.0%。1.2试剂
60%乙醇溶液,15%碳酸钠溶液，福林酚(分析纯)。1.3仪器
U V -9000分光光度计，感量0.1m g 的分析天平，电热恒温水浴锅(0-100℃)。2
实验方法
2.1没食子酸标准溶液的配制
准确称取20m g (精确至0.1m g )没食子酸标准品，用蒸馏水溶解定容至100m L ，此溶液中没食子酸含量为200m g/L 。于4℃冰箱中避光保存。2.2植物提取物试样的制备
吸取5m L 提取液于100m L 烧杯中，加入30m L 60%乙醇溶液，超声10m i n ，以60%乙醇溶液定容至50m L 容量瓶，摇匀，过滤，待测。2.3最大吸收波长的选择
准确吸取没食子酸标准溶液0.2m L 置于10m L 容量瓶中，用60%乙醇溶液定容，得到没食子酸工作液。再移取没食子酸工作液1.0m L 于10m L 比管中，加入2.5m L 福林酚试剂，摇匀，加入2.5m L 15%N a 2C O 3溶液，加水定容至刻度，摇匀。在40℃水浴60m i n ，静置冷却20m i n 后，在波长为500nm ~900nm 处进行多次扫描，在波长778nm 处取得最大吸收峰，如图1所示。后续实验对测定条件参数进行优化，按照优化后的实验方法进行没食子酸标准液的全扫描，最大吸收波长仍为778nm 。
2.4前处理方法参数的优化研究
2.4.1福林酚试剂用量的确定
氧化剂的最适加入量对结果的测定影响很大，加入过少，氧化反应不彻底，加入过多，造成不必要的浪费。故本实验以福林酚试剂的用量为变量[6]，以吸光度为监测变量，设计单因素实验。分别加入0
、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5m L 福林酚试剂，进行实验测定。结果表明，随着福林酚试剂体积的增加，测定总酚的吸光度逐渐增大，在福林酚体积为2.5m L 以后，发现吸光度趋于稳定，故选取福林酚最佳体积为2.5m L 。结果如图2所示。故本标准选择的氧化剂最适加入量为2.5m L 。
2.4.2碳酸钠试剂用量的确定
碳酸钠的主要作用是提供碱性环境，加入过少，造成显不完全，加入过多，反应体系中易有白沉淀析出和不必要的浪费。故本实验分别加入0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0m L15%碳酸钠试剂进行测定。结果表明，随着碳酸钠试剂体积的增加，测定总酚的吸光度逐渐增大，在碳酸钠体积为2.5m L 以后，发现吸光度趋于稳定，故选取碳酸钠最佳体积为2.5m L 。结果如图3所示。故本标准选择的最适加入量为2.5m L 。关于上班这件事
2.4.3水浴温度的优化
水浴温度影响着混合物的反应速度，同时可能
图1
没食子酸标准液的全波长扫描图
0.50.40.30.20.10
500
600
700800900
W avel engt h(nm )
图2
吸光度随不同福林酚试剂加入量的变化趋势图
0.35000.30000.25000.20000.15000.10000.0500
00.2
1.0
1.5
2.0
2.5
3.0 3.5
4.0福林酚试剂用量/m L
图3
吸光度随不同碳酸钠加入量的变化趋势图
0.30000.25000.20000.15000.10000.0500
00
1
2
3
456碳酸钠试剂用量/m L
105
影响着所用试剂的溶解度。温度低反应缓慢，而且部分试剂的溶解度下降，易产生沉淀。温度高则提高了反应速度，但可能破坏反应体系中的不稳定物质。故本实验将反应混合液分别置于25℃(室温)、30℃、40℃、50℃、60℃水浴中加热进行试验。结果表明，在25℃~60℃水浴温度下，随着水浴温度的增加，测定总酚的吸光度呈现先增大后降低的趋势，在水浴温度为40℃时，测定总酚的吸光度达到最大值，故本标准选取40℃为最佳水浴温度。
2.4.4水浴后静置时间
实验将络合物静置不同时间，以探究络合物的反应时间和稳定性，据此来严格控制比时间。数据如图5所示，发现在静置20m i n 时，吸光度达最大，在20m i n~30m i n 后，吸光度降低，在静置30m i n~60m i n 后，吸光度趋于稳定。最终，选择水浴后冷却至室温,20m i n 内完成测定。
3线性关系考察
确定了各项技术参数后，以没食子酸为标准物
质绘制标准曲线，以没食子酸浓度梯度为横坐标，以吸光度为纵坐标，得到总酚标准曲线,Conc=82.9474×A bs -3.1674,R 2=0.999375,R 2≥0.999。如图6所示。因此通过测定样品吸光度，
对照标准曲线，就可以得出样品中总酚的含量。
4精密度实验考察
对不同植物提取液样品进行重复性和重现性实
验，重复性条件下获得的平行测定结果的绝对差值均不超过算术平均值的10%，其精密度符合方法学的要求。
5回收率实验考察
以植物提取液为基质，从低浓度、中浓度、高浓
度三个浓度梯度开展提取液样品的加标回收率实验，经计算，回收率均满足定量要求。
6
结论
本实验通过对总多酚测定方法中主要影响变量(包含福林酚试剂用量、碳酸钠试剂用量、水浴温度、水浴后静置时间四因素)进行单因素研究，再对测定方法进行线性关系考察、精密度实验考察及回收率
表1
重复性实验数据样品名称植物提取液
样品编号123456总酚浓度/m g ·L -1465.51496.49463.39478.77485.02480.87平均值/m g ·L -1478.34
R SD %2.59
表2
重现性实验数据
样品名称植物提取液
测定时间第1天第10天
总酚浓度/m g ·L -1478.34447.95
平均值/m g ·L -1463.15
R SD %4.64
表3
回收率实验数据
样品名称植物提取液
样品编号123
加样量
/m L 0.10.10.1回收率/%113.65105.6499.72
加标量/m L 0.020.040.06
平均回收率/%106.34
图4
吸光度随不同水浴温度的变化趋势图0.30000.25000.20000.15000.10000.0500
水浴温度/℃
2530
35
40
45
50
5560图5
吸光度随不同静置时间的变化趋势图
0.30000.25000.20000.15000.10000.0500
1020
30
40
50
60
静置时间/m i n
图6
没食子酸标准曲线
Fi t Cur ve
Concent r at i on/%
2040
60
1.00.90.80.70.60.50.40.30.20.10
第二期2021
酿酒
106
实验考察，最终获得一种同时适用于富含多酚类物质的植物提取物及其制品中的总多酚测定方法，该方法科学准确，可更好地监控原料中总多酚类物质提取以及产品相关制品的质量，以更好地实现提取条件优化及相关产品的健康品质研究。
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Optimization on Determination Method of Total Polyphenol in Plant
Extracts
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2.A nhui Sol i d-s t at e f er m ent at i on of Engi neer i ng Technol ogy R es ear ch Cent er ,B oz hou,A nhui 236820,C hi na)
刀豆蛋白Abstract :[O bj ect i ve]Es t abl i s hi ng a det er m i nat i on m et hod of t ot al pol yphenol f or m ul t i
pl e pl ant s 'm i xed ext r act s s yst em ,can pr ovi de a sci ent i f i c bas i s f or t ot alpol yphenoldet er m i nat i on,r api d det ect i on and appl i cat i on f r om pl ant s 'ext r act s ,t hen pr ovi de t echni calsuppor tf or pl ant s r i ch i n phenol i c com pounds appl yi ng i n heal t h pr es er vi ng i ndus t r y.[M et hod]The U V s pect r ophot om et r i c m et hod i s us ed,t hr ough t he scan det er m i nat i on M ax absor pt i on wavel engt h.W e car r y outs i ngl e-f act or t es tby m aki ng t he cont r astofFol i n-phenol 's am ount s ,s odi um car bonat e's am ount s ,wat er bat h t em per at ur e,and s t andi ng t i m e,t o m ake t ot al pol yphenol det er m i nat ed accur at el y and f ur t hest .Then we es t abl i s hed st andar d cur ves wi t h gal l i c aci d as r ef er ence s ubs t ance and l aunched pr eci s i on exper i m entand r ecover y exper i m ent .[Concl us i on]Thi s m et hod has good l i near r el at i on,good degr ee ofaccur acy and s t abi l i t y,good r ecover y r at e.I tcan pr ovi de an obj ect i ve,s ci ent i f i c and accur at e quant i t at i ve m et hod f or t ot al pol yphenol am ount s 'det er m i nat i on,r api d det ect i on and appl i cat i on f r om pl ant ext r act s and r el at ed pr oduct s .
Key words:t ot al pol yphenol ;pl ant ext r act s ;m axi m um absor pt i on s pect r a;pr eci si on;r ecover y
传统白酒生产采用窖池作为发酵容器，窖池是酿造生产中的根基，是生产白酒的重要前提条件[1]，且“老窖出好酒”，酒龄越长的窖池其窖泥老熟度越
佳，产出曲酒的质量也越好。所以抓好窖池管理，也就是抓好了50%的产品质量[2]。窖泥是浓香型白酒发酵不可缺少的基础条件[3]，窖泥质量的优劣又直接影
漏窖防治技术在特香型白酒生产中的应用
曾婷婷，吴生文，林
培，付建生，梁小兵
(四特酒有限责任公司，江西樟树331200)
摘要：利用陶坛对渗漏窖池进行修补防治，结果表明：在窖池底部铺设特香型人工窖泥和陶坛能有效解决窖池
渗漏问题，所产基酒质量均达到特香型优级酒基标准，口感评分略高于正常班组酒基。关键词：防渗漏；陶坛；特香型人工窖泥中图分类号:T S262.3;T S261.4
文献标识码:B
收稿日期:2020-07-16
作者简介：曾婷婷(1984-)，女，江西新余人，硕士，高级工程师，主要从事白酒酿造应用研究。
第48卷第2期2021年3月
酿酒LI Q U O R
M A K I N G
V ol .48.№.2M ar .,2021
文章编号:1002-8110(2021)02-0107-05
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