常用染步骤HE,马松,糖原
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苏木素伊红染液
一.苏木素伊红染液套装组合:
Harris苏木素染液50ml
水溶性伊红染液50ml
苏木素染返兰液50ml
概述:
苏木素伊红染是组织病理学经典的常规染方法,历经上百年的应用历史至今仍无可替代。因此,苏木素伊红染是病理切片制作中极为重要的技术环节。
二.染方法:
1. 切片脱蜡二甲苯I 5分钟,
2. 切片脱蜡二甲苯II 5分钟,
3. 100%1、100%2、95%1、95%2、70%梯度乙醇各30,秒钟,
4. 自来水流水冲洗1分钟,
5. 苏木素染5—8分钟(依染液新旧调整染时间),
6. 自来水流水冲洗1分钟,
7. 进入分化液分化数秒钟,
8. 自来水流水冲洗1分钟,
9. 进入返兰液处理5—10秒钟,
10. 自来水流水冲洗2分钟,
11. 进入伊红染液1-3分钟,
12. 自来水冲洗30—60秒钟,
13. 75%I、75%II乙醇脱水分各10秒钟,
14. 95%乙醇1、95%乙醇2各脱水10秒钟,
15. 100%乙醇1、100%2脱水30-60秒钟,
16. 二甲苯1、二甲苯2透明各1分钟,
17. 中性树胶封固。
三.染技术要点:
苏木素染液在静止由于时染液表面于空气中的氧分子接触极液体代表面水分蒸发会产生氧化作用并形成氧化膜。因此,在使用前应使用滤纸吸附去除氧化膜以免污染切片。一般情况下应建立良好的使用习惯,每隔2~3天将苏木素染液彻底过滤一次。为保证HE切片的恒定染质量建议每500ml苏木素染液染1200~1500张切片为宜。
苏木素染液在用于免疫组织化学染的的复染时应注意调控染时间,核染过浅不易辨识组织结构而核染过深则喧宾夺主,一般复染的时间应控在10-30秒以内。此外,复染后的分化和返兰步骤不应省略否则将造成整张切片呈淡蓝,使DAB呈现土黄。
分化和返兰步骤是HE染关键点,应在染实践中依据分化液和返兰液的新旧调整分化和返兰的处理时间。在使用自动染机染切片是应注意在机械臂运行时分化液仍在进行分化反应,应适当缩短分化液处理掉时间或用70%乙醇适当稀释分化液以免分化过度。
70%乙醇对伊红具有分和脱作用,使伊红在不同的组织结构和病变区域形成不同层次的红。因此,伊红染以适当深染为宜,以便在70%乙醇分脱水后能显现明显的阶和深度。
100%乙醇和二甲苯的纯净度是保证染后切片透明度和显微镜下清晰度的重要前提,在湿度较大的情况下应注意试剂的更换。
干燥后封片是造成细胞核结构不清的重要原因之一,应尽可能避免。
一.Masson三染试剂盒:
立春红复红50ml
亮绿50ml
磷钼酸50ml
醋酸50 X 2 ml
Masson染是最为常用的结缔组织染法,此法多用于观察病变组织中纤维结缔组织的增生和分布,纤维性肿瘤与肌源性肿瘤的鉴别。对酒精性肝硬化/坏死后性肝硬化及各型肝炎导致的小叶汇管区纤维组织增生程度的差别具有重要价值。 Masson染在肾穿刺活检中可以用于判别在肾小球毛细血管网的系膜氏和上皮下是否存在嗜复红蛋白的沉积,对于肾脏疾病的病理诊断有重要意义。
二.染方法:
1. 切片脱蜡至水,
2. Harris’s苏木素染胞核10分钟水洗,
3. 分化、水洗,返蓝、水洗,
4. 入Masson复合染液染10-20分钟,
5. 0.2%醋酸速洗1—5秒钟两次,
6. 1%磷钼酸处理5—8分钟,
7. 0.2%醋酸速洗1—5秒钟两次,
8. 1%亮绿SF染2—4分钟,
9. 0.2%醋酸速洗1—5秒钟两次,
10. 直接用新鲜95%乙醇分化20—30分钟,
11. 脱水、透明、封片。
网状纤维染
一.网状纤维染试剂盒:
高锰酸钾50ml
草酸50ml
硫酸铁氨50ml
氨性银(请置4℃冷存) 50ml
氯化金50ml
海波50ml
网状纤维由网状蛋白组成,由于在银染中被染成黑又称为嗜银纤维。在化学构成上网状纤维和胶原纤维基本相同因此在病理条件下网状纤维可以转变为胶原纤维。在人体的肝脏、脾脏、淋巴组织、血管等器官内广泛分布着网状纤维。
网状纤维染在病理诊断和病理学科学研究中有重要的价值及广泛的应用。主要用于癌与肉瘤的鉴别、血管内皮肿瘤与血管外皮肿瘤的鉴别、脑膜瘤与星形细胞瘤的鉴别、以及肝炎肝硬化病变中肝小叶和肝细胞的病理变化。
二.染方法:
1. 切片脱蜡至水,
2. 入高锰酸钾氧化5分钟、水洗,
3. 入草酸漂白1—2分钟、水洗30秒、蒸馏水洗,
4. 入硫酸铁氨媒染5分钟、水洗5秒、蒸馏水洗5秒,
5. 滴加氨性银2ml染1-1.5分钟、蒸馏水洗5秒,
6. 入甲醛还原液1分钟(新鲜配置10%甲醛)、水洗2分钟,
7. 入氯化金调1分钟、水洗,
8. 硫代硫酸钠处理3分钟,
9. VG 复染或苏木素浅染胞核(可省略),
10. 脱水、透明、封片。
