HE染步骤

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HE石蜡切片制作的基本过程

1、取材与固定: 
从人或动物新鲜尸体上取下组织(一般厚度不超过05厘米)投入预先配好的固定液中(10%福尔马林,Bouin氏固定液等)使组织、细胞的蛋白质变性凝固,以防止细胞死后的自溶或细菌的分解,从而保持细胞本来的形态结构。

2、脱水透明:
一般用由低浓度到高浓度酒精作脱水剂,逐渐脱去组织块中的水份。再将组织块置于既溶于酒精,又溶于石蜡的透明剂二甲苯中透明,以二甲苯替换出组织块的中酒精,才能浸蜡包埋。

3、浸蜡包埋:
将已透明的组织块置于已溶化的石蜡中,放入溶蜡箱保温。待石蜡完全浸入组织块后进行包埋:先制备好容器(如折叠一小纸盒),倒入已溶化的石蜡,迅速夹取已浸透石蜡的组织
块放入其中。冷却凝固成块即成。包埋好的组织块变硬,才能在切片机上切成很薄的切片。

4、切片与贴片: 
将包埋好的蜡块固定于切片机上,切成薄片,一般为5—8微米厚。切下的薄片往往皱折,要放到加热的水中烫平,再贴到载玻片上,放45恒温箱中烘干。

5、脱蜡染: 
常用HE染,以增加组织细胞结构各部分的彩差异,利于观察。苏木精(HematoxylinH)是一种碱性染料,可将细胞核和细胞内核糖体染成蓝紫,被碱性染料染的结构具有嗜碱性。伊红(EosinE)是一种酸性染料,能将细胞质染成红或淡红,被酸性染料染的结构具有嗜酸性。染前,须用二甲苯脱去切片中的石蜡,再经由高浓度到低浓度酒精,最后入蒸馏水,就可染。

HE染过程是: 
将已入蒸馏水后的切片放入苏木精水溶液中染数分钟。 
酸水及氨水中分,各数秒钟。 
流水冲洗1小时后入蒸馏水片刻。 
70%和90%酒精中脱水各10分钟。 
入酒精伊红染液染2—3分钟。

6、脱水透明: 
染后的切片经纯酒精脱水,再经二甲苯使切片透明。

7、封固: 
将已透明的切片滴上加拿大树胶,盖上盖玻片封固。待树胶略干后,贴上标笺,切片标本就可使用。

.甲苯胺蓝液染方法:   ()1.甲苯胺蓝液   甲苯胺蓝0.5g 蒸馏水定容至100ml   2.冰醋酸液   冰醋酸0.5ml蒸馏水定容至100ml   染步骤   1.组织切片常规脱蜡至水   2.入甲苯胺蓝液3
0min   3.稍水洗   4.入冰醋酸液分化,直到胞核和颗粒清晰。   5.稍水洗,用冷风吹干   6.二甲苯透明,中性树胶封固   ()   切片脱腊至水。   蒸馏水浸洗3次。   ③0.1%甲苯胺蓝液浸染10min   水洗,洗去多余染液。   各级酒精脱水。   二甲苯透明,中性树胶封固。石蜡切片常规脱蜡至水;滴加1%甲苯胺蓝液染5min8min(染液配制:1g甲苯胺蓝溶于100ml蒸馏水,滴加媒染剂2ml,置于60温箱2h,然后移 置室温备用)蒸馏水洗;95%乙醇急速分化;无水乙醇脱水,二甲苯透明中性树胶封固.

本文发布于:2023-05-09 17:51:40,感谢您对本站的认可!

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标签:切片   染色   组织   石蜡
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